1、培养基的配制及灭菌实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。（2）n源：包括无机氮和有机氮。（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。微量元素：cu、
2、K、mg、s、p、Zn。有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水
3、沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121、1530min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若是含糖培养基，110、30min。（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22m）。除病菌需更小。五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.
4、5g琼脂。加上棉塞，迅速拔出能发出清脆声响即可，用报纸包住并系好麻绳。2、包移液管和培养皿（1）包一包培养皿（一包五个）：用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。（2）包2支移液管：用棉花塞好移液管尾部，露出12cm即可。取长条报纸，一端折90角，紧密严实沿30角卷好移液管，尾部叠好防止散开。3、高压蒸汽灭菌（1）灭菌前要先看水位是否合适。（2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培养基。（3）加盖，两两对称旋紧螺栓。（4）设定条件：0.1mpa、121、20min，进行加热。（5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。（6）结束后，自然降温，压
5、力降为0后，打开排气阀取出物品。4、干热灭菌（1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。（2）设定条件：160170，恒温2h。（3）结束后，切断电源，自然降温，降到70以下后开箱取物。六、思考题：1、你配制的是什么培养基？选择培养基。2、选择培养基与鉴别培养基的区别？这两种培养基的应用情况。选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时，可添加适量的青霉素、四环素或链霉素，以抑制细菌和放线菌的生长。鉴别培养基是
6、在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基，此类培养基一般用于鉴定不同微生物。如emb即伊红美乳糖造就基。大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸，可染上酸性伊红，伊红和美兰结合，菌落被染成深紫色，从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。篇二：培养基的制备与消毒灭菌实验报告培养基的制备与消毒灭菌实验报告实验目的1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培
7、养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对ph要求不一样雷菌和酵母的培养基的ph一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的ph一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的ph调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱
8、度所带来不利的影响。高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和nacl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素
9、，而nacl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其ph调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gnacl5.0g水1000mlph7.47.6实验仪器与药品1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1molLnaoh、1molLhcl。2.仪器或其他用具：试管、三角瓶
10、、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、ph试纸（ph5.5-9.0）、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。实验步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备1.称量（假定配制1000ml培养基）按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、nacl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。2.溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加
11、热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。3.调ph在未调ph前，先用精密ph试纸测量培养基的原始ph，如果偏酸用滴管向培养基中逐滴加入1molLnaoh，边加边搅拌，并随时用ph试纸测其ph，直至ph达7.4-7.6。反之，用1molLhcl进行调节。4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。可以省去(本实验勿需过滤)。5.分装液体分装分装高度以试管高度的14左右为宜。分装三角瓶的虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量
12、的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。固体分装分装试管，其装量不超过管高的15，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。半固体分装一般以试管高度的13为宜，灭菌后垂直待凝。6.加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。7.包扎加塞后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。
13、三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。8.灭菌将上述培养基以0.103mpa，l21，20min高压蒸气灭菌。9.摆斜面将灭菌的试管培养基冷至50左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜l0.无菌检查将灭菌培养基放入37的恒温箱中培养24-48h以捡查灭菌是否彻底。注意事项1.蛋白胨很容易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称量时严防药品混杂一把牛角匙用于一种药品或称取一种药品后，洗净擦干再称职另一药品瓶盖也不要盖错。2.在琼脂溶化过程中应控制火力，以免培养基因
14、沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。3.对于有些要求ph较精确的微生物，其ph的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。ph不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制ph低的琼脂培养基时若预先记好ph并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性ph条件下灭菌，再调整ph。4.分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污面塞而引起污染。（二）高压蒸汽灭菌法步骤1.加水使用前在锅内加入适量的水，加水不可过少，以防将灭菌锅烧干，引
15、起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物积水。水面与三角架相平为宜2.装料将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。3.加盖盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。4.加热排气加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持23min以排除冷空气。如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排除，然后将排气阀关闭。5.加压将排气阀关闭6.保压当压力升至0.1mpa时，温度达121，此时应注意观察，控制热源。保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。7.自然降压当压力表降至“0”处，稍停，使温度继续降至100以下后，
16、打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。注意：切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在100以上时开启排气阀，否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。压力降到“0”时，方可打开排气阀。8.保养灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。2.调ph不要过头。3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oc以下放物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可
17、太猛太快，滤膜要注意清洗保存。陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与消毒灭菌姓名学号专业批次/层次指导教师学习中心实验报告篇三：实验一微生物培养基的制备与灭菌实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时）一、目的要求1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作
18、以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的naoh和1mol/Lhcl溶液。2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。3、其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。（二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制（1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。注意：称量药品时，一定要用称量
19、纸而不能用滤纸。称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。（2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。（3）调ph：一般用ph试纸测定培养基的ph，可用1mol/Lnaoh或1mol/Lhcl溶液进行调节。调节ph时，应逐滴加入naoh或hcI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用ph试纸测试，直至达到所需ph为止。注意：ph值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。2、制备液体培养基（1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。注意：
20、倒溶液时不要把瓶口沾湿。包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。3、制备固体培养基（1）平板培养基A、用量筒准确量取100ml培养基，倒入250ml三角瓶中，加入2g琼脂粉，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。b、将洗净烘干的培养皿用报纸包扎好，灭菌。c、在超净工作台中，将装在三角瓶中已灭菌的琼脂培养基冷至50左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开，倾入10-15ml培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转
21、平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（2）斜面培养基A、用量筒量取100ml培养基，倒入一个烧杯中，加入2g琼脂粉，置于石棉网上加热，用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。b、将洗净烘干的试管放置在试管架上，用注射器将融化琼脂粉的培养基倒入试管至试管高度的1/4处。注意：不要将试管口弄脏。c、待培养基冷却凝固后，塞上棉塞，以2支或4支为一组，用报纸将试管口包扎好，灭菌。D、灭菌后，趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总长的1/2。10无菌检查将灭菌的培养基放入37温箱中培养2448h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。（三）培养基的灭菌培养
22、基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。（四）培养基的灭菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1-2管（瓶），置于37温箱中培养1-2天，确定无菌后方可使用。五、实验内容1、根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行烘干和包扎。2、根据要求配制微生物培养基。3、掌握用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌。4、掌握液体培养基、平板培养基和斜面培养基的制备。六、实验报告1、记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。2、记录所做培养基的无菌检查结果。七、实验思考题1、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替？2、
23、配制培养基时为什么要调节ph？3、高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？4、高压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？5、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培养基如何进行无菌检查?6、请设计实验对饮料进行无菌检查。附录高压蒸汽灭菌技术一、目的要求了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。二、实验材料上述配制的培养基，包扎的培养皿、试管，高压蒸汽灭菌锅，注射器，镊子，玻璃涂棒。三、基本原理在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基和工作场所进行灭菌和消
24、毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的营养体、芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的。四、操作步骤高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定的压力下保持15-30分钟进行灭菌。此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌
25、锅内的压力，从而使沸点增高，获得高于100的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在相同的温度下，湿热灭菌的效果好于干热灭菌。有三点原因：1、在湿热灭菌中菌体吸收水分，蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量的增加，所需凝固温度降低；2、湿热灭菌中蒸汽的穿透力比干燥空气大；3、蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量的汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面的温度，从而增加灭菌效力。实验室常用的灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅和自控式灭菌锅，其结构和工作原理是相同的。本实验介绍的是半自控高压蒸汽灭菌锅，自控式灭菌锅的使用可参考厂家说明书。具体操作步骤如下：1、加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入
26、适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。2、装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3、加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。4、排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已
27、排尽，沸腾后约需3分钟。5、升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。6、保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所需的时间。如本实验中采用0.1mpa，121.5，20分钟灭菌。注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。7、降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品。压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。8、无菌检查：将已灭菌的培养基放入37恒温培养箱培养24h，无杂菌生长后即可使用。
