1、L苯丙氨酸质量标准与及检验规程L苯丙氨酸质量标准与及检验规程目 的：规范检验操作，确保检验结果的准确可靠。适用范围：适用于L-苯丙氨酸的检验。责 任 者：化验员。名 称：L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine）化学名：L-氨基-苯丙酸（L-Amino-phenylpropionic Acid）结构式：分子式：C9H11NO2 分子量：165.19 CAS: 63-91-2一、中国药典2005年版（CP2005）本品为L-氨基-苯丙酸。按干燥品计算，含C9H11NO2不得少于98.5%。在热水中易溶，在水中略溶，在乙醇中不溶；在稀酸或氢氧化钠试液中易溶。检验操作规程：1.性状：本品为白色结
2、晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。1.1取本品适量于白色干净纸上观察，可轻闻其味道。 2.比旋度：本品比旋度范围为33.0至35.02.1样品溶液：取本品1g，精密称定至0.0001g，加水溶解并稀释成50ml的溶液（每1ml中约含20mg的溶液）。样品溶解一定要完全，可用超声机助溶，溶解完溶液需澄清。2.2空白溶剂：取溶解样品用超纯水适量。2.3测定：用读数至0.001并经过检定的旋光计检测。将测定管用空白溶剂冲洗数次，缓缓注入空白溶剂适量（注意勿使发生气泡，测定管两端的玻璃镜片要擦拭干净），置于旋光计内校正读数，即空白溶剂的旋光度要为0。校正完毕以后用相同的方法检测样品溶液并记录下来，用同法读
3、取旋光度3次，取3次的平均数。2.4计算： 比旋度VL m （1W）式中：V稀释倍数；所测旋光度的均值；L测定用管的长度（dm） m称样量；W样品的干燥失重量2.5以上溶液及测定的过程一定要调节温度至200.53.鉴别：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集983图)一致。4.酸度：本品的pH值应为5.46.0。4.1pH计校正用标准缓冲液的配置。4.1.1邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液（pH4.0）：精密称取在1155干燥23小时的邻苯二甲酸氢钾KHC8H4O410.21g，加水使溶解并稀释至1000ml。4.1.2 磷酸盐标准缓冲液（pH6.8）：精密称取在1155干燥23小时的无水磷酸氢二
4、钠3.55g与磷酸二氢钾3.40g，加水使溶解并稀释至1000ml。4.1.3硼砂标准缓冲液（pH9.2）：精密称取硼砂Na2B4O710H2O3.81g（注意：避免风化），加水使溶解并稀释至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免与空气中二氧化碳接触。4.2pH计的校正：取邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液对仪器进行校正，使仪器示值与表列数值一致。温度邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液磷酸盐标准缓冲液（pH6.8）硼砂标准缓冲液04.016.989.6454.006.959.40104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.016.869.18304.026.85
5、9.14354.026.849.10404.046.849.07454.056.839.04504.066.839.01554.086.838.99604.096.848.96仪器校正后，再用磷酸盐标准缓冲液核对仪器示值，误差应不大于0.02pH单位。若大于此偏差，则应小心调节斜率，使示值与磷酸盐标准缓冲液的表列数值相符。重复上述定位与斜率调节操作，至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于0.02pH单位，否则，须检查仪器或更换电极后再行校正至符合要求。4.3样品的测定：4.3.1样品液的配制：取本品0.20g，加水20ml完全溶解后，待测。4.3.2测定法：将已校正好的pH计电极帽轻轻取下
6、，用纯化水充分洗涤电极，然后用滤纸将水吸尽，将电极放入所测样品溶液中，轻轻搅动10s后让它静止并观察读数的变化，待稳定后即可记录数据。5.透光率：在430nm的波长处测定透光率，不得低于98.0%。5.1配套吸收池的校正：将仪器调至波长430nm，开机预热约30分钟。用纯化水润洗吸收池35次后，装入纯化水约4/5后用擦镜纸将吸收池两边的光滑面擦拭干净，在“A”状态下调“0”，在“T”状态下调“100%”将另一吸收池也用纯化水润洗吸收池35次后，装入溶剂约4/5后同样用擦镜纸将吸收池两边的光滑面擦拭干净，在相同波长测定透光率，透光率应在99.8%100.2%之间，如不在此范围，须把吸收池用洗液浸
7、泡5分钟后，用水洗净，重复以上操作符合规定后，方可进行下一步检测。5.2样品液的配置：取本品0.50g，加纯化水25ml完全溶解后，待测。5.3样品的测定：将仪器调至所需状态下即“T”（测透光率）。用溶解好的样品液润洗第二个吸收池35次后，装入溶剂约4/5后用擦镜纸将吸收池两边的光滑面擦拭干净然后放入槽中进行检测，每检测一批样须验证仪器是否处于正常状态，最后读取数据。6.干燥失重：减失重量不得过0.2%6.1扁型称量瓶的恒重：取扁型称量瓶，在105干燥1小时，取出置干燥器冷却至室温（约30分钟），精密称重后，再置105干燥1小时，取出置干燥器冷却至室温（约30分钟），精密称重，直至连续两次干燥
8、后称重的差异在0.3mg以下，方可进行以下步骤。6.2检测法：取供试品，混合均匀。分取约1g，置于105下干燥至恒重的扁形称瓶中（供试品干燥时，应平铺在扁形称瓶中，厚度不可超过5mm）精密称定。放入烘箱进行干燥时，应将瓶盖半开进行干燥，3个小时后取出。取出时，须将称瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品，应在干燥后取出置干燥器放冷至室温（约30分钟），然后称定重量。称定扁形称量瓶和供试品以及干燥后的恒重，均应准确至0.1mg位。6.3计算： 干燥失重%W1W2100%W1W0式中：W0空瓶重(g); W1供试品+瓶重(g); W2干燥后供试品+瓶重(g)7. 炽灼残渣：遗留残渣不得过0.1%7.1坩埚的
9、恒重：将坩埚在600炽灼3小时，取出置干燥器冷却至室温（约60分钟），精密称重后，再置600炽灼2小时，取出置干燥器冷却至室温（约60分钟），精密称重，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下，方可进行以下步骤。7.2样品的测定：取供试品2.0g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，在电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，再放入600的高温炉中炽灼使完全灰化，3个小时后关闭高温炉待炉温降至300左右再移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在600炽灼至恒重，即得。7.3计算： 炽灼残渣%W2W0100%W1W0式中：W0空坩埚重(g);
10、W1供试品+坩埚重(g); W2炽灼后供试品+坩埚重(g)8.重金属：含重金属不得过百万分之十。8.1试剂的配制：8.1.1标准铅溶液的制备：称取在105干燥至恒重硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸 5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Pb）。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。8.1.2氨试液：取浓氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得8.1.3醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或
11、5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5，用水稀释到100ml，即得。8.1.4硫代乙酰胺试液：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒，冷却，立即使用。8.2检测法：取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中
12、用同法蒸干后，加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液2.0ml，再用水稀释成25ml；再在两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试品管中显出的颜色与对照品管比较，不得更深。9.砷盐：含砷盐不得过百万分之一。9.1试剂的配制：9.1.1标准砷溶液：精密称取在105干燥至恒重的三氧化二砷 0.132g，置 1000ml量瓶中，加 20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸 10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10ml，置 1000ml量瓶中，加稀硫酸
13、10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每 lml相当于1ug 的As）。9.1.2碘化钾试液：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。（本液应临用新制）9.1.3酸性氯化亚锡试液：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过，即得。（本液配成后3个月即不适用）9.1.4乙醇制溴化汞试液：取溴化汞2.5g，加乙醇50ml，微热溶解，即得。（本液应置玻璃塞瓶内，在暗处保存）9.1.5溴化汞试纸：取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。（本试纸应置棕色磨口塞玻璃瓶中保存）9.1.6醋酸铅试液：取醋酸铅10g，加新沸过的冷水溶解后，滴加醋酸使溶液
14、澄清，再加新沸过的冷水使成100ml，即得。9.1.7醋酸铅棉花：取脱脂棉花，浸入醋酸铅试液与水等容混合液中，湿透后，沥去过多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，置棕色磨口塞玻璃瓶中保存。9.2检测法。9.2.1标准砷斑制备。取醋酸铅棉花（60100mg）撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管中，装管高度为6080mm。于旋塞的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖并旋紧。精密量取标准砷溶液2ml，置测砷仪三角瓶中，加盐酸5ml与水 21ml，再加碘化钾试液 5ml与酸性氯化亚锡试液 5滴，在室温放置 10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法
15、装妥的导气管密塞于 三角瓶上，并置2540水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。9.2.2样品检测取样品2g，置测砷仪三角瓶中，照标准砷斑的制备，自“加盐酸5ml与水 21ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。10.铁盐：含铁量不得过百万分之十。10.1试剂的配制：10.1.1稀盐酸（9.5%10.5%）：取盐酸234ml，缓缓加入适量水中，边加边搅拌，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。10.1.2硫氰酸铵试液（30%）：取硫氰酸铵30g，加水使溶解成100ml，摇匀，即得。10.1.3标准铁贮备液（100g的Fe/ml）：取硫酸铁铵0.863g，置1000
16、ml量瓶中，加水适量使溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得。10.2样品的检测：称取1g样品于小烧杯中，加水5ml，加稀盐酸4ml使样品溶解，加过硫酸铵0.05g，转移至纳氏比色管中，加水至35ml。最后加硫氰酸铵试液3ml，用水稀释至50ml，摇匀，即得样品管。精密量取0.1ml的标准铁贮备液于纳氏比色管中，加25ml水，加稀盐酸4ml，过硫酸铵0.05g，再加硫氰酸铵试液3ml，用水稀释至50ml，摇匀，即得标准管。在白纸上比较两管颜色，样品管颜色应该浅于标准管颜色。其中两管的操作应同时进行。11.硫酸盐：含硫酸根量不得过万分之二。11.1试剂的配制：11.1.1稀盐酸（9
17、.5%10.5%）：取盐酸234ml，缓缓加入适量水中，边加边搅拌，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。11.1.2氯化钡试液（25%）：取氯化钡的细粉25g，加水使溶解成100ml，摇匀，即得。11.1.3标准硫酸钾溶液（100g的SO4/ml）：取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。11.2样品的检测：称取0.7g样品于小烧杯中，加水5ml，加稀盐酸2ml使样品溶解，转移至纳氏比色管中，加氯化钡试液5ml，用水稀释至50ml，摇匀，放置10min即得样品管。精密量取1.4ml的标准硫酸钾溶液于纳氏比色管中，加25ml水，加稀盐酸2ml，
18、加氯化钡试液5ml，用水稀释至50ml，摇匀后放置10min即得标准管。在黑色背景下比较两管颜色，样品管颜色应该浅于标准管颜色。其中两管的操作应同时进行。12.氯化物：含氯离子量不得过万分之二。12.1试剂的配制：12.1.1稀硝酸（9.5%10.5%）：取硝酸105ml，缓缓加入适量水中，边加边搅拌，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。12.1.2硝酸银试液（0.1mol/L）：取硝酸银17.5g，加水使溶解成1000ml，摇匀，即得。12.1.3标准氯化钠贮备液（100g的Cl/ml）：取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。12.2样品
19、的检测：称取0.3g样品于小烧杯中，加稀硝酸10ml试样品溶解。加水25ml后转移至纳氏比色管中，加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，在暗处放置5min即得样品管。精密量取标准氯化钠贮备液0.6ml于纳氏比色管中，加水25ml溶解，加稀硝酸10ml，加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，在暗处放置5min即得标准管。在黑色背景下比较两管颜色，样品管颜色应该浅于标准管颜色。其中两管的操作应同时进行。 13.含量测定：按干燥品计算，含量不得少于98.5%。13.1试剂的配制：13.1.1高氯酸滴定液(0.1mol/L)：取无水冰乙酸7500ml，加入高氯酸（70%72
20、%）85ml，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐230ml，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰乙酸适量使成10000ml,摇匀，放置24小时，即得。然后再用已经干燥至恒重的邻苯二甲酸氢钾标定具体浓度。13.1.2结晶紫指示液：取结晶紫0.5 g，加冰乙酸100ml使溶解，摇匀，即得。13.2样品的滴定：称取本品约0.13g，精密称定，放入250ml三角瓶中，加无水甲酸3ml使样品完全溶解后，再加冰醋酸50ml，加入结晶紫指示液2滴，立即用已标定的高氯酸滴定液滴定（每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于16.52mg的C9H11NO2），溶液颜色由紫色变至蓝绿色为终点。同时另取一个空瓶进
21、行空白试验，即加入无水甲酸3ml，冰醋酸50ml，加入结晶紫指示液2滴后滴定至终点。记录滴定的体积和滴定时的温度。13.3计算： 含量%C （VV0） 0.1652100%1 + 0.0011 （tt0） m （1W）式中：C高氯酸滴定液的准确浓度（mol/L）；V样品滴定时消耗的滴定液的体积； V0空白试验中消耗的滴定液体积；t滴定时的室温；m样品的称样量；t0标定滴定液时的室温； W样品的干燥失重量14.铵盐 取本品0.10g，依法检查(附录 K)，与标准氯化铵溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更深(0.02%)。15.其他氨基酸 取本品，精密称定，加水制成每1ml中含6mg的溶液，照薄
22、层色谱法(附录 B)试验，吸取上述溶液5l，点于硅胶G薄层板上，以正丁醇-水-冰醋酸(5:2:1)为展开剂，展开，晾干，喷以茚三酮的丙酮溶液(150)，在90加热至显色，立即检视，应只显一个紫色斑点。16.细菌内毒素 取本品，加入细菌内毒素检查用水，并加热至80使其溶解，依法检查(附录 E)，每1g苯丙氨酸中含内毒素的量应小于25EU（供注射用）。【类别】氨基酸类药。【贮藏】密封保存。二、美国食品化学法典第五版（FCCV）【描 述】L-苯丙氨酸为无色或白色片状结晶，或白色结晶性粉末，1g本品可溶解于35mL的水中，微溶于乙醇、稀酸以及碱性氢氧化物溶液中。在283左右时熔解，1:100的水溶液其
23、pH为5.46.0。功能 营养物【要 求】鉴别 在相同波长下，按照相同的测试条件，样品的红外吸收谱图应与标准色谱图一致。含量 折干计算，应不小于98.5%且不大于101.5%铅 不大于5 mg/kg干燥失重 不大于0.2%比旋度 D20：33.235.2（折干计算）；或者D25：32.7 34.7（折干计算）灼烧残渣 不大于0.1%【检 验】含量 1.试剂的配制：1.1高氯酸滴定液(0.1mol/L)：取无水冰乙酸7500ml，加入高氯酸（70%72%）85ml，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐230ml，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰乙酸适量使成10000ml,摇匀，放置24小时，即得
24、。然后再用已经干燥至恒重的邻苯二甲酸氢钾标定具体浓度。1.2结晶紫指示液：取结晶紫0.5 g，加冰乙酸100ml使溶解，摇匀，即得。2.样品的滴定：称取本品约0.3g，精密称定，放入250ml三角瓶中，加无水甲酸3ml使样品完全溶解后，再加冰醋酸50ml，加入结晶紫指示液2滴，立即用已标定的高氯酸滴定液滴定（每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于16.52mg的C9H11NO2），溶液颜色由紫色变至蓝绿色为终点。同时另取一个空瓶进行空白试验，即加入无水甲酸3ml，冰醋酸50ml，加入结晶紫指示液2滴后滴定至终点。记录滴定的体积和滴定时的温度。3.计算： 含量%C （VV0） 0.165
25、2100%1 + 0.0011 （tt0） m （1W）式中：C高氯酸滴定液的准确浓度（mol/L）； V样品滴定时消耗的滴定液的体积; V0空白试验中消耗的滴定液体积；t滴定时的室温；m样品的称样量；t0标定滴定液时的室温；W样品的干燥失重量铅 依据铅限度检测方法，附录IIIB，样品溶液的制备参考有机化合物的方法，标准铅（Pb）离子溶液控制在5ug之下。干燥失重 依据干燥失重的检测方法，附录IIC，将样品放置105烘干3小时。1.扁型称量瓶的恒重：取扁型称量瓶，在105干燥1小时，取出置干燥器冷却至室温（约30分钟），精密称重后，再置105干燥1小时，取出置干燥器冷却至室温（约30分钟），精
26、密称重，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下，方可进行以下步骤。2.检测法：取供试品，混合均匀。分取约1g，置于105下干燥至恒重的扁形称瓶中（供试品干燥时，应平铺在扁形称瓶中，厚度不可超过5mm）精密称定。放入烘箱进行干燥时，应将瓶盖半开进行干燥，3个小时后取出。取出时，须将称瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品，应在干燥后取出置干燥器放冷至室温（约30分钟），然后称定重量。称定扁形称量瓶和供试品以及干燥后的恒重，均应准确至0.1mg位。3.计算： 干燥失重%W1W2100%W1W0式中：W0空瓶重(g); W1供试品+瓶重(g); W2干燥后供试品+瓶重(g)比旋度 依据比旋度的检测方法，
27、附录IIB，将2 g的干燥样品充分溶解，制成100mL的溶液，依法检测。1.样品溶液：取本品1g，精密称定至0.0001g，加水溶解并稀释成50ml的溶液（每1ml中约含20mg的溶液）。样品溶解一定要完全，可用超声机助溶，溶解完溶液需澄清。2.空白溶剂：取溶解样品用超纯水适量。3.测定：用读数至0.001并经过检定的旋光计检测。将测定管用空白溶剂冲洗数次，缓缓注入空白溶剂适量（注意勿使发生气泡，测定管两端的玻璃镜片要擦拭干净），置于旋光计内校正读数，即空白溶剂的旋光度要为0。校正完毕以后用相同的方法检测样品溶液并记录下来，用同法读取旋光度3次，取3次的平均数。4.计算： 比旋度VL m （1
28、W）式中：V稀释倍数；所测旋光度的均值；L测定用管的长度（dm） m称样量；W样品的干燥失重量5.以上溶液及测定的过程一定要调节温度至200.5灼烧残渣 依据灼烧残渣的检测方法，附录IIC，灼烧1g的样品。1.坩埚的恒重：将坩埚在600炽灼3小时，取出置干燥器冷却至室温（约60分钟），精密称重后，再置600炽灼2小时，取出置干燥器冷却至室温（约60分钟），精密称重，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下，方可进行以下步骤。2.样品的测定：取供试品2.0g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，在电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，再放入6
29、00的高温炉中炽灼使完全灰化，3个小时后关闭高温炉待炉温降至300左右再移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在600炽灼至恒重，即得。3.计算： 炽灼残渣%W2W0100%W1W0式中：W0空坩埚重(g)； W1供试品+坩埚重(g)； W2炽灼后供试品+坩埚重(g)包装和存储 密闭容器中避光保存。*备注：附录部分可以参考CP2005相对应的详细附录三、美国食品化学法典第四版（FCCIV）【描 述】L-苯丙氨酸为无色或白色片状结晶，或白色结晶性粉末，1g本品可溶解于35mL的水中，微溶于乙醇、稀酸以及碱性氢氧化物溶液中。在283左右时溶解，1:100的水溶液其pH为5.46.0。食品中的功能
30、 营养物，食品添加物【要 求】鉴别 A、取0.1%试样液5mL, 加水合茚三酮试液1mL，加热，呈现红紫色。 B、取1%试样液5mL, 加几滴重铬酸钾指示液，有特殊气味产生。 C、取10mg样品，加上500mg的硝酸钾，以及2mL的硫酸，水浴中加热混合物10分钟，然后加入10ml的1N氢氧化钠溶液，呈现红紫色。含量 折干计算，应不小于98.5%且不大于101.5%重金属（以Pb计） 不大于0.002%铅 不大于10 mg/kg干燥失重 不大于0.2%灼烧残渣 不大于0.1%比旋度 D20：33.235.2（折干计算）；或者D25：32.7 34.7（折干计算）【检 验】含量 准确称取大约300mg的样品，溶解于3mL的甲酸和50mL的乙酸中，加入2滴的结晶紫指示剂，用0.1N的高氯酸滴定至青绿色终点。(注意 应在通风橱中操作使用高氯酸，)需滴定空白液（详见总则），并做校正修订。每1ml的0.1N的高氯酸相当于16.52 mg 的C9H11NO2。1.试剂的配制：1.1
