1、市医院微生物实验室生物安全手册生物安全手册市医院检验科一、方针 确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、宗旨通过实验室的设计、安全设备的使用、个体防护装置和措施的完善、严格的管理制度、标准化的操作程序和规程，保证实验室的生物安全。三、检验科生物安全小组：组长: 监督员： 人员组成： 职 责：制订、维护有效的实验室生物安全手册；各专业组组长及安全员负责本组内生物安全措施的制定和落实；生物安全监督员负责定期安排本科人员血清学检查，保存血清，记录结果。定期检查监督各项安全措施，发现问题及时报告进行整改。检验科生物安全管理组织结构院 领 导院长生物安全负责人：监督员：临床室生化室细菌室免疫室血
2、化室门 诊 1、实验室的准入42、实验室的准出53、实验室工作人员的资格和培训64、实验室消毒程序75、实验室废弃物处理96、个人防护制度 107、事故处理制度 118、标本的安全处理 139、菌种、毒株生命保存和生物安全管理制度 1410、传染病疫情报告工作制度1511、实验室内务管理1612、尖锐器具安全使用1813、标本采集运送2014、微生物室平面图2315、参考文献24 市医院检验科编号：Q01日期：年07月 12日版本：第1版共1 页实验室的准入一、 目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、 适用范围：检验科全体工作人员三、 内容：1、 实验室入口须贴上生物危险标志，
3、注明危险因子，生物安全级别。2、 禁止非工作人员进入实验室。外来人员参观实验室须经实验负责人批准方可进入。3、 工作人员进入实验室之前做好个人防护。4、 在实验室工作的人员必须定期接受生物安全培训，知道实验室工作的潜在危险，自愿从事实验室工作。5、 在开展有关传染病源工作时，实验室主任应禁止或限制人员进入实验室，一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室。如患有免疫缺陷或免疫抑制的人。6、 将生物安全程序纳入标准操作规范或生物安全手册，每个专业实验室配备一本，工作人员在进入实验室之前要阅读并按照规程操作。四、 本管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q
4、02日期：年05月 12日版本：第1版共1 页实验室的准出一、 目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、 适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 实验人员必须按规定程序脱去防护服及其它用品后方可离开实验室。2、 离开实验室前必须按专业洗手程序洗手。3、 实验人员离开实验室之前，要确保该实验室未受到污染或污染已经排除。4、 实验室中所使用的所有物品必须经相应的处理后，才能带出实验室。5、 所有实验废弃物都必须经高温灭菌或消毒后方可带离实验室。五、 本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号：Q03日期：年07月 12日版本：第1版共1 页实验室工作人员的资格和培训
5、一、 目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室检验质量。二、 适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立进行工作前还需在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作；2、 实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工作； 3、 实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程。4、 检验科工作人员在开始工作前必须留本底血清进行HBV、HCV、HIV等有关检测，以后定期复检。如有疫苗必须进行免疫注射。所有样品保存及结果登记由负责。 5、 科室要定期召开生物安全会议，总结生物安
6、全防护工作，并做好记录6、 发生安全事故后，应妥善处理，全科应组织讨论，防止事故再次发生。四、本管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q04日期：年07月 12日版本：第1版共2页实验室消毒程序一、目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：空气：1、 抽血室、细菌室、血库每天用紫外线消毒一次（30分钟），并做好记录。2、 其它实验室定期紫外线消毒。3、 实验室无明显污染时，应每天开窗通风换气数次。物表：1、 每天早晨用0.5 %的过氧乙酸擦拭各种台面一次。2、 每天工作结束后用0.2 %的过氧乙酸湿拖地面一次。3、 清洁区的消
7、毒器材（抹布、拖把、容器）不得与污染区或半污染区共用，工作人员手：检验人员结束操作后应立即用肥皂洗手2-3min，搓手使泡沫布满手掌、手背及指间至少10秒，再用流水冲洗。毛巾专用，每天消毒。器材：除已知无传染性器材外，凡直接接触或间接接触过临床标本的器材均视为具有传染性，应进行消毒。1、 金属器材：1) 小的金属器材如接种环，镊子可在安全柜内洒精灯火焰上烧灼灭菌，2) 较大的金属器材或锐利剪刀受污染后可用2%戊二醛浸泡2h后洁净水冲洗，沥干，再用干热或蒸汽灭菌。2、 玻璃器材：白带检验后的玻片，尿常规检查后的试管、血沉管均用1000mg/L的含氯消毒液浸泡1小时后清洗，粪常规检查后的玻片用1%
8、 533消毒液浸泡1小时后清洗，清洗后用160的烤箱烤干备用。3、 纺织品：工作衣每周更换两次，污染的工作衣放固定处由工人清点，打包统一送至洗衣房清洗。4、 贵重仪器：1) 显微镜、离心机、酶标仪、血球仪等各种仪器轻度污染时可用0.2%的含氯消毒液或酒精擦拭，污染严重时用环氧乙烷消毒。2) 若离心时离心管未密闭，试管破裂，液体外溢，应消毒离心机内部，特别是可能受各种病毒或分枝杆菌污染时，宜戴上手套用2%戊二醛擦拭消毒作用30-60min，或整机用环氧乙烷消毒。3) 储血冰箱专用于储存血液和血液成份，定期清洁和消毒，防止污染，每月对冰箱内壁进行生物学监测，不得致病性微生物和霉菌。4) 无菌物品如
9、棉签、棉球等及其容器应在有效期内使用，开启后使用时间不得超过24h 。5) 准确配制消毒液浓度，每天监测消毒液有效浓度，低于有效浓度立即更换。报告单：1、 报告在清洁区打印发放。2、 无法打印的报告单应在微波炉消毒1min后发放。消毒效果监测1、 采集多孔物体表面，光滑物体表面，手指皮肤的洗脱液用涂抹法或倾注法进行活菌计数，以鉴定物品污染程度和鉴定消毒效果。2、 对科室常用的消毒剂进行消毒及有效含量测定，以便了解其有效浓度。3、 消毒剂杂菌量检测，以便了解其灭杀效果。4、 每个高压灭菌物品均应用化学指示卡和指示胶带检测其灭菌效果。5、 对于热灭菌，应用枯草芽孢杆菌（1000000）检测灭菌效果
10、，每周至少检测一次。对高压蒸气灭菌常用嗜热芽孢杆菌（100000）随消毒物品一起灭菌，检测培养物置55培养，每周一次。四、本管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q05日期：年07月 12日版本：第1版共1 页实验室废弃物处理一、目的：确保实验室工作人员安全和实验室环境安全，确保实验室废弃物的安全处理。二、适用范围：检验科全体工作人员、工人。三、内容：1、 废弃标本及其容器应有专门密闭不漏水的污物袋（箱）存放，专人集中消毒后按医疗垃圾处理，每天至少处理一次。2、 实验室内所有医疗垃圾装黄色垃圾袋，生活垃圾装黑色垃圾袋。3、 废弃的血液标本连同试管用0.5%的含氯消毒液或0.5
11、%过氧乙酸至少1小时后进行无害化处理。4、 废弃的其他体液（如尿液、脑脊液、胸腹水等）用1%的含氯消毒剂浸泡消毒1小时后排入污水池。5、 实验室的各种标本：菌种、培养基和其他废弃物在运出实验室前必须进行灭活（如高压、浸泡消毒），需运出实验室灭活的物品必须放在专用的密闭容器中。6、 一次性使用的采血针或其他锐器用后应置于厚壁容器内进行无害化处理。7、 所有移出实验室的废弃物由监督员或各组安全成员与废物收集员进行交接并记录，各种实验室废弃物应在相应的实验室废弃物分类收集登记表上做好记录。四、本管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q06日期：年07月 12日版本：第1版共2 页个
12、人防护制度一、目的：确保实验室工作人员个人安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 在实验室内工作人员须穿工作服，戴口罩、帽子。工作服不得穿出院外。2、 不许在工作区内饮食、吸烟、清洗隐形眼镜和化妆。不许在工作区存放食物和日常生活用品。食物应存放在工作区外专用的橱柜和冰箱中。3、 可能接触潜在传染源或被污染的表面和设备时，要戴手套。当有关传染源工作结束时或手套破损时，要去掉手套。不能戴手套接触“洁净”表面（电话、办公电脑等），也不应戴着手套到实验室外。接触微生物或含有微生物的物品后、脱掉手套后和离开实验室前要洗手。4、 实验室人员接受适当的接种（如乙肝疫苗、卡介苗等）或体检。5、
13、必要时收集从事危险性工作人员的基本血清留底，并根据需要定期收集血清样本，应有检测报告，有问题及时处理。6、 工作人员必须严格遵守生物安全操作规程，定期接受生物安全培训，最在限度地降低事故的发生。7、 实验人员必须对锐器保持高度警惕和采取高度预防措施，包括采血针，注射器和玻片等，禁止用手处理破碎的玻璃器皿，尽量使用塑料器材代替玻璃器材。8、 禁止用手直接从注射器上取下针头，用过的针头禁止折弯、剪断、重新盖帽，必须直接放入防穿透的容器中。9、 可能产生致病性微生物气溶胶或出现溅出的操作包括离心、剧烈振荡或混匀和开启装有传染源的容器均应在生物安全柜或其他物理抑制设备中进行，必要时戴面罩、眼罩。四、本
14、管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q07日期：年05月 12日版本：第1版共2 页事故处理制度一、目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 成立市医院检验科突发安全事故应急小组，组长：，成员：蔡东贵，杨惠聪，蔡瑞彬，曹霜，周艳珍2、 发生实验人员明显暴露于传染源的大事故时，通知科主任和安全责任人到达事故现场，查清情况，确定消毒程序，同时向主管领导和专家报告。3、 发生小范围的污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。随时污染，随时消毒。4、 发生医疗废物流失、泄漏、扩散时，应当采取减少危害的紧急处理措施，对致病人员提供医
15、疗救护和现场救援，同时向院主管部门报告。5、 每次事故都要登记，查找原因，立即改正。6、 确定人员暴露后量否要采取药物预防或进行相关暴露因素的检测。附：实验室事故的处理方法：1、 皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用75%洒精或其它消毒液消毒伤口。2、 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当消毒剂浸泡，如75%酒精或其它皮肤消毒液。3、 粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。4、 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理（如消毒液浸泡）。5、 污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅时，应立即消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主任
16、和安全责任人到达事故现场，查清情况，确定消毒程序。6、 污染：当致病性微生物形成气溶胶时，应马上采取措施控制污染：从污染处疏散人员，但需防止污染扩散。锁门防止人员进入通知负责人到达现场指导消毒工作。必要时对实验室进行熏蒸消毒或喷雾消毒立即向有关领导和专家报告事故经过，并且详细记录事故经过和处理方法。7、 离心管破裂: 立即停止离心机,密闭机盖,半小时后开启.清理玻璃碎片,污染的转子置20%次氯酸钠浸泡24小时,戴结实的手套,用同浓度的消毒液擦拭离心机内腔,次日再擦拭一遍。8、 感染性物质的破碎和溢出: 立即用布盖上(或纸巾),倒上10%次氯酸钠,静置30分钟,将布、纸巾和破碎物品置容器内高压灭
17、菌，再用10%次氯酸钠擦拭污染区域.。污染的纸质资料，将信息拷贝到其他载体后高压灭菌。以上操作均应戴手套。 四、本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q08日期：年07月 12日版本：第1版共1 页标本的安全处理一、目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 各种检验标本都应装置在有盖容器内，需离心的标本应尽量保证离心时盖子未被开启，丢弃的盖子应先经0.5%的过氧乙酸浸泡30分钟。2、 可能导致气溶胶的标本开盖时应加戴口罩、防护镜等。若发生液体溅出，及时用0.5%的过氧乙酸消毒污染处。3、 含中等潜在危害以上的微生物的
18、标本应尽可能地在二级生物安全柜内进行操作。4、 各室所有已检标本在送至焚烧前应先经0.5%的过氧乙酸浸泡处理，废弃标本的运送过程应防止泄露。5、 感染性标本外送时试管须加盖后置于密闭运输罐内送检。同时，试管上应有明显的标记。四、本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q09日期：年05月 12日版本：第1版共1 页菌种、毒株生命保存和生物安全管理制度一、目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 指定专人负责菌种、毒株生命保存和生物安全管理工作。2、 填写菌种、毒株生命保存和使用记录。相关人员要签名。3、 根据不同的菌种
19、、毒株选择半固体培养基。4、 试管贴好标签、标记。5、 对菌种、毒株的操作必须在生物安全柜中进行。6、 取菌前应做好各项准备工作，取出后要做到人菌同室，保证安全，接种后立即密封，置上锁的低温冰箱存放。7、 存于低温冰箱的位置要相对固定，不得倒置。8、 要严格按照标准操作规程进行接种。9、 一旦发现污染或可能污染必须立即进行消毒处理，并报告上级。四、本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q10日期：年07月 12日版本：第1版共1 页传染病疫情报告工作制度一、目的：确保传染性疾病疫情的有效控制，保障工作人员安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 各科室发现疫情
20、时及时填写疫情报告卡，甲、乙类传染病病人就诊时，随时填卡，随时报保健科。要求填卡者字迹清晰，各项栏目均应填写。2、 严格“阳性化验单”的管理。“阳性化验单”不得直接交给病人。原则上性病阳性化验单由检验科通知科室护士交给经治医生填报卡片，或由护士填卡，其余“阳性化验单”由保健科医生取后分发科室，保健科登记备案，发现没有卡片送来而有备案的病人，保健科应立即到相应科室核对，以免漏报，如不属于传染病，则在登记本上注明，以备查对。3、 保健科医生定期到检验科及临床科室检查化验登记本、门诊日志及出院病人登记本，以防漏报、错报，对各科室每天送来的卡片，要审查填卡的完整性，发现有缺页，应立即向有关科室追补。4
21、、 检验申请单应认真填写完整，注明科室，签名字迹清楚，以便检验科登记备案。四、本管理程序的编制编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q11日期：年07月 12日版本：第1版共2 页实验室内务管理一、目的：确保实验室检验工作的有序、高效、安全开展。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1、 工作人员应严格遵守各室相关管理文件和操作规程，规范内务活动使工作处于有绪、有效状态。标本的采集、运送、检验、保存，检验报告的发放，工作区的清洁消毒，检验过程的质量控制等活动均应严格按规范要求进行。并指定专人监督保持良好内务的行为。2、 保持干净、整洁的环境，工作区应时刻保持整洁有序。禁止在工作场所存放
22、可能导致阻碍和绊倒危险的大量一次性材料。3、 所有用于处理污染性材料的设备和工作表面在每班工作结束、有任何漏出或发生了其他污染时应使用适当的试剂清洁和消毒。4、 保持室内清洁卫生。每天对空气、各种物体表面及地面进行常规消毒。在进行各种检验时，应避免污染；在进行特殊传染病检验后，应及时进行消毒，遇有场地、工作服或体表污染时，应立即处理，防止扩散，并将污染情况向上级报告。5、 对漏出的样本、化学品、放射性核素或培养物应在风险评估后清除并对涉及区域去污染。清除时应使用经核准的安全预防措施、安全方法和个人防护装备。（具体参见科室相关文件处理）。6、 内务行为改变时应报告实验室负责人以确保避免发生无意识
23、的风险或危险。7、 实验室行为、工作习惯或材料改变可能对内务和/或维护人员有潜在危险时，应报告实验室负责人，并书面告知内务和维护人员的管理者。8、 在发生事故或漏出导致生物、化学或放射性污染，设备保养或修理之前对每件设备去污染、净化和消毒时，按相关的专用规程处理。9、 食品、饮料及类似物品实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手口”接触可能的其他物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。食品和饮料只应存放于非实验室区域内指定的专用处。冰箱应适当标记以明确其规定用途。实验室内禁止吸烟。10、 化妆品、头发、珠宝、服饰工作人员须穿工作服，戴工作帽，必要时穿隔离衣、胶鞋，戴口罩、手套。除要求符合实验室工
24、作需要的着装外，工作服应干净、整洁。禁止在工作区内使用化妆品和处理隐形眼镜。长发应束在脑后。在工作区内不应配带戒指、耳环、腕表、手镯、项链和其他珠宝。11、 个人物品个人物品、服装和化妆品不应放在有规定禁放的和可能发生污染的区域。六、 本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号： Q12日期：年07月 12日版本：第1版共2 页 尖锐器具安全使用一、目的：确保实验室工作人员安全,确保实验室环境安全。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：实验室尖锐器具通常包括注射器、针头、玻璃瓶、玻片、移液管等玻璃器具。在使用中必须注意：1. 用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手
25、直接从注射器取下。用过的针头必须直接放入防穿透的容料中。.使用塑料器材代替玻璃器材。禁止用手处理破碎的玻璃器具。操作玻璃器具时应遵循下述安全规则：不使用破裂或有缺口的玻璃器具。不要强力取下玻璃试管上的塞子，粘紧的试管可用刀切开分离。接触过传染性物的玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。破裂的玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标记的、单独的、不易刺破的容器里。高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。每次换班前，用1:10的次氯酸钠稀释液或其他合适的消毒剂对洗刷玻璃器具的区域进行表面消毒。破碎的玻璃器具只能使用机械装置处理.锐利物品应立即放置在不易刺破的容器内，在完全装满之前就应及时丢弃。.非一次性利器必须放入厚
26、壁容器中应运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。.培养基及其他具有潜在危险性的尖锐废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌。.所有锐利物品在使用后都应放入贴有标明通用的生物危害标志的清晰的标签、不会被刺破的容器内，然后运至处理场所。废弃锐利物品的容器应就近放在便于操作的地方。为防止装得过满意外伤人，应在装满后尽快运走。.使用注射器和针具时应防止受伤。如果不慎被尖锐器具扎伤，应立即挤压伤口处使血液流出，随之在流动自来水下清洗伤口分钟后用碘酒涂抹伤口处消毒。四、本管理程序的编制 编写人批准人生效日期 市医院检验科编号：Q13日期：年05月 12日版本：第1版共3 页 标本采集运送一、目的：确
27、保实验室标本的安全、有效，保证检验质量。二、适用范围：检验科全体工作人员三、内容：1）、标本的采集、血液标本的采集：静脉采血时，除卧床病人，采血时一般取坐位，成人多用肘前静脉，肥胖者可用腕背静脉，婴幼儿常用颈静脉，偶用前囟静脉。静脉采血用止血带应一人一用一消毒。使用止血带的时间不应超过一分钟，穿刺成功后应立即松开止血带。正在静脉输液者应停止输液三分钟，从未输液的另一侧或输液部位以下的部位采血。血清（浆）标本的收集各室应根据所检验项目的要求采用相应的标本收集管，并确定采血量。动脉采血一般由临床科室护士采集。、尿液标本的采集一般由患者或护理人员按医嘱留取。取样时应注意明确标记，避免污染，使用合格的
28、一次性洁净专用尿杯收集尿样。中段尿、导管尿等特殊尿样的采集一般由医护人员行相关操作留取标本。、粪便标本的采集由患者留取后收集于合格的一次性洁净专用粪杯送检。应取新鲜标本，选取异常成分的粪便，如含有黏液、脓、血等病变成分的标本，外观无异常的从表面、深处及粪端多处取材，取及时送检。、阴道分泌物标本的采集一般由妇科医师采集。采集阴道分泌物标本前24小时应避免性生活、盆浴。应于各种治疗、检查前采集标本，避免阴道冲洗或上药，被检者在采样前2小时不能排尿。患者取膀胱截石位。用阴道扩张器暴露宫颈，采样前，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物轻轻搽拭干净。更换棉拭子，用生理盐水浸润的棉拭子伸到宫颈管内0.52cm，稍
29、用力转动两周，以取得分泌物及脱落细胞。、痰标本的采集嘱病人先行清水反复漱口，并指导或辅助病人深咳嗽，从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。一般应采集清晨第一次咳出的痰液，采样时应收集带血丝部分或有干酪样颗粒的部分。痰液极少者可用45C 10NaCl溶液雾化吸入导痰。痰液收集于一次性洁净专用痰杯内及时送检。、其他标本的采集脑脊液、胸腹水及支气管灌洗液等其他标本由临床医师按相应操作采集。2）、标本的送检样本应置于被承认的本质安全防漏的容器中运输。病房标本由工人负责运送，标本采集后均应及时送检。运送过程中标本管口垂直朝上放置，避免振动、外溅。进行微生物检验的标本要防止运送过程中的污染。3）、标本的签收所有标本
