1、脂质体在超声药物和基因传递中的应用摘要作为药物和基因传递系统的脂质体在大多数药物治疗中起到重要的作用。近来，在超声控制药物释放和超声增强药物传递系统中，脂质体用来包裹气体和药物。通过不同的方法制备可发生回声脂质体，包括冻干，高压，生物素-抗生物素蛋白结合。目前，超声控制释放药物和用于基因传递的脂质体体外主要应用于心脏病，中风和癌症的治疗。这些传递系统应用于临床还需要全面的了解，提高物理性质以避免体内快的清除，还有可能的副作用，包括使用的超声。本文献的目的是在超声增强脂质体和基因传递的研究领域为研究者提供研究方向。关键字：脂质体；超声；药物传递；基因传递；气体；氧化亚氮1. 引言 药物到达病变部
2、位的有效的传递很大程度上取决于药物足够的局部浓度和足量药物跨过内皮细胞的转运。脂质体药物传递系统已被证实有增加体内特殊病变部位药物剂量的作用1-4.基于超声的方法是通过增加药物跨细胞膜或内皮屏障的作用来提高药物或者基因的传递5-9.应用适当的参数,超声能形成空腔, 它是一个气体空泡成核,生长,震动的过程.空腔形成包括快速生长和气泡的破裂(惰性空腔)或者气泡持久的震荡(稳定的空腔).两种形式的空泡可以对组织产生较强的物理-化学或生物效应5.尤其是,空腔气泡的破裂导致冲击波或者高速的微喷射流,它们可以击穿细胞和组织的细胞膜,从而来提高药物的转运.由于体内缺少内源性气体，血液和组织组成的环境很难诱导
3、惰性空腔，除非处于超声剧烈震荡和与之相关的负压的条件下10.然而, 剧烈震荡可能会破坏细胞和组织,因此需要引起注意。先前已有的空化核，一种超声造影剂，能降低形成空腔的阈值。在超声造影剂存在的条件下，较低能量的超声就可以使药物或者基因方便的到达许多种细胞，如鼠的成纤维细胞，软骨细胞11, 中国仓鼠卵巢细胞12,人癌细胞HeLa, NIH/3T3C127I 13,14, 前列腺癌细胞DU1457,还有许多组织比如肌肉15-18,肝脏19,20,肺19, 脉管系统19,21-23,大脑,和肿瘤部位8,24-26.超声造影剂一般由微气泡组成,这种微气泡由表面活性剂来稳定27,28.经常使用的表面活性剂
4、包括血清白蛋白, 聚合物, 磷脂29.当用磷脂作为气体稳定剂,两种结构中的一种是典型要的: 在气泡的表面有脂质单层,或者包含气体的脂质体(回声脂质体)30-32.当用于增强超声易化药物和基因传递时, 回声脂质体具有以下特点:1) 回声脂质体与普通脂质体有着相似的载药量.2) 包裹着治疗制剂的回声脂质体可与抗体结合,靶向到特殊的病变部位,形成局部高浓度并降低系统毒性.3) 可以控制内容物的释放速率。使用单个的高振幅的超声脉冲可以达到快速释放，用一系列的低振幅的脉冲可以达到缓释释放，或者两者结合使用。这些选择有些情况下特别使用，比如有时要提高局部浓度达到治疗水平并且使其保持一段时间。4) 超声激发
5、气泡破裂引起的空腔可以增加不同粒径的分子对细胞和组织的渗透性，因此可以促进药物或基因向细胞和组织转运。5) 回声脂质体的超声反射可以引导药物和基因的传递。2.回声脂质体概述脂质体是一种自发形成的脂质双分子层，内部是从大量水相中分离出来的亲水的小室（图1）33.与脂质单分子层结构相比，脂质体的特点就是可以延伸，两面性和分开的亲水和疏水区域。脂质双分子层的亲水基朝向水相（内部和外部），两个脂质层的疏水基相互靠近，形成了膜的内核。脂质体作为药物传递系统的特别之处就是它能同时包裹水溶性和水不溶性物质。水溶性物质被包裹在水相内核，水不溶性或油溶性疏水药物包在脂质双分子层中34。由于脂质体可以是阳性的（在
6、处方中加入阳离子脂质），它们可以载大量的不需要特别生产或处理过程的DNA，并且有较低的免疫反应在基因传递中35,36。由于高稳定性，提高生物分布和在血液中的最优循环性，有些脂质体处方已被FDA认证4（表1）。脂质制剂最初被修饰形成气体包囊作为靶向造影剂用于超声成像增强剂38-42.这些制剂被命名为回声脂质体（见图2和表2）.据推测，当气体被包裹在脂质体内，由于热力学原因，表现出像疏水药物一样位于脂质双分子层的两个单分子之间或者作为单分子包裹的气泡在脂质体的水相隔室中43. 回声脂质体保留了普通脂质体的特性因此可以共同包裹气体和药物或者基因作为药物和基因的传递体44-46。最新证据表明气体微囊的
7、稳定性很大程度上取决于包裹的气体和脂质壳的性质47比如气体跨过脂质壳的扩散速度48,49，脂质层的厚度和微泡的粒径50,51,和人血清和血清蛋白的存在52.图1.脂质体的脂质双分子层示意图。根据制备方法，三种基本的回声脂质体结构已被研究（图2和表2）.第一种回声脂质体有两个室，正如前面提到的。小室中含有气体并用单层与大室分开，大室中含有水相（图2A）。这一结构可通过低压冻干法制备32,38或者高压冷冻法。第二种结构也称为囊泡脂质体，有单分子层包裹的气体囊泡在脂质体的水相中53(图2B)。囊泡脂质体是基于通过相转变蒸发的方法制备的PEG修饰的脂质体（PEG-脂质体）；PEG-脂质体放在充有高压全
8、氟丙烷气体的管形瓶中，然后用超声仪进行超声46.第三种结构是普通脂质体通过生物素-抗生物素蛋白键共价接合到稳定的气体囊泡上，形成一种复合物45(图2C).低压冻干法制备回声脂质体包括脂质体在甘露醇存在条件下的冷冻干燥 32，使其产生两个室。小室包含气体并用脂质体的单层与大室分开，大室含有水相。用这种方法制备时，在冷冻和升华干燥步骤中包含一些没有冷冻保护作用或者容易结晶的溶质（如甘露醇）是很重要的。甘露醇的重要功能是引起双分子层破裂并使破裂的脂质体最大程度的暴露于空气中47.Huang等人介绍的高压冷冻技术产生相同结构的回声脂质体。在这一方法中，通过增加气体的压力产生一个过饱和水相，然后进行冷冻
9、操作，这样导致气体和溶质分子浓缩，对包囊是有利的43.由于气体低的溶解度，传统的制备脂质体的过程都无法包裹气体。通过加压来增加气体的包裹可以用Henry方程解释。因为大多数气体的溶解度很低，脂质体包裹气体需要增加气体在水溶液中的数量。根据Henry方程，气体的溶解度与液体上方气体的压力成正相关。当气体的压力比周围温度对应的平衡饱和气压值低，相当，或者高时，溶液被称为不饱和，饱和或者过饱和。因此，随着压力增加，溶液中气体分子的浓度也增加。随后的冻干步骤可能有两个目的，增加溶解气体的局部浓度和大量气体中小块核的形成。这一步骤不仅将空气包裹而且也将溶解于水相中的药物一起包裹54。最近，一种新的生产有
10、声学活性的脂质体已被研究，通过生物素-抗生物素蛋白键使脂质体和气体囊泡连接。每个微泡周围可连接平均直径200nm和100nm的脂质体分别高达1000和10000个（图2C）。药物和基因可用传统的方法装载于脂质体中。连接脂质体和微泡的键，含有5%的聚乙二醇-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-生物素（PEG-DSPE-生物素），很大程度上取决于抗生物素蛋白的浓度（高于抗生物素蛋白浓度10nM）。脂质体-忍耐性强的微泡随着声波振动并且逐渐瓦解，方式与微泡造影剂相同。最近FDA批准的磷脂基质的造影剂的典型结构是由一层脂质单分子膜包围高分子量（400 Da）的气体55,56。这一造影剂已被用于药物载体，特别是包裹疏
11、水性药物，尽管疏水性药物和基因可以在微细胞表面吸附。气态核产生声学阻道失配，这将导致微泡有高回音，可以被用于超声波成像。包裹或吸附的药物或基因可以通过超声释放15,21,27,57,58。尽管它们代表着可行的发展方向，需要理解的是回声脂质体制剂还仍处于临床前阶段。图2.三种不同类型的回声脂质体示意图。A).表示一种回声脂质体的结构，水相内容物通过超声释放。在制备过程中希望有大量的不均一性存在，以致于气体和水相室的比例有很大不同。然而，所有脂质体是单层是不可能的。B).含有C3F8气体的PEG修饰的回声脂质体结构。C).表面载有脂质体的微泡。微泡由5% DSPE-PEG2k包衣，并通过5%DSP
12、E-PEG2k-生物素与载有5%DSPE-PEG2k-生物素和5%NBD-胆固醇通过抗生物素蛋白共价连接。NBD-胆固醇提供了混合载体结果的最优荧光测定，使结合量化，并使细胞内陷由于细胞-载体相互作用。3.药物装载和超声刺激释放 脂质体可以装载大量制剂，包括亲水性和亲脂性药物，寡核苷酸，蛋白质，多肽和基因等3,35,59-63.回声脂质体保留了普通脂质体载药的性质。例如，产生回声活性的脂质体的过程与含有15%分子量黄绿素包裹效率是相一致的，黄绿素是一种存在于含有水溶性药物的水相室的荧光指示剂。当装载水溶性药物的脂质体含有气体，就变成了对超声刺激敏感的药物。有两个室的回声脂质体超声刺激时释放药物
13、最可能的机制从脂质体的结构可以看出来，其结构中一个脂质体中含有两个室。声波较弱的相会引起空气的膨胀并伸展到双分子层。如果压力足够使其延伸到脂质体膜，并超过弹性限度，脂质体内容物就会被释放出。回声脂质体对超声刺激的敏感性与脂质体的组成和包裹的气体以及超声应用参数有关。脂质双分子层通过疏水基相互作用而紧密连在一起，这些疏水基有自封性质导致脂质体表面破裂后又会很快封闭起来43,64。显然，像白蛋白包衣的阿马诺嗪那样的硬壳造影剂只对超声波压力有反应，当压力足够大时就可以引起壳不稳定。这是因为白蛋白的柔韧性没有磷脂壳好。不像白蛋白基质的囊泡破裂依赖于足够强烈的超声，脂质包裹的囊泡扩张和收缩平滑，并且即使
14、在超声过程中也可以立即自发组装修复膜结构65,66。因此，应用超声时，磷脂壳的囊泡在它们变得不稳定或合并前可以延伸比它们最初的表面积多10倍65。因此，通过改变脂质膜的刚性来影响其对超声的反映性是可行的。最优的气体是在脂质体中有大的体积并在血液中的扩散速率低48,49。最有效的超声波是组织可以忍受的最强的声强度的一小段波43。这些参数对选择合适的超声刺激是重要的，同时每次应用时都需要研究。疏水性药物可以装载到回声脂质体中；但是理论上，超声时它们可能更加耐受从脂质体中释放，因为它们与脂质体的联系是基于在双分子层内部的溶解度比在水中的高。因此，药物可能仍留在破裂脂质体的脂质碎片中。一种处理疏水性药
15、物的方法是使用环糊精赋予它们亲水性。环糊精的外部表面是亲水的，并有一小块疏水基结合区，因此可以显著增加疏水性药物的水溶性54。通过亲水基团包衣的疏水性药物就有和亲水性药物相同的释放特性。4.回声脂质体增强的超声空腔细胞膜和内皮是许多药物特别是基因药物的屏障。细胞膜由一脂质双分子层膜（厚度50nm），其中嵌有蛋白质分子或者在其表面67,68。内皮由单分子内皮细胞组成，内皮细胞之间有紧密连接可以封闭管腔。超声被用来增加细胞和内皮的通透性，使药物和基因能到达细胞和组织。回声脂质体装载的药物不仅能靶向病变组织，增加该部位的局部浓度，而且可以靶向增强超声易化细胞和内皮的通透性。除了释放脂质体内容物和提供
16、该过程的成像外，超声可以对组织产生效应，协同药物传递，即通过空腔效应。超声空腔效应可通过回声脂质体增强。当气泡破裂时，速度梯度和周围液体产生的压力产生高的机械强度69。这些能量足够使细胞膜产生暂时的开口，这一现象的强度可能受超声参数，细胞类型和造影剂性质的影响70。回声脂质体的超声行为不同于阿马诺嗪，一种常用的蛋白造影增强剂。当使用输出水平高于阿马诺嗪的碎片阈值（3.5MHz，MI=0.27），4.5MHz谐波和6.9MHz 基本的B型超声波时，对于两种类型的B型超声波，回声脂质体耐受时间长于60s然后破碎，而用同样的波时阿马诺嗪在5s内被破坏71。Akowuah等比较了SonoVue，BR1
17、4和阿马诺嗪关于超声增强的裸pGL3萤光素酶质粒向猪的血管平滑肌细胞转运的体外实验。所有这些造影剂都含有全氟化碳气体，但是阿马诺嗪是清蛋白基质的制剂，但是SonoVue和BR14是磷脂稳定的囊泡72.这两种脂质稳定的囊泡中，SonoVue的基因传递效率是阿马诺嗪的2.6倍。光学和声学方法显示脂质壳的囊泡通过两种主要的机制经历超声破坏：在低超声压力下超声溶解和在高压力时母泡破裂成两个或者更多的子泡73。通过应用超声，当超声压力低时（200 kPa, 2.25 MHz），脂质壳内的气体可稳定的振摇，在高压时（大于300 kPa, 2.25 MHz），气泡破裂是很重要的74。据报道，在1.00 MH
18、z和1.3 MPa条件下超声将导致脂质壳囊泡从2um膨胀到大约20um。从绒(毛)膜尿囊的膜模型中外渗物的影像很相似的表达了从最大直径为55um的管中渗漏的情形75。囊泡表面或者细胞壁快速破裂将产生一个流体喷射或者直接朝向壁的冲击波，这将导致脉管的通透性增加76并且药物呈对流传递。在1.0MHz下，药物的对流传递速率是在0.5MPa压力下为188.6um/s，在1.3MPa压力下为362.5 um/s75。药物通过超声空腔的形成来提高转运的效率很大程度上与药物成分和超声造影剂到生物膜的距离有关。Kodama等人发现转运膜的通透性被诱导当其在距离囊泡中心5um内，在这个距离内外源性的分子可以被转
19、运到细胞质。然而，必须承认的是药物成分转运到细胞核或者其它细胞室里要依赖于完全独立的超声效应的机制。例如，加入超声造影剂将增加pDNA摄入到培养细胞的细胞质而不是细胞核77。5.药物和基因传递的超声成像既然回声脂质体可以容易地为超声诊断成像42,43，含有药物的回声脂质体同样有用于超声的潜力。因此可以用于监测药物的传递，至少当有声学活性的脂质体被用于传递装置78。除了用于监测传递外，对于局部药物传递，装载药物的回声脂质体还有其它重要的优点。它们独特之处在于，因为超声可以聚焦到局部，并且调整相关的强度和脉冲频率，可以运用于靶区使生物学效应达到最优化。因此，在特定的时间最大程度的释放药物很明显是可
20、行的。另外，可以调整超声波的特性来产生增加管壁通透性的额外的效应（要适当的，提前或者当脂质体存在时），因此可以使脂质体和内容物跨过脉管内皮到达靶组织变得容易79-81。6.药物和基因传递的治疗应用回声脂质体在药物和基因传递的治疗应用是基于它们许多性质的结合，包括靶向，超声控制药物释放，增加细胞和组织的通透性，还有超声成像的能力。许多特别的应用可以被想象出。6.1. 血栓溶解 超声已被证明有增加血栓溶解的作用，不管有没有超声造影剂的加入55,82。靶向或者无靶向的囊泡可以通过静脉或者直接到达血块。共价接合到超声造影剂上，用于血块靶向的配体包括精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸（RGD）多肽83，纤维蛋白
21、素原39,41，组织纤溶酶原激活物（tPA）84。已报道tPA装载的回声脂质体有血块溶解的作用。含有tPA的有声学活性的脂质体被发现在血块区有高的浓度，由于tPA 结合在(血)纤维蛋白(单体)的表面。tPA装载的ELIP在超声条件下与有超声时相同的操作下相比，可以增强49.5%的溶栓作用78,84。超声增强溶栓的回声脂质体的机制包括微泡自身的空腔效应85-87。当在低频和高能条件下超声时，超声造影剂的振动可能导致血块溶解。另外，因为tPA已经结合到回声脂质体上，运用超声可能刺激tPA的释放（或者易化小的脂质体或碎片进入血块）。已经证明空腔和超声控制的溶栓制剂结合比只含有超声造影剂的超声在溶血方
22、面好84。6.2 动脉粥样硬化在循环中，由于横向力的作用超声造影剂倾向于分布在脉管轴线上88。这在治疗动脉粥样硬化时将阻碍药物的传递，这就要求循环的回声脂质体与脉管内皮接触。因此，合适的配体结合到脂质体的表面来支持回声脂质体依附在脉管表面是很有利的。动脉粥样硬化最早的一个事件就是单核细胞活化并依附在内皮细胞。活化的单核细胞从循环中结合到内皮上需要存在于内皮细胞上粘附分子的帮助，粘附分子有内皮粘附分子（ICAM），脉管细胞粘附分子（VCAM），内皮白细胞粘附分子（ELAM），还有P&F选择蛋白89。研究表明，忍受单克隆抗体并靶向于ICAM -1的回声脂质体在体外有好的结合效率40,91。随后，H
23、amilton等人41,42 将这些脂质体用于血管内us成像来强调血栓和在抵抗受伤的脉管时形成与粥样斑有关的许多脉管标记。分子靶是ICAM -1，VCAM-1，纤维蛋白，纤维蛋白素原和组织因子（TF）；它们可以在脉管壁上产生靶向影像增强当静脉注射脂质体5分钟内92。除了配体增强了脂质体吸附到内皮组织的表面，低能量的超声能使超声造影剂和内皮的结合。这就是所谓的声辐射力的结果，它有一个直接从声源和次级声源获得的初级力组成。这些力在超声造影剂之间是相互吸引的93-95。Dayton证明了初级辐射力能够推动非靶向超声造影剂从脉管中心到脉管壁96。在用人的黑素瘤单层细胞实验中，Shortencarier
24、等人发现使转运装置进入细胞的声辐射力波的应用需要装置碎片成功的粘附在细胞膜上94。Rychak等人发现声辐射力可以激烈增加到80倍-连接P选择蛋白的脂质囊泡结合到内皮上，壁剪切力的速度为1244/s97。6.3基因传递超声加速基因传递已在体内和体外被成功的证明9。这一系统的转染率不仅受超声参数，造影剂的存在，质粒DNA局部浓度的影响，还受转染剂的影响。当DNA和阳离子脂质复合物被用时，在细胞培养和体外研究中重要的增强作用已被报道26,57,98。人们发现单独使用DNA时超声增强转染80倍。聚乙烯亚胺（PEI）和DNA复合物（形成多聚物）能增加转染90倍。然而，最重要的是超声和PEI的结合可以协
25、同增加转染200倍。这将导致细胞34%达到基因表达。动力学测定使我们认识到单独使用超声时效力大，而PEI单独使用或者和超声一起使用可以增加转染，声处理后培育4h的DNA质粒强烈的受益于PEI99。因此，选择最优的脂质体转染剂，将与超声的增强效应产生协同作用，因为超声增强膜的通透性一般发生在超声应用时。裸pDNA与US的结合应用于全身作用是无效的，可能是由于裸DNA被血清核酸酶降解和在声探器细胞环境中低浓度的DNA。对于超声增强的脂质体基因传递中超声和高转染效率的制剂联合使用时一个可行的方法。最新研究的声活性的回声脂质体以脂质体和气泡结合的形式为这一应用提供了一个平台。当使用超声时（1.2 W/
26、cm2, 20 s,，工作期为50%），由聚乙烯二醇，二硬脂酸磷脂酰胆碱和全氟丙烷气体组成的脂质体在小鼠眼睛里质粒DNA绿色荧光蛋白质的表达增加了60%。含有气泡的脂质体的转染率比脂(质)转染(法)的高46。6.4.生物活性气体的转运许多气体被认为有生物活性，包括氙，硫化氢，氧化亚氮，一氧化碳等。最近的动物实验表明在脑或者心脏缺血后氙可以降低梗塞的范围，一些气体例如NO和CO在正常或者病变的生理中起着重要的作用。近几年，研究者的兴趣已经转向H2S，另一种有生理活性的气体。在体内外研究中发现它有扩张血管的活性100。最近，有报道称脑内含有相对高浓度的内源性的H2S并且H2S已被认为是脑部的神经调
27、节剂/递质101。气态的药物可以迅速跨过血脑屏障，因此可以很快在脑部和其它靶组织达到有效的浓度。另外，许多气态的药物在血液中有低的溶解度，这对药物迅速进入和消除方面有利102。这对治疗有利并且能降低副作用。生物活性气体用于治疗的障碍是缺乏合适的服药方法和不知道潜在的副作用。含有气体的脂质体已被用作超声造影剂很多年，因为气体界面在循环和周围的组织间产生很高的对照。包裹的气体在37的血清中产生回声的半衰期为7个小时52。如果气体被其它气体如有生物活性NO气体代替，这样的脂质体可以被用作气体药物的载体并且是有生理活性的制剂。这尤其是在一个药物或者生理学制剂在没有保护状态下有较短的生存时间时特别有用。
28、NO有许多不同的生物活性，但是作为气体它在体内脉管转运中是不稳定的。NO在循环中的半衰期是1.8ms。NO包裹在脂质体中可以避免NO在循环时被NO消除剂例如血红蛋白清除。使用低压冷冻的方法，在相对低的压力下，30ul的气体可以迅速的包裹在5mg的脂质中。用这种方法制备的脂质体NO自发释放时有双相性的性质，在开始的30分钟释放迅速，然后再接下来的8小时释放缓慢。NO和氩的混合气体提供了一个简单的方法去调节NO的释放速率。足够的NO到达培养的平滑肌细胞时可以产生生物效应，即使有NO消除剂血红蛋白的存在。体外实验表明服用NO-ELIP到达囊损害的颈动脉时将阻止内膜的肥厚的516%。这一系统为转运多数
29、生物活性气体到达靶组织提过了一个新的方法，当全身给药时产生很小的效应103。回声脂质体应用于生物活性气体转运是独一无二的，并且还在初期，但是已有许多关于超声诱导的脂质体中空气或者惰性气体的释放的研究。一般的，气体从回声脂质体中释放有三种方式：静态气体的泄露，超声驱动的扩散，和快速的超声碎片。对于后者的机制，从Smith等人的研究数据中表明以6.0MHz和0.08 MI的多普勒脉冲形式的超声诱导气体从脂质体中扩散71。这一发现有实用意义因为正如该实验中使用的没有空腔的低能量的超声对生物组织产生较小的伤害。7. 目前的局限性和未来的发展状况 在报道的使用超声造影剂注射后4例死亡事例后，美国FDA声
30、明了一个新的“黑箱”警告对于含有全氟丙烷的超声造影剂，禁止它们在患有急性冠状综合症，急性心肌梗塞，恶化或者临床不稳定的心力衰竭的病人身上使用104。根据临床试验和这些事件的分析，我们认为在死亡和用含有全氟丙烷的超声造影剂之间没有确定的毒理关系。全氟化碳是生物惰性的，并且由于它们在血液中不溶，只是跨过囊泡膜扩散出来105。成像造影剂本身独立的潜在的效应，医疗的超声，在某些水平的能量转运都能引起生物效应。这一领域最近已被Miller评论过106。由超声造影剂诱导的空腔可能引起生物超声效应。与可能的副作用相关的因素包括超声参数，超声波形，机器设置，造影剂的大小和剂量，转运方法，组织的敏感性以及病人的
31、条件。对这些因素详细的了解是临床应用的药物和基因传递治疗所必须的。8结语 对于超声控制的药物和基因传递，几种回声脂质体的制备方法已被介绍，并且许多实验室都在做这样的实验。我们希望对有靶向，可以作为药物载体的脂质造影剂有更深的研究，在这些制剂中治疗药物和造影剂被合并在一个简单的载体中，并且这些制剂将有重要的临床应用。对于这样的脂质体几个因素是重要的。第一个是包足够量的有效负载的药物效应并且保持回声特性。第二是在脂质体表面共价接合配体的能力，不影响发生回声和装载能力。第三是选择最优的配体组分来延长循环的时间和稳定气体的存留。最后，要全面了解回声脂质体可能的副作用，需要做彻底的调查。只有优化这些因素，回声对照剂才能在临床应用于药物和基因传递中扩大其作用。致谢 我感谢Robert MacDonald和Patrick Kee的评论和建议。我也感谢三位评论家的关心和努力，他们提供了使初稿有重要提高的建议。这一研究受到美国心脏病协会的支持。
