1、注射用盐酸克林霉素方法学研究原始记录方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称系统性适用性试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素对照品W对照 mg，置于10ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，即得对
2、照品溶液，作为系统适用性试验，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按克林霉素峰计算，应不低于1300。试验结果结果：方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称含量线性关系试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱： C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-20
3、0705精密称取克林霉素标准品W mg，置于50ml容量瓶中，用流动相定溶至刻度，制成每1 ml含克林霉素4 mg的溶液，即得样品溶液，精密称取样品溶液置于不同量瓶中，用流动相稀释并分别制成浓度1.2mg/ml、1.6mg/ml、2.0mg/ml、2.4mg/ml、2.8mg/ml的样品溶液，分别取10l注入液相色谱仪，以浓度为横坐标 x，以峰面积为纵坐标Y，得回归方程和相关系数；见附图。实验结果浓度(mg/ml)峰面积1.21.62.02.42.8回归方程R2方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称5%对照品线性关系试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（
4、高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素标准品W样 mg,置于50ml容量瓶中，加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素2 mg的溶液，即得样品溶液，精密称取样品溶液置于不同量瓶中，用流动相稀释并分别制成浓度0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.25mg/
5、ml、0.30mg/ml、0.35mg/ml的样品溶液，分别取10l注入液相色谱仪，以浓度为横坐标 x，以峰面积为纵坐标Y，得回归方程和相关系数；见附图。实验结果浓度(mg/ml)峰面积0.150.200.250.300.35回归方程R2方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称含量重复性试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；
6、检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素标准品 mg置于10ml容量瓶中,加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素2 mg的溶液，A对主峰面积 。精密称取（批号： ）样 mg，样 mg、样 mg、样 mg、样 、样 mg；分别置25ml的容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得作为含量样品溶液。上述溶液取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，计算含量RSD%。实验结果样品主峰面积含量（%）RSD（%）A样1A样2A样3A样4A样5A样6方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克
7、林霉素试验名称有关物质总杂重复性试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素标准品 mg置于100ml容量瓶中,加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素0.25 mg的溶液。A对主峰面积 。精密称取（批号： ）样 mg，
8、样 mg样 mg样 样 、样 mg；分别置50ml的容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得作为含量样品溶液。上述溶液取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，计算总杂RSD(%)。实验结果样品总杂总杂(%)平均总杂(%)RSD(%)A样1A样2A样3A样4A样5A样6方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称进样精密度试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-
9、甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素标准品 mg置于10ml容量瓶中,加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素2 mg的溶液。上述溶液取10ul连续6次注入液相色谱仪，计算RSD(%)。实验结果样品峰面积RSD(%)A1A2A3A4A5A6方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称5%对照品进样精密度试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.625
10、0mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取克林霉素标准品 mg置于100ml容量瓶中,加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素0.25 mg的溶液。上述溶液取10ul连续6次注入液相色谱仪，计算RSD(%)。实验结果样品峰面积RSD(%)A1A2A3A4A5A6方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称回收率试验检验依据中国药典
11、2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程对照品来源：中国药品生物制品检定所；含量：86.0%；批号：130422-200705精密称取盐酸克林霉素对照 mg分别置10ml量瓶中，加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中约含克林霉素2 mg的溶液，摇匀，即得作为对照溶液。精密称取（批号： ）样品1 mg，样品2 mg样品3 mg分别置25ml的容量瓶
12、中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得三份浓度为 mg/ml， mg/ml， mg/ml的样品溶液（作为含量120%样品溶液）。精密称取（批号： ）样品1 mg，样品2 mg样品3 mg分别置25ml的容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得三份浓度为 mg/ml， mg/ml， mg/ml的样品溶液（作为含量100%样品溶液）。精密称取（批号： ）样品1 mg，样品2 mg样品3 mg分别置25ml的容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得三份浓度为 mg/ml， mg/ml， mg/ml的样品溶液（作为含量80%样品溶液）。分别量取10ul 80%、100%、120%的样品溶液各三
13、份注入液相色谱仪，记录色谱图。计算回收率。实验结果相对浓度W加入量(mg)W测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)80%100%120%方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称耐用性试验流速检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg置于25m
14、l容量瓶中，用流动相定容至刻度，分别以0.8ml/min ,1.0 ml/min,1.2 ml/min的流速进样，记录保留时间，理论塔板数，分离度和对称因子。试验结果流速(ml/min)保留时间理论塔板数A（%）分离度对称因子方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称耐用性试验pH值检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至2.8；3.0；3.2)-甲醇(210:300)为流
15、动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样1 mg，W样2 mg, W样3 mg置于25ml容量瓶中，用pH分别为2.8，3.0和3.2的流动相定容至刻度，分别取10ul 注入液相色谱仪，记录主峰保留时间，理论塔板数，分离度和对称因子。试验结果pH值保留时间理论塔板数A（%）分离度对称因子方法学研究测定原始记录样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称耐用性试验柱温检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000m
16、l，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇（210:300）流动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg，置于25ml容量瓶中，定容至刻度，设柱温为20，25，30，分别进样10 ul，进样测定，记录记录主峰保留时间，理论塔板数，分离度和对称因子试验结果柱温保留时间理论塔板数A（%）分离度对称因子方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称耐用性试验流动相比例检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2
17、.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 20:31)；（21:30）；（22:29）；（24:27）为流动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样1 mg，W样2 mg, W样3 mg, W样4 mg置于25ml容量瓶中，分别以磷酸二氢铵溶液-甲醇20:31；21:30；22:29；24:27为流动相，定容至刻度，进样测定，记录记录主峰保留时间，理论塔板数，分离度和对称因子试验结果磷酸二氢铵溶液-甲醇保留时间理论塔板数A（%）分离度对称因子方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称耐用性试
18、验结果与结论检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260试验结果结论方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称专属性试验：强光检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )为流动相；检测波长为214nm。试验过程样品测定：精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg，50ml无色量瓶中，加流动相稀
19、释至刻度，摇匀，置强光照射箱（光照强度约4000Lx）中照射4小时，取出，作为供试品溶液。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。辅料空白：按处方量配比，精密称取醋酸钠三水合物 mg，混匀精密称取5/6瓶量于25ml无色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置强光照射箱（光照强度约4000Lx）中照射4小时，加流动相稀释至刻度，摇匀。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称专属性试验：高温破坏检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C
20、18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )为流动相；检测波长为214nm。试验过程样品测定：精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg，置于50ml棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，置100的水浴中加热30分钟后，取出，放冷，摇匀。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。辅料空白：按处方量配比，精密称取醋酸钠三水合物 mg，混合后，置于25ml棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，置100的水浴中加热30分钟后，取出，放冷，摇匀。量取10ul 的样品溶液
21、注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称专属性试验：氧化破坏检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )为流动相；检测波长为214nm。试验过程样品测定：精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg，置50ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解，加浓度为3的过氧化氢溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，
22、用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。辅料空白：按处方量配比，精密称取醋酸钠三水合物 mg，混合后，精密称取5/6瓶量于25ml棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加浓度为3的过氧化氢溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，用流动相稀释至刻度，摇匀。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称专属性试验：强酸破坏检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢
23、铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )为流动相；检测波长为214nm。试验过程样品测定：精密称取盐酸克林霉素样品（批号： ）W样 mg，置50ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解，加0.1mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。辅料空白：按处方量配比，精密称取醋酸钠三水合物 mg，混合后，精密称取5/6瓶量于25ml棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加0.1mol/L
24、盐酸溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。 试验结果方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称专属性试验：强碱破坏检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇( 210 : 300 )为流动相；检测波长为214nm。试验过程样品测定：精密称取盐酸克林霉
25、素样品（批号： ）W样 mg，置50ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解使溶解，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，用0.1mol/L盐酸溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。辅料空白：按处方量配比，精密称取醋酸钠三水合物 mg，混合后，精密称取5/6瓶量于25ml棕色容量瓶中，加流动相适量使溶解，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，室温放置30分钟后，用0.1mol/L盐酸溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀。量取10ul 的样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。 试验结果方法学研究测定原始记录第
26、 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称溶液稳定性试验检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取（批号： ）样 mg，置25ml的容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，分为两等份，分别置棕色量瓶与无色量瓶中，于室温（25）下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时取样分析。实验结果时间棕色量瓶装无色量瓶装主峰峰面积主
27、峰平均峰面积RSD主峰峰面积主峰平均峰面积RSD0小时2小时4小时6小时8小时方法学研究测定原始记录第 页 共 页样品名称注射用盐酸克林霉素试验名称检测限、定量限检验依据中国药典2010年版二部附录 D（高效液相色谱法）高效液相色谱仪安捷伦1260色谱条件色谱柱：C18 5um，4.6250mm ；以磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵2.88g，加水溶解并稀释成1000ml，用80磷酸溶液调节pH值至3.0)-甲醇(210:300)为流动相；检测波长为214nm。试验过程精密称取克林霉素对照品W对照 mg，置于10ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，加流动相制成一系列浓度的溶液，分别取10l进样测定。以信噪比为判断依据，得出检测限与定量限。实验结果
