1、 基因工程一、选择题（每小题1.5分，共15分）1基因工程的创始人是 ( )。 A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen2关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 B 这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统3在DNA的3-5链上，基因的起始密码子是 ( ) A ATG（或GTG） B AGT C TAG D TGA4II限制性内切核酸酶可以特异性地识别 ( )。 A 双链D
2、NA的特定碱基对 B 双链DNA的特定碱基序列 C 特定的三联密码 D 以上都正确5末端转移酶是合成酶类，具有( )活性。 A 35DNA聚合酶 B 53DNA聚合酶 C 53DNA内切酶D 53DNA外切酶6下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的。 A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。B 可以在氯霉素作用下进行扩增。C 通常带有抗药性标记。D 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。7关于cDNA的最正确的说法是( )。 A 同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA C 以mRNA为模板合成
3、的双链DNA D 以上都正确8关于T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确? ( ) A 是最常用的DNA连接酶。 B 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。 C 不但能连接粘性末端。 D 最适温度37 。9下列关于建立cDNA文库的叙述中，( )是错误的?A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNA B 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA C 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA D 新合成的双链DNA克隆到载体上，并导入受体细胞 10用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 A Southem blot B Northem blot C Western印
4、迹 D 原位菌落杂交二、填空题（每空1分，共25分）1限制性内切核酸酶分为三类，基因工程中应用的是_ _。2为了防止DNA的自身环化，可用_去双链DNA_。3切口平移(nick translation)法标记DNA探针时应用的酶是_ _ _。4基因工程中的3种主要类型的载体是_、_、_。5野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 、 和 。6黏粒(cosmid)是 杂合载体。7引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) 、 (3) (4) 。8Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：(1)_ _、，(2)_9PCR反应中常用的酶是_ _ 。10感受态的大肠
5、杆菌细胞在温度为_ _时吸附DNA, _时摄人外源DNA。11.用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为 。12. 除具有较低的分子量外，一个理想的质粒载体必需包括_、_、_三个部分。13转基因植物操作中常用的载体是 。14. pcDNA3.1用于 。三、名词解释（每小题4分，共20分）1目的基因： 2基因工程：3载体：4Western印迹：5核酸分子杂交：四、简答题（每小题10分，共20分）1. 基因工程的基本操作程序? 2. 怎样制备目的基因?基因工程评分标准与参考答案一、选择题：每小题1.5分，共15分；多选不得分。 1d; 2b; 3a; 4b; 5b; 6c; 7
6、c; 8c; 9a; 10c二、填空题: 每空1分，共25分1II类酶。2碱性磷酸酶；5端的磷酸基团3DNA聚合酶I。4质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体5没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记6质粒和l噬菌体7合成探针；合成cDNA；用于PCR反应；进行序列分析8印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性电泳9Tag DNA 聚合酶100C；42C11染色体变性后来不及复性12复制起点；选择标记；克隆位点13Ti质粒14外源基因导入哺乳动物细胞三、名词解释（每小题4分，共20分）1在基因工程中被操作的DN
7、A序列；又称外源基因（foreign gene/exogenous gene)，主要是指编码蛋白质的结构基因（structural gene）；它们可以从自然界中已有的物种基因组(genome)中分离出来，也可以用人工的方法合成。2按照人们的意愿，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，生产生物活性物质，甚至创造新物种的技术。3携带外源基因进入受体细胞的DNA分子。4Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上；然后用特异性的抗体进行检测；可说明基因是否进行了表达。5用标记的探针检测出DNA或RNA同源序列的技术；原理是碱基互补；常用的有S
8、outhern blot、Northern blot和原位杂交。四、简答题（20分）1 目的基因的制备；目的基因与载体连接；目的基因导入受体细胞；目的基因的表达与检测。或者：转、接、切、增、检（加以解释）。2 直接分离法、构建基因文库分离法、PCR扩增法、人工合成法等。（加以解释）五、实验与论述题（20分）由于基因已被测序，可通过RT-PCR方法克隆该基因；也或通过基因文库分离法获得该基因； 基因可以在大肠杆菌中作为融合蛋白质或分泌蛋白质进行表达。 具体操作如下：制备目的基因；连接到T-载体；转化大肠杆菌，提质粒；测序；酶切，回收目的基因，连接到原核表达载体；再转化大肠杆菌，大量培养；分离、纯化和检测表达产物。- 3 -
