1、产品介绍产品介绍 本试剂盒适用于从 TAE 和 TBE 琼脂糖凝胶中回收 100 bp10 kb 的 DNA 片段，回收效率可达 80%。该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，得到高质量的 DNA 回收产物。本试剂盒采用的膜结合液中不含有干扰酶活性的碘化钠，所得到的 DNA 可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。本试剂盒具有以下特点：1.适用范围广，回收效率高，对于100 bp10 kb之间的DNA片段回收效率在80%以上。2.操作简单快速，整个回收过程仅须15分钟左右。3.洗脱效率高，洗脱体积最小可低至15 l。快速操作流程（胶回收）快速操作流程（胶
2、回收）1.准备工作。a.检查 Wash Solution 中是否已经加入乙醇。b.检查 Buffer B2 是否出现沉淀。c.将水浴锅调至 55C。2.从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块，称重。3.加入胶块重量3-6倍的Buffer B2，50C水浴5-10分钟溶胶。4.（选做）对于 1%，1.5%，每 100 mg 凝胶加入 400 l Buffer B2；凝胶浓度 1.5%，2%，每 100 mg 凝胶加入 500 l Buffer B2；凝胶浓度 2%，每 100 mg 凝胶加入 600 l Buffer B2。3.将离心管置于50C水浴510 min，间或混匀，直至胶块完全溶化。胶块完
3、全溶化即可，过长时间的处理可能导致 DNA 损伤。4.（可选步骤）当目的片段 7.0）代替。将 Elution Buffer 预热至 60C 可以进一步提高得率。如果片段 4 kb，在 3760C 温浴 2 分钟可以显著提高得率。请勿使用小于 15 l 的洗脱液进行洗脱。常见问题解答常见问题解答 1.DNA回收效率较低或者未回收到目的片段 a.胶块溶解不完全。可适当延长水浴的时间，并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。b.胶块体积太大，溶胶困难。可先将胶块切碎，溶胶后分多次上柱离心，回收 DNA 片段。c.漂洗液中未加入正确量的无水乙醇。d.Agarose 抑制 DNA 与吸附材料的结合。应尽量切除不
4、含目的 DNA 片段的 Agarose 胶。e.提高 Buffer B2 的相对浓度，增加 DNA 与吸附膜的作用时间（静置时间），在一定程度上可以提高回收率。f.如果纯化的片段长度大于 4 kb 或者目的片段含量较少，可以将洗脱液再次加入至吸附柱中进行洗脱，以提高回收效率。g.洗脱液加入位置不正确。洗脱液应加在硅胶膜的中心部位，以完全覆盖硅胶膜的表面，达到最大的洗脱效率。h.洗脱液不合适。洗脱缓冲液的 pH 值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其 pH 值 7.0，pH 值过低可能导致低洗脱效率。i.洗脱时间过短。洗脱时放置 1 分钟可达到较好的洗脱效果。洗脱时将洗脱液预热至 60
5、C 后使用，有利于提高洗脱效率。2.回收DNA进行后续酶切反应效率低 a.洗脱产物中含有残留的乙醇。可将离心后的吸附柱开盖室温干燥 2-5 分钟，有助于残留的酒精挥发完全。b.盐份的残留。请确保使用 Wash Solution 洗涤两次，每次 500 l 沿管壁加入，有助于彻底去除管壁上的盐份。c.琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。3.琼脂糖凝胶胶块不溶 a.琼脂糖质量差。b.含目的片段的胶块在空气中放置时间过长，使胶块失水、干燥。建议切胶后立即进行胶回收，或将胶块保存在 4C 或-20C备用。c.配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。应重新配制缓冲液。4.洗脱液的选择 洗脱液可以根据后续实验的需要来确定。一般情况下，若需要进行测序反应，请用双蒸水洗。
