1、迪安肿瘤个体化治疗迪安肿瘤个体化治疗个体化治疗前沿简介大规模人群调查和世界卫生组织调查均发现药物安全性问题是住院病人致死最重要的原因之一，居于全部死亡原因的第五位。 “全世界每年死亡的患者中，有1/3是药物不良反应所致。这是由传统的给药方式造成的，医生没有考虑人的个体差异，而是千人一药，千人一量。” 周宏灏我国遗传药理学的开拓者、中国工程院院士。 华法林常用抗凝药，在美国每年200万患者在服用该药，造成高达10万例严重的副作用，其中包括数千人死亡的。该药个体剂量差异可相差20倍,剂量过大会使病人有出血的危险；剂量太少可能会导致血栓，心脏病，中风，甚至死亡。 最佳用药剂量很大程度上取决于药物相关
2、基因变异，即单核苷酸多态性（SNP）。SNP的复杂性，决定了药物反应的多态性，所以个体化用药，也意味着理想的治疗需要进行全基因组的药物筛选。目前，个体化治疗已经成为恶性肿瘤、高血压、糖尿病等重大慢性疾病临床治疗的发展方向和最有效的手段。肿瘤个体化用药及有关检测 目前常用的抗肿瘤化疗药物对患者治疗的有效性低于70%，约20%-35%的患者接受了不恰当的药物治疗。如果肿瘤治疗能够同病异治、因人而异、实施个体化治疗，将能够大大提高疗效，避免过度治疗和降低患者经济负担，减少医疗资源的浪费。随着药物基因组学以及蛋白质组学、转录组学等高通量分子检测技术的出现，分子靶向技术治疗癌症的个体化治疗手段即从个体基
3、因组中分析和鉴别患者之间存在的疾病相关的个体差异，并利用这些差异来合理的指导临床治疗，已经成为医学界广泛共识。 卫生部2010年11月首次发布了结直肠癌诊疗规范，明确规定：确诊为复发或转移性结直肠癌时，应进行相关基因状态检测，制定个体化治疗方案，患者确定为复发或转移性结直肠癌接受爱必妥、帕尼单抗（抗EGFR单抗）时，必须检测肿瘤组织的KRAS基因状态。肿瘤细胞表面存在着接收不同信号的通道。抗EGFR单抗通过阻断EGFR二聚体的形成，抑制其下游的细胞内信号传导，从而抑制肿瘤细胞的存活、增值等。但如果KRAS基因突变可旁路激活细胞内信号传导，从而导致抗EGFR单抗失效。所以，通过检测KRAS基因有
4、否突变，医生就可以有针对性的区别给药。南京军总全军病例中心迪安分子病理诊断中心 南京军区南京总医院病理科是国内规模最大、水平最高的病理专业科室之一，同时开展医教研全面工作的病理专业科室，2005年首批成为全军临床病理中心。国内独立实验室领跑者迪安公司与南京军总病理中心整合优质技术资源，发起建立了“南京军总全军病理中心-迪安分子病理真的中心”。配备了领先的技术平台，包括基因芯片、基因测序、实时荧光PCR、荧光原位杂交技术等，多位博士、教授、主任医师亲自指导，旨在为华东乃至全国的医疗机构和患者提供高质量的肿瘤分子变了检测、诊断、咨询及学术推广服务。中心是全国性的、少有的具有医疗资质的专业分子病理诊
5、断平台，是您需要的肿瘤个体化用药相关检测服务的最佳选择。技术平台简介一：焦磷酸测序平台 QIAGEN公司基于Pyrosequencing技术而研究开发的PSQ 96系统是一个理想的遗传分析技术平台，它既可进行DNA序列分析，又可进行基于序列分析的SNP检测及等位基因频率测定,它具有以下优点：1不需要制胶，不需要毛细管，也不需要荧光染料和同位素。 210分钟内可分析96个样品的SNP，可满足高通量分析的要求。 3每个样品孔都可进行独立的测序或SNP分析，实验设计灵活。 4序列分析简单，结果准确可靠。利用该技术平台可开展以下项目：1临床药物基因组学2微生物分型及耐药检测3疾病风险预测4临床遗传学
6、5 DNA甲基化程度定量分析6法医学鉴定 焦磷酸测序法应用于肿瘤基因突变及甲基化、个性化用药相关检测相比荧光定量PCR法和Sanger测序法检测，具有更高的灵敏度，准确性和更高的通量，结果直观，判读更加简单、准确、快速，具有明显的优势。二、荧光定量PCR （Roche LlightCyclerTM 480）结合高分辨融解曲线平台 高分辨率熔点曲线分析（High Resolution Melting Analysis，HRM），无需序列特异性探针，无需测序，也不受突变碱基位点与类型的局限，应用Roche LlightCyclerTM 480荧光定量PCR仪器分析，即可完成对样品基因型的判断： 操
7、作简便快捷通过实时荧光PCR+HRM技术，90分钟即可获得多达数十个样本的检测结果。 灵敏度高最低检测限为5-10个基因拷贝。 选择性好可在混有野生型基因组DNA情况下，检测出0.1-0.01的突变基因，是测序方法的25倍-250倍。 可检测血清、血浆、尿沉渣等样本的微量突变或异常甲基化基因，可动态监测肿瘤靶向药物治疗后的突变情况。三、荧光原位杂交（FISH）平台 FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性
8、，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点:1、荧光试剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色
9、体DNA的结构。该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。 不同的血液肿瘤往往有其特异的染色体异常（异位、错配等），利用FISH技术检测血液肿瘤的细胞遗传学改变，为血液肿瘤的诊断，预后评估，治疗监测等提供了重要依据。 肿瘤个性化用药方面，运用FISH技术检测肿瘤基因基因拷贝数检测，相比免疫组化和定量PCR更加准确、灵敏、客观，可指导临床肿瘤靶向药物的治疗。用药相关检测项目表结直肠癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物西妥昔单抗（爱必妥）、帕尼单抗（维克替比）（血）K-ras突变、
10、（血）B-raf突变、EGFR拷贝数、PIK3CA突变、PTEN mRNA、VEGFR2 mRNA化疗药物5-FU、卡培他滨MTHFR SNP-C677T、DPD SNP-IVS14+1GA、TS mRNA卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNA、BRCA1 mRNA、ERCC1 SNP、XRCC1 SNP、GSTM1 SNP、GSTP1 SNP-I105V 伊立替康UGT1A1 SNP 胃癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物曲妥珠单抗（赫赛汀）HER2拷贝数、PIK3CA突变厄洛替尼（特罗凯）、吉非替尼（易瑞沙）（血）EGFR突变、（血）K-ras突变、EGFR拷贝数拉帕替尼（泰
11、克泊）、索拉菲尼（多吉美）PDGFR mRNA、VEGFR2 mRNA、 VEGF mRNA化疗药物5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA表阿霉素、阿霉素GSTP1 SNP、MDR1 SNP 卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNA、BRCA1 mRNA、ERCC1 SNP、XRCC1 SNP、GSTM1 SNP、GSTP1 SNP伊立替康UGT1A1 SNP 吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA 紫杉醇、多西紫杉醇TUBB3 mRNA、STMN1 mRNA、GSTP1 SNP 培美曲塞TS mRNA、TYMS SNP 依托泊苷UGT1A1 SNP、MGMT甲基化
12、胃肠道间质瘤 药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物伊马替尼（格列卫）、舒尼替尼（索坦）C-Kit突变、PDGFR突变肝癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物索拉菲尼（多吉美）、舒尼替尼 （索坦）PDGFR mRNA、VEGFR mRNA、VEGF mRNA 贝伐单抗（安维汀）VEGFR mRNA、VEGF mRNA化疗药物卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 SNP、ERCC1 mRNA、BRCA1 mRNA、XRCC1 SNP、GSTP1 SNP、 GSTM1 SNP5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、 DPD SNP、 TS mRNA阿霉素GSTP1 SNP、MDR1 SN
13、P 吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA丝裂霉素NQO1 SNP依托泊苷、伊立替康UGT1A1 SNP、MGMT甲基化 乳腺癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物曲妥珠单抗、拉帕替尼HER2拷贝数、PIK3CA突变激素类药物来曲唑（芙瑞）、阿那曲唑（艾达）CYP19A1 SNP、CYP19A1 SNP、HER-2 mRNA他莫昔芬CYP2D6 SNP化疗药物阿霉素GSTP1 SNP、MDR1 SNP卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNA、BRCA1 mRNA、ERCC1 SNP、XRCC1 SNP、GSTM1 SNP、GSTP1 SNP 紫杉醇、多西紫杉醇TUBB3 mRNA、STM
14、N1 mRNA、GSTP1 SNP吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA环磷酰胺CYP2C9 SNP甲氨蝶呤MTHFR检测套餐乳腺癌21基因+复发风险评估卵巢癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物贝伐单抗（安维汀）VEGFR2 mRNA、VEGF mRNA激素类药物来曲唑（芙瑞）、阿那曲唑（艾达）CYP19A1 SNP、CYP19A1 SNP、HER-2 mRNA他莫昔芬CYP2D6 SNP化疗药物卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNA、BRCA1 mRNA、ERCC1 SNP、XRCC1 SNP、GSTM1 SNP、
15、GSTP1 SNP 紫杉醇、多西紫杉醇TUBB3 mRNA、STMN1 mRNA、GSTP1 SNP吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA培美曲塞TS mRNA、TYMS SNP 依托泊苷UGT1A1 SNP、MGMT甲基化 伊立替康UGT1A1 SNP 胰腺癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物厄洛替尼（特罗凯）、吉非替尼（易瑞沙）（血）EGFR突变、（血）K-ras突变、EGFR拷贝数化疗药物5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA 卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNA、BRCA1 m
16、RNA、ERCC1 SNP、XRCC1、GSTM1 SNP、GSTP1 SNP 吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA肾透明细胞癌药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物索拉菲尼（多吉美）、舒尼替尼（索坦）、贝伐单抗（安维汀）VEGFR2 mRNA、 PDGFR mRNA化疗药物吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA 脑胶质瘤药物检测基因（具体检测项目见后面目录）靶向药物厄洛替尼（特罗凯）、吉非替尼（易瑞沙）（血）EGFR突变、（血）K-ras突变、EGFR拷贝数拉帕替尼PIK3CA突变化疗药物替莫唑胺MDR1 SNP卡莫司汀、
17、司莫司汀ERCC1 mRNA、ERCC2 mRNA甲氨蝶呤MTHFR SNP 吉西他滨（泽菲）RRM1 mRNA依托泊苷UGT1A1 SNP、MGMT甲基化5-FU、卡培他滨MTHFR SNP、DPD SNP、TS mRNA 环磷酰胺CYP2C9 SNP分子靶向药物个体化用药检测目录 靶向药物项目名称方法适用样本注解特罗凯-厄洛替尼易瑞沙-吉非替尼EGFR突变多态性5项测序组织、胸腹水、全血等In1(CA)n重复16-疗效Ex18、19、21突变-疗效Ex20/T790M突变-耐药EGFR突变-36个位点qPCR-ARMS组织、胸腹水血EGFR突变-36个位点HRM/测序全血、胸腹水等血EGF
18、R突变-20/T790MHRM全血、胸腹水等EGFR拷贝数FISH白片、组织扩增-疗效 克卓替尼EML4-ALK融合基因PCR石蜡组织阳性-疗效爱必妥、特罗凯、易瑞沙等K-ras突变-12、13测序组织突变-疗效、预后血K-ras突变-12、13HRM全血、胸腹水等EML4-ALK融合基因爱必妥-西妥昔单抗维克替比-帕尼单抗B-raf突变-V600E测序组织突变-疗效血B-raf突变HRM全血、胸腹水等PIK3CA突变-9、20测序/qPCR组织、胸腹水、全血等突变-疗效PTEN mRNAqPCR组织*预约表达高-疗效安维汀-贝伐珠单抗、阿瓦斯汀VEGF mRNAqPCR组织*预约表达高-疗效
19、VEGFR2 mRNAqPCR组织*预约表达高-疗效多吉美-索拉非尼、索坦-舒尼替尼VEGFR2 mRNAqPCR组织*预约表达高-疗效PDGFR mRNAqPCR组织*预约表达高-疗效格列卫-伊马替尼C-Kit-9、11、13、17测序组织突变-疗效PDGFR突变-12、18测序组织突变-疗效格列卫、达沙替尼、尼罗替尼ABL突变-T315IHRM全血、骨髓血慢粒：突变-疗效赫赛汀-曲妥珠单抗、拉帕替尼HER2拷贝数FISH白片、组织扩增-疗效PIK3CA突变-9、20测序/qPCR组织、胸腹水、全血等突变-疗效检测套餐项目名称方法适用样本注解肺癌套餐-组织（特罗凯、爱必妥等）EGFR突变5项
20、、K-ras、B-raf突变测序组织In1(CA)n重复16-疗效Ex18、19、21突变-疗效Ex20/T790M突变-耐药K-ras、B-raf突变-疗效肺癌套餐-血（特罗凯、爱必妥等）血EGFR-36个位点、K-ras、B-raf突变HRM/Cold-PCR全血、穿刺组织、胸腹水等肺癌动态-血（继发耐药）血EGFR20/T790K-ras、B-raf突变HRM/Cold-PCR全血、胸腹水等EGFR-20/T790M突变-耐药K-ras、B-raf突变-疗效乳腺癌21基因+复发风险评估21基因表达量qPCR组织*预约低风险 中风险 高风险：RS18 18RS31  RS31化疗
21、药物个体化用药检测目录检测套餐方法适用样本检测靶标评价注解铂类-卡铂、顺铂、奥沙利铂等氟类-5-FU、卡培他滨等蒽环类-阿霉素、表柔比星等喜树碱类-艾力、伊力替康等抗微管类-紫杉醇、长春碱等甲氨喋呤等依托泊苷、拓扑替康等焦磷酸测序全血EDTA抗凝2mlERCC1 SNP-C118T疗效C/CC/T、T/TXRCC1 SNP-R399QG/GG/A、A/AGSTM1 SNP缺失-/-+/+GSTP1 SNP-I105VG/G、G/AA/AMTHFR SNP-C677TT/TC/CDPD SNP-IVS14+1GA毒性A/AA/GG/GUGT1A1 SNP-28TA6/7TA、7/7TA6/6TA
22、化疗药物项目名称方法适用样本评价注解铂类-卡铂、顺铂、奥沙利铂ERCC1 mRNAqPCR组织疗效表达低表达高BRCA1 mRNAqPCR组织疗效表达低表达高ERCC1 SNP-C118T测序全血疗效C/CC/T、T/TXRCC1 SNP-R399Q测序全血疗效G/GG/A、A/AGSTM1 SNP测序/qPCR全血疗效缺失-/-+/+GSTP1 SNP-I105V测序/qPCR全血疗效G/G、G/AA/A氟类-5-FU、卡培他滨MTHFR SNP-C677T测序全血疗效T/TC/CDPD SNP-IVS14+1GA测序全血毒性A/AA/GG/G5-FUHPLC全血*预约浓度药物血浓度监测TY
23、MS（TS）mRNAqPCR组织疗效表达低表达高培美曲赛-力比泰TYMS（TS）mRNAqPCR组织疗效表达低表达高TYMS SNP-2R/3RqPCR组织疗效3R/3R2R/2R、2R/3R蒽环类-（表）阿霉素、表柔比星、多柔比星GSTP1 SNP-I105V测序/qPCR全血疗效G/G、G/AA/AMDR1 SNP-C3435TqPCR全血*预约疗效T/TC/C、C/T抗微管类-紫杉醇、长春碱TUBB3 mRNAqPCR组织疗效表达低表达高STMN1 mRNAqPCR组织*预约疗效表达低表达高GSTP1 SNP-I105V测序/qPCR全血疗效G/G、G/AA/A泽菲-吉西他滨RRM1 m
24、RNAqPCR组织疗效表达低表达高喜树碱类-艾力、伊力替康UGT1A1 SNP-28TA测序全血毒性6/7TA、7/7TA6/6TA阿那曲唑-艾达来曲唑-芙瑞CYP19A1 SNP-rs4646qPCR全血疗效G/T、T/TG/GCYP19A1 SNP-rs10046G/GG/A、A/A环磷酰胺CYP2C9 SNP-C430TqPCR全血疗效C/C、C/TT/TCYP2C9 SNP-A1075CA/A、A/CC/C、甲氨蝶呤MTHFR C677T测序全血毒性T/TC/C依托泊苷、拓扑替康UGT1A1 SNP-28TAqPCR全血毒性6/7TA、7/7TA6/6TAMGMT甲基化qPCR组织*预
25、约疗效甲基化非甲基化丝裂霉素NQO1 SNP-C609TqPCR全血*预约疗效C/CC/T、T/TNQO1 SNP-C465TqPCR全血*预约疗效C/CC/T、T/T其他分子诊断检测目录疾病项目名称适用样本方法注解膀胱癌膀胱癌染色体畸变尿液、膀胱冲洗液、组织FISH膀胱癌早期诊断、早期筛查、病情监测及预后评估子宫颈癌TERC基因拷贝数脱落细胞、组织 FISH宫颈癌早期诊断、早期筛查、病情监测及预后评估结核病结核菌检查石蜡组织qPCR检出石蜡组织中的结核菌，对组织中的抗酸菌L型更有效自然流产流产组织染色体异常绒毛、胎儿组织FISH对多次自然流产的病因作早期诊断、筛查、病情监测及预后评估血液病-
26、淋巴瘤T细胞+B细胞基因重排组织PCR淋巴造血系统良、恶性疾病的鉴别诊断及分类血液病-慢性粒细胞白血病ABL突变-T315I全血、骨髓血HRM突变-格列卫、达沙替尼、尼罗替尼疗效血液病-骨髓增殖性疾病JAK2突变-V617F全血、骨髓血HRM/测序突变-骨髓增殖性疾病（MPD）或异常增生综合征（MDS）或复发其他血液病详见血液病检测目录标本采集等要求简介标本采集、保存和运送标准操作规程血液标本1.血液标本必须用EDTA或枸橼酸盐抗凝的真空采集管采集血液标本2mL以上，血液标本抗凝剂严禁使用肝素。 2.血液标本采集后应置于28保存，24小时内提取DNA可获得最佳效果。因此，送检单位或个人应尽快将
27、血液标本送至我检验中心。 3.外地需要邮寄的血液标本在运送前应切实做好包装保护：为防止运送过程中，采血管盖脱离，应使用石蜡膜或透明胶带封住管盖；应使用轻质且不易破碎包装物，如瓦楞纸箱等；为保证真空管在运送过程中不会发生相互或与包装物碰撞，应在包装间隙用细碎轻质材料填充；包装容器中还应放入足够冰袋，保证在整个邮寄过程中标本保持低温；包装物在标本放入后用透明胶带密封。邮寄的应选择服务质量优、信誉好、速度快的快递公司进行运送，并在办理业务后及时将运输单传真，便于我检验中心查询。4.如果送样单位不能确保血液标本快速送达我检验中心，可由送样单位组织专业人员按照我检验中心相关制度和标准操作规程提取DNA后再送样检测。我检验中心工作人员收到样本后必须及时进行电泳检测以鉴定DNA质量。 5.送样时，请务必写清楚如下信息：医院名称、患者姓名、性别、年龄、联系方式、科室和诊断结果等。 石蜡包埋或甲醛固定标本1. 样本类型检测样本包括新鲜肿瘤组织、石蜡包埋肿瘤组织块和石蜡组织切片等。2. 送样要求新鲜肿瘤组织块：要求提供25mg左右（大于米粒大小即可）的样本(手术样本或肠检样本)，将样本放置于10中性福尔马林溶液中，常温运输。 石蜡包埋肿瘤组织块：要求提供石蜡包埋组织1块，常温保存、运输。剩余蜡块归还。 石蜡包埋肿瘤组织
