1、,低倍镜操作方法,1.两眼从侧面注视低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距23mm时停止；2.左眼观察，并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐升降，直到看清物象为止；3.再用微调细准焦螺旋调至清晰。,高倍镜操作方法,1.将低倍镜观察到的目标移动至视野中央；2.将低倍镜镜头转换成高倍镜镜头。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面；3.用微调焦螺旋调至清晰。观看的物体数目变少，但是体积变大。注意：高倍镜观察时，光线需增强。,2、染色和制片,由于微生物细胞含有大量水分，机体是无色透明的，与
2、周围背景没有明显的反差,必须进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。,染色方法,（一）简单染色法 简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。（二）复染色法 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为
3、革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。,（一）细菌的简单染色步骤 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检1涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量培养物与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。,实验内容与步骤,3固定
4、 手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过23次，共约23秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60）,放置待冷后，进行染色。4染色 在涂片薄膜上滴加染色液（石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种）一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。5水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。7镜检,（二）细菌的革兰氏染色步骤 涂片干燥固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥观察a取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。b用草酸铵结晶紫染色1
5、min后水洗。c加碘液媒染1min后水洗。d斜置载玻片，滴加95乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时2030s，随即水洗。e用蕃红染液复染1min，水洗。f用吸水纸吸掉水滴，在显微镜下观察。,步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上,步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上,步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层,步骤4：风干,步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定,步骤6：结晶紫染色1分钟,步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片,步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗,步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗,步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗,大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图,革兰氏染色阴性杆菌（红色）,金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色,革兰氏染色阳性球菌（紫色）,注意事项,1革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。2选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等也是实验成功的关键。,微生物制片 染色 显微镜观察,
