1、免疫标准操作程序SOP标准操作程序项 目甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号CHDEYY-JYK-MY-001文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程
2、序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经专业主管、科主任批准签字。标本的采取和保存采静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理采用兔抗-人IgMu链包被反应被，加入待测标本，同时加入HAVAg，抗HAV-HRP，如待测标本中含有抗-HAV-IgM时，就能与包被兔抗-人IgMu链结合，并且与HAVAg,抗-HAV-HRP结合成复合物，加TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。操作步骤1.将待测标本用生理盐水作（1：1000）稀释，每孔加入稀释标本100ul，设阴、阳性对照各2空，每孔
3、加入阴性对照（或阳性对照）100ul（或2滴），并设空白对照一孔，封板，置37度孵育20分钟。2.洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。3.每孔加入HAVAg30ul（或一滴），酶结合物50ul（或一滴），（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟。4.洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。5.每孔加显色剂A液、B液各50ul（或一滴），充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。6.每孔加入终止液50ul（或一滴），混匀。7.用酶标仪读数
4、，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2.1判断为阳性，否则为阴性阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算临床意义血清中HAVIgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在
5、10分钟内完成。实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2页 第2页2005-01-016封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝表面抗原检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-002文件版本号第1版医务科保管者院长办公室
6、保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗体夹心法测HBsAg：抗S包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度
7、成正比。操作步骤1实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。2加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。3加酶结合物：每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37孵育30分钟。4洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置510秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。5加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37避光孵育15分钟。6终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀
8、。7测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。临床意义HbsAg在感染早期出现于患者血循环中，可持续数月，数年乃至终生，是诊断HBV感染最常用的指标。但所谓HBV感染的“窗口期”，HbsAg可以阴性，而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30
9、分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页 第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝表面抗体检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年0
10、1月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-003文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗原夹心一步
11、法测HbsAb：S抗原反应包被板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样品中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤1实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。2加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。3加酶结合物：每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37孵育30分钟。4洗板：a)手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置510秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b)洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。5加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05
12、毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37避光孵育15分钟。6终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。7测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。临床意义抗HBs为HBV的中和抗体，有清除HBV，防止在感染的作用，抗HBs一般出现于乙肝患者恢复期，提示感染已终止。此外，注射过乙肝疫苗的人，抗HBs阳性。注意事项1试剂使用前应摇匀，
13、并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页 第2页2005-01-015结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝E抗原检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日
14、期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-004文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜
15、，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗体夹心法测HbeAg：抗e包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗e，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤1实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。2加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。3加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37孵育30分钟。4洗板：a)手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置510秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b)洗板机洗板：选择
16、洗涤5次的程序洗板，最后拍干。5加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37避光孵育15分钟。6终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。7测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。临床意义HBeAg是HBV的核心部分，故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志，在乙肝潜伏期乃至整个病程中，HBeA
17、g均可检出。抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页 第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请
18、按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝E抗体检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-005文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜湖市第一人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作程序WDYYY-JYK-MY-005共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作
19、程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理竞争抑制一步法测HBeAb：抗e包被反应板，加入待测血清后，加入中和e抗原，再加入酶标抗e，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。操作步骤1验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。2加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。3加中和试剂：每孔0.
20、05毫升，空白对照孔不加。4加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37孵育30分钟。5洗板：a)手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置510秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b)洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。6加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37避光孵育15分钟。7终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。8测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*0.3标本O
21、D值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性注：非原倍血清样品（稀释血清、质控血清）COV=阴性对照*0.5临床意义抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-005共2页 第2页2005-01
22、-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝核心抗体检测的标准操作程序方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-006文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操作程序WH
23、DEYY-JYK-MY-006共2页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理竞争抑制一步法测HBcAb：抗c包被反应板，加入待测血清后，加入中和c抗原，再加入酶标抗抗c，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。操作步骤1实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：2
24、0稀释。2加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。1）1：30稀释血清（血浆）检测结果代表临床意义，待检标本可用稀释后的洗涤液加以稀释2）原倍血清（血浆）检测结果代表流行病学意义。3酶结合物：每孔0.05毫升（抗HBc1：30稀释血清代表临床意义，可用稀释后的洗涤液加以稀释；原倍血清代表流行病学意义），空白对照孔不加，充分混匀，置37孵育30分钟。4洗板：a)手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置510秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b)洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。5加显色剂：先加显色剂A，每孔0
25、.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37避光孵育15分钟。6终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。7测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：原倍血清COV=阴性对照平均OD值*0.31：30稀释血清COV=阴性对照平均OD值*0.5标本OD值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。临床意义抗HBc是HBeAg的相应抗体，也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。持续时间长，甚至终生存在。几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc，故它是乙肝流行病学调查的良好
26、指标。在HBV感染的“窗口期”抗HBc常是唯一可测出的HBV血清标志物。注意事项实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2页 第2页2005-01-011试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项 目乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操
27、作程序 方 法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-007文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-007共1页 第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经
28、下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理用乙肝病毒Pre S1蛋白抗体和抗HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。采用ELISA双抗体夹心一步法检测标本中的乙肝病毒Pre S1蛋白。操作步骤1将包被条固定于支架并编上序号。2设阳性对照2孔，每孔加入阳性对照50微升，阴性对照2孔，每孔加入阴性对照50微升，空白对照一孔，加入生理盐水100微升。然后，依次在反应孔内加入待测样品50微升，除空白孔外，每孔再加酶结合物50微升，置微型震荡器混匀5秒后，盖好封片放37孵育60分钟。3弃去反
