微生物限度检查法培养基及其制备方法.docx
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微生物限度检查法培养基及其制备方法
微生物限度检查法——培养基及其制备方法
1、营养肉汤培养基
胨10g肉浸液1000ml
氯化钠5g
取胨与氯化钠,加入肉浸液内,微温溶解后,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节
pH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,115℃灭菌30分钟。
2、营养琼脂培养基
照上述营养肉汤培养基的处方及制法,加入15~20g琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2
±0.2,分装,115℃灭菌30分钟。
3、虎红琼脂培养基
胨5g虎红(四氯四碘荧光素)0.0133g
葡萄糖10g(或0.133%虎红溶液10ml)
磷酸二氢钾(KH2PO4)1g琼脂15~20g
硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g水1000ml
除葡萄糖、虎红外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、虎红,
分装,115℃灭菌30分钟。
4、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)
胨10g琼脂15~20g
酵母浸出粉5g水1000ml
葡萄糖20g
除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热融化后,滤过,加入葡萄糖,分装,115℃
灭菌15分钟。
5、胆盐乳糖培养基(BL)
胨20g牛胆盐1.3g
乳糖5g(或去氧胆酸钠0.25g)
氯化钠5g水100ml
磷酸氢二钾(K2HPO4)4.0g
磷酸二氢钾(KH2PO4)1.3g
除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,
煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,115℃灭菌30分钟。
6、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB)
营养琼脂培养基100ml2%曙红溶液2ml
20%乳糖溶液 5ml0.5%亚甲蓝溶液1.3~1.6ml
取营养琼脂培养基,加热融化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,
摇匀,倾注平皿。
7、麦康凯琼脂培养基(MaCC)
胨20g1%中性红溶液2.5ml
乳糖10g琼脂15~20g
牛胆盐5g水1000ml
氯化钠5g
除乳糖、1%中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合,加热使溶解,调节
pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热融化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,
115℃灭菌30分钟,冷至约60℃,倾注平皿。
8、三糖铁琼脂培养基(TSI)
胨20g硫酸亚铁0.2g
牛肉浸出粉5g硫代硫酸钠0.2g
乳糖10g0.2%酚红溶液12.5ml
蔗糖10g琼脂12~15g
葡萄糖1g水1000ml
氯化钠5g
除三糖、0.2%酚红溶液、琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭
菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热融化后,滤过,再加入其余成分,摇匀,分装,115℃
灭菌30分钟,制成高底层(2~3cm)短斜面。
9、四硫磺酸钠亮绿增菌液(TTB)
胨5g硫代硫酸钠30g
牛胆盐1g水1000ml
碳酸钙10g
取上述成分,混合,微温使溶解,121℃灭菌20分钟。
临用前,取上述培养基,每10ml中加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g,溶于20ml水中)
0.2ml和0.1%亮绿溶液0.1ml,混匀。
10、沙门氏、志贺氏菌属琼脂培养基(SS)
胨5g硫代硫酸钠8.5g
牛肉浸出粉5g 1%中性红溶液2.5ml
乳糖10g 0.1%亮绿溶液0.33ml
牛胆盐8.5g 琼脂20g
枸橼酚钠8.5g水1000ml
枸橼酸铁铵1g
除糖、指示剂、琼脂外,取上述成分混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2
±0.1,滤过,加入琼脂,加热融化后,121℃灭菌20分钟,再加入其余成分,摇匀,冷
至约60℃,倾注平皿。
11、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基
胨10g牛肉浸出粉3g
氯化钠5g琼脂15~20g
十六烷三甲基溴化铵0.3g水1000ml
除琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,加入琼
脂,加热熔化后,分装,121℃灭菌20分钟,冷至约60℃,倾注平皿。
12、亚碲酸盐肉汤培养基
临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml中加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)溶
液0.2ml,混匀,即得。
13、卵黄高盐琼脂培养基
胨6g10%氯化钠卵黄液100ml
牛肉浸出粉1.8g琼脂23g
氯化钠30g水650ml
除10%氯化钠卵黄液外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.6±
0.1。
121℃灭菌20分钟,待冷至约60℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分摇匀,
倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋一个,以无菌操作取出卵黄,放入10%灭菌
氯化钠溶液100ml中,充分振摇,即得。
14、甘露醇高盐琼脂培养基
胨10g1%酚红溶液2.5ml
牛肉浸出粉1g琼脂15~20g
甘露醇10g水1000ml
氯化钠75g
除甘露醇、1%酚红溶液及琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌
后为7.4±0.2,加入琼脂,加热融化后,滤过,分装,115℃灭菌30分钟,冷至约60℃,
倾注平皿。
15、蛋白胨水培养基
胰蛋白胨10g水1000ml
氯化钠5g
取上述成分混合,加热融化,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管中,121
℃灭菌20分钟。
16、磷酸盐葡萄糖胨水培养基
胨7g葡萄糖5g
磷酸氢二钾(K2HPO4)3.8g水1000ml
取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管中,
121℃灭菌15分钟。
17、枸橼酸盐培养基
氯化钠5g枸橼酸钠(无水)2g
硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g溴麝香草酚蓝指示液20ml
磷酸氢二钾(K2HPO4)0.8g琼脂15~20g
磷酸二氢铵(NH4H2PO4)1g水1000ml
除溴麝香草酚蓝和琼脂外,取上述成分,混微温使溶解,调节pH值使灭菌后为6.9±
0.1,加入琼脂,加热融化,加入指示剂混匀。
分装于小试管中,121℃灭菌15分钟,置
成斜面。
注:
所用琼脂应不含游离糖,用前用水浸泡冲洗。
18、糖、醇发酵培养基
基础液
胨10g0.5%酸性复红指示剂10ml
糖、醇0.5%(或溴麝香草酚蓝指示液6ml)
氯化钠5g水1000ml
取胨和氯化钠加入水中,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4,加入指示剂混匀,
分装每瓶100ml,121℃灭菌15分钟。
配制葡萄糖发酵管时,于100ml基础液中加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管(Durham)
的小试管中。
121℃灭菌15分钟,配制其它糖醇发酵管时,将各种糖醇分别配成10%溶液,
与基础液同时于121℃灭菌15分钟。
以无菌操作将5ml糖醇溶液加入100ml基础液内,分装
于灭菌小试管中。
注:
糖醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
19、5%乳糖发酵管
胨0.2g乳糖5g
氯化钠0.3g溴麝香草酚蓝指示液0.6ml
磷酸氢二钠(Na2·HPO4·12H2O)0.2g水1000ml
除乳糖和指示剂外,取上述成分,混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4,加
入乳糖及指示剂,混匀,分装于含杜氏管的灭菌小试管中,115℃灭菌15分钟。
20、尿素琼脂培养基
胨1g葡萄糖1g
氯化钠5g20%尿素溶液1000ml
磷酸二氢钾(KH2PO4)2g琼脂20g
0.2%酚红溶液6ml水1000ml
除尿素和琼脂外,取上述成分,混合,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,
加热溶化并分装于锥形瓶,121℃灭菌20分钟。
冷至50~55℃,加入经薄膜过滤除菌的尿
素溶液,混匀。
尿素的最终浓度为2%,分装于灭菌试管中,置成斜面。
21、氰化钾培养基
胨3g磷酸氢二钠(Na2HPO4)5.64g
氯化钠5g氰化钾试液
磷酸二氢钾(KH2PO4)0.225g水1000ml
除氰化钾试液外,取上述成分,混合,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,121℃灭菌20
分钟,冷却后,每100ml培养基中加入氰化钾试液1.5ml,分装于12×100mm灭菌试管内,
每管4ml,立即用灭菌橡皮塞塞紧,置4℃保存。
同时,以不加氰化钾试液的培养基作为
对照培养基,分装于灭菌试管中。
22、赖氨酸脱羧酶试验培养基
胨5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml
酵母浸出粉3gL-赖氨酸(DL-赖氨酸)0.5(1g)/100ml
葡萄糖1g水1000ml
除赖氨酸外,取上述成分,混合,加热溶解后分装,每瓶100ml。
加入L-赖氨酸0.5
g(DL-赖氨酸1g)调节pH值使灭菌后为6.8,同时以不加赖氨酸培养基作为对照。
分装于
灭菌的小试管内,每管1ml并滴加一层液体石蜡,121℃灭菌10分钟。
23、绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂)
胨20g甘油10ml
氯化镁(无水)1.4g琼脂18~20g
硫酸钾(无水)10g水1000ml
取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中,微温使深解。
调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加
入甘油及琼脂,加热溶解,121℃灭菌20分钟,置成斜面。
24、明胶培养基
胨5g明胶120g
牛肉浸出粉3g水1000ml
取上述成分加入水中,浸泡约20分钟,随时搅拌,加热使溶解,调节pH值使灭菌后
为7.3±0.1,分装于小试管中,115℃灭菌20分钟。
25、硝酸盐胨水培养基
胨10g亚硝酸钠0.5g
酵母浸出粉3g水1000ml
硝酸钾2g
取胨及酵母浸出粉加入水中,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入硝
酸钾和亚硝酸钠溶解,混匀。
分装于含杜氏管的小试管中,115℃灭菌20分钟。
26、胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)
胨20g枸橼酸钠1g
牛肉浸出粉3g枸橼酸铁铵1g
乳糖10g1%中性红溶液3ml
蔗糖10g琼脂18~20g
去氧胆酸钠1g水1000ml
硫代硫酸钠2.3g
除糖、1%中性红溶液及琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后
为7.2±0.1,加入琼脂,加热融化后,再加入其余成分,摇匀,冷至约60℃,倾注平皿。
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- 微生物 限度 检查法 培养基 及其 制备 方法