组织培养实验器材.docx
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组织培养实验器材
植物组织培养设备:
1、高压消毒锅:
用于培养基、蒸馆水和接种器械的灭菌消毒。
2、超净工作台:
用于培养物的无菌操作。
3、接种工具:
包括双筒实体显微镜、镶子、剪刀、解剖刀、酒精灯或接种灭菌器(电热消毒器)等。
4、培养设备:
包括空调机、定时器、温度控制器、增湿机或去湿机、培养架、摇床、恒温培养箱、人工培养箱等。
5、化学实验及分析设备:
包括分析天平,天平、酸度计、蒸馆水器、烘箱或玻璃仪器烘干器、电炉、药品柜、冰箱、晾干架等。
6、封口膜,培养瓶,试管,培养皿,专用记号笔,托盘,手术接种剪,直镶,枪型接种镶,手术刀柄,超净工作台,接种灭菌器,不锈钢接种盘,组织培养架,光照培养箱,人工气候箱,生化培养箱,恒温恒湿箱,照度计,PH计,酸度计,电导率仪,干湿温度计,玻璃棒温度计,电子天平,精密电子秤,磁力搅拌器,生物显微镜,高压灭菌锅,纯水器,组培推车,三角烧瓶,烧杯,量筒,试管架,试管刷,容量瓶,酒精灯,干燥器,吸球及移液
管(20ML),容量瓶,试剂瓶(含棕色试剂瓶)。
组培试剂类:
.植物生长调节剂类Plantgrowthregulator:
6-节氨基喋吟(6-BA)6-Benzylaminopurine;
6-糠氨基喋吟(KT;激动素)6-Furfurylaminopurine(Kinetin);
腺喋吟(腺素)Adenine;
氯毗苯月尿(KT-30;CPPU)Forchlorfenuron;
反玉米素Trans-zeatin;
塞苯隆(TDZ)Thidiazuron;
生物素Biotin;
也-荼乙酸(NAA)I-Naphthylaceticacid;
3-口引噪乙酸(IAA)3-Indoleaceticacid;
3-口引噪丁酸(IBA)3-Indolebutyricacid;
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2,4-Dichlorophenoxyaceticacid赤霉素GA3Gibberellicacid;
奈乙酰胺(NAD2-(1-Naphthyl)acetamide;
6-奈氧乙酸6-Naphthoxyaceticacid;
对氯苯氧乙酸(防落素)4-Chlorphenoxyaceticacid;
对漠苯氧乙酸4-Bromophenoxyaceticacid;
对碘苯氧乙酸4-Iodophenoxyaceticacid;
24-表油菜素内脂24-Epibrassinolide;
芸苔素内酯Brassinolide;
赤霉素GA4+7(GA4:
GA7=1:
2)GibberellinA4+7;
青鲜素Maleichydrazide;
丁酰腓(比久)Daminozide;
口引噪-3-丙酸Indole-3-propanoicacid
口引噪-3-丙烯酸3-Indole-propenoicacid
口引噪-3-甲醇3-Indole-methanol;
口引噪-3-甲醛Indole-3-carboxylicacid
口引噪-3-甲酸Indole-3-carboxylicacid
三十烷醇Triacontanol;
多效哇(PP333)Paclobutrazol;
2,4-D钠盐;
缩节胺Mepiquatchloride;
矮壮素Chlormequat;
乙烯利Ethephon。
.有机物类Organicmatter:
烟酸Nicotinicacid;
肌醇myo-Inositol;
盐酸硫胺(VB1)ThiamineHCL,VB1;
盐酸毗哆辛(VB©PyridoxinHCL,VB6;
甘氨酸Glycine;
叶酸Folicacid;
核黄素(VB2)Riboflavin,VB2;
抗坏血酸(VC)Ascorbicacid,VC;
正丁酸n-Butyricacid;
柠檬酸Citricacidmonohydrate;
蔗糖Sucrose;
DL-精氨酸DL-Arginine;
腺喋吟硫酸盐Adeninesulfate;
葡萄糖Glucose(Dextrose);
蛋白月东Peptone;
水解酪蛋白Caseinacidhydrolysate;
水解孚L蛋白Lactoalbuminhydrolysate。
.无机物类:
硫酸铁Ferricsulfate;
乙二胺四乙酸二钠盐Ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt;
乙二胺四乙酸铁钠盐Ethylenediaminetetraaceticacidmonosodiumferricsalt;硼酸Boricacid;
氯化钻CobaltChloride;
碘化钾Potassiumlodide;
钳酸钠Sodiummolybdate;
无水氯化钙Calciumcholorideanhydrous;
二水氯化钙Calciumcholoride;
干燥氯化钙Calciumcholoride(fordrying);
硝酸钙Calciumnitrate;
D-泛酸钙CalciumD-pantothenate;
磷酸三钙Tri-Calciumphosphate;
硫酸铜Cupricsulfate;
硝酸胺AmmoniumNitrate;
硝酸钾PotassiumNitrate;
结晶硫酸镁Magnesiumsulfate;
硫酸亚铁FerrousSulfate
磷酸二氢车甲Potassiumdihydrogenphosphate;
硫酸锭ManganeseSulfate;
硫酸锌Zincsulfate;
磷酸二氢钠Sodiumphosphatemonobasic;
三氧化字目MolybdenumTrioxide;
氯化车甲Potassiumchloride;
氢氧化钾Potassiumhydroxide;
硫酸铉Ammoniumsulfate;
二氧化钛Titanlumdioxide。
.日用耗材Consumptivematerialofdailyexpenses:
琼脂粉Agar;
冷凝脂FungibleAgar;
活性炭粉CarbonActivated;
超细活性炭粉WispyCarbonActivated。
消毒试剂类:
甲醛(福尔马林溶液)Formalin;
高锭酸钾Potassiumpermanganate;
新基尔灭(苯扎漠铉溶液)BenzalkoniumBromideSolution
安替福民(次氯酸钠溶液);
过氧化氢30%(双氧水)HydrogenPeroxide氯化汞。
一、实验室设计
1.准备室:
(1)进行药品的保存、配置、消毒、分装等。
(2)器具的洗涤、干燥、消毒。
(3)生理生化指标的测定等。
2.接种室:
进行材料的接种,内置超净工作台或接种箱。
外设缓冲间-放
置拖鞋、工作服、工作帽等。
3.培养室:
植物材料的无菌培养,室内主要有培养架和控制温度及光照的
设备。
4.细胞学观察实验室:
进行培养材料的组织学、细胞学、观察照相等。
二、玻璃器皿的选择和清洗
1.玻璃器皿的选择
*试管-适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。
*三角锥瓶-适用于各种培养(如固体培养、液体培养、大规模培养或一般
*L形管和T形管-为专用的旋转式液体培养试管。
*培养皿-适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。
*角形培养瓶和圆形培养瓶-适用于液体培养用,如单细胞和原生质体的浅
层培养。
*果酱瓶-常用作试管苗大量繁殖用的培养瓶。
药品试剂:
MS培养基的配制步骤
这样每次使用时,取其总量的1/20(50mL)或1/200(5mL),加水稀释,制成
培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液I)mg/L
33000
38000
CaCl2-2H2O8800
MgSO•7H2O7400
KHPO3400
微量元素(母液U)
KI166
H3BO1240
MnSO・4H2O4460
ZnSO-7H2O1720
N&MoO•2H2O50
CuSO•5H2O5
CoCl2-6H2O5
铁盐(母液m)
FeSO-7H2O5560
N&-EDTA2H2O7460
有机成分(母液IV)IVA
20000
IVB
100
盐酸毗哆醇
(维生素B6)
100
盐酸硫胺素
(维生素B1)
100
甘氨酸
400
以上各种营养成分的用量,
除了母液I为
20倍浓缩液外,其余的均为
200倍
浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。
其中,
母液I、母液皿及母液IV的配制方法是:
每种母液中的几种成分称量完毕后,
分别用少量的蒸僻水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1L。
母液川的配制方法是:
将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2。
分别放到450mL蒸僻水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至
55,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入:
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、(NAA)、6-节基喋吟(6-BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(01mg/mL)。
其配制方法是:
分别称取这
3种物质各10mg,将2,4-D和NAA用少量(1mL)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1mL)的物质的量浓度为mol/L的NaOH容液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100mL,即得质量浓度为01mg/mL的母液。
配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:
母液I为50
mL,母液皿、川、IVA和IVB各5mL。
再取2,4D5mL、NAA1mL,与各种母液一起放入烧杯中。
MS培养基配制培养液时的注意事项
配制培养液时应注意:
1在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;
2用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;
3量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉
1种,以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蔗糖30g,放入1000mL
的搪瓷量杯中,再加入750mL用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈
半透明状。
然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸僻水定容至1000mL,搅拌均匀。
需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否
则沸腾的外溢,就需要重新称量、制备。
此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代
替。
但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,
造成烫伤。
调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH容液,逐滴滴入溶化
的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸〜测培养基的pH,一直到培养
基的pH为为止(培养基的pH必须严格控制在。
培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。
分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50mL
或100mL)中。
注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。
锥形瓶中培养基的量约为锥
形瓶容量的1/5〜1/4。
每1000mL培养基,可分装25〜30瓶。
培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。
用2块硫酸纸(每块大小约为9cm<9cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。
最后在锥形瓶外壁贴上标签。
B5培养基配方
成分
使用浓度(mg/L)
大里兀系
硝酸钾KNO3
2500
MgSO47H2O
250
CaCl2•2H2O
150
(NH4)2SO4
134
彳商里儿条
KI
H3BO4
MnSO44H2O
10
ZnSO47H2O
Na2MoO42H2O
CoCl2•6H2O
铁盐
CuSO45H2O
Na2-EDTA
FeSO47H2O
有机成分
肌醇
100
烟酸
盐酸毗哆醇
盐酸硫铉
10
M卵养基配方:
成分分子量使用浓度(mg/L)
硝酸钾KNO31900
硝酸铉NH4NO31650
大量元素磷酸二氢钾KH2PO4170
硫酸镁370
氯化钙440
碘化钾KI
硼酸H3BO3
硫酸镒
微量元素硫酸锌H2O
钥酸钠H2O
硫酸铜H2O
氯化钻
铁盐乙二胺四乙酸二钠
硫酸亚铁
肌醇100
甘氨酸2
有机成分盐酸硫胺素VB1
盐酸毗哆醇VB6
烟酸VB5或VPP
蔗糖sucrose30g/L
B5培养基的组成和配方
组成成分数量(mg/l)
KNO32500
大量元素CaCl2・2H2O150
MgSO47H2O250
(NH4)2SO4134
KI
H3BO4
MnSO44H2O10
微量元素ZnSO47H2O
Na2MoO42H2O
CoCl2•6H2O
CuSO45H2O
铁盐Na2-EDTA
FeSO47H2O
肌醇100
烟酸
有机成分盐酸毗哆醇
盐酸硫铉10
N6培养基配方
组成成分数量(mg/l)
硝酸钾(KN03)2830
硫酸铉(NH4SO4)463
大量元素氯化钙(CaCl2-2HzO)166
硫酸镁(MgSO47H20)185
磷酸二氢钾(KH2PO4)400
硫酸亚铁(FeS04-7H20)
硫酸镒(MnS04・4H20)
微量元素硫酸锌(ZnSO4・7H20)
硼酸(H2BO3)
碘化钾(KI)
甘氨酸2
有机成分烟酸
盐酸硫胺素(维B1)
盐酸毗哆素(维B6)
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- 组织培养 实验 器材