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酶学与酶工程学习重点知识整理
酶的定义与化学本质
定义:
酶---活细胞产生的,能在细胞内外起作用的(催化)生理活性物质。
酶的化学本质:
酶是生物体内一类具有催化活性和特殊空间构象的生物大分子物质,包括蛋白质和核酸等
酶催化作用的特点
1.催化效率极高
反应速度比无催化剂时高108~1020倍,比其他催化剂高107~1013倍。
常用分子比来表示,即每摩尔的酶催化底物的摩尔数。
Kcat:
每秒每个酶分子能催化多少个微摩尔的底物发生转化。
2.高度的专一性
酶对反应物(底物)具有严格的选择性。
一种酶只能催化某一种或某一类特定的底物发生反应。
绝对专一性:
有些酶只作用于一种底物,催化一个反应,而不作用于任何其它物质。
相对专一性:
这类酶对结构相近的一类底物都有作用。
包括键专一性和簇(基团)专一性。
立体异构专一性:
这类酶能辨别底物不同的立体异构体,只对其中的某一种构型起作用,而不催化其他异构体。
包括旋光异构专一性和几何异构专一性。
3.反应条件温和
酶在强酸、强碱、高温、高压等条件下会变性失活,故催化反应一般在常温、常压、接近中性的溶液中进行。
4.酶的催化活性是受调节控制的
易受各种因素的影响,在活细胞内受到精密严格的调节控制,这是酶与非生物催化剂的本质区别。
酶的国际系统分类法及编号
1.氧化还原酶
2.转移酶
3.水解酶
4.裂合酶
5.异构酶
6.合成酶
酶活力、酶单位、比活力
酶活力(也称酶活性):
指酶专一催化一定化学反应的能力。
酶单位(u):
在酶作用最适底物、最适pH、最适缓冲液的离子强度及25℃下,每分钟内催化1.0微摩尔底物转化为产物底酶量为一个国际酶活力的单位(IU)。
比活力(specificactivity):
每mg蛋白质所具有的酶活力单位数,用(U/mg蛋白)来表示。
酶活力测定方法
单体酶,寡聚酶(oligomericenzyme),多酶体系(multienzymesystem),多酶复合体
单体酶:
它是一个具有完整生物功能、独立三级结构的单酶蛋白部分只有一条多肽链的酶称为单体酶。
寡聚酶(oligomericenzyme)由两个或两个以上亚基组成的酶称为寡聚酶。
四级结构是完整生物功能分子结构形式,是酶活性所必须的。
亚基可以是相同的,也可以是不同的。
亚基之间是以非共价键结合,彼此之间很容易分开,分开后酶活性就会丧失。
与单体酶相比,寡聚酶具有变构作用,与调节因子结合后,能发生构象变化,导致催化活性的变化,从而对代谢起调节作用。
多酶体系(multienzymesystem)由若干酶相互连接形成的反应链体系称为多酶体系,而具体的化学反应过程称为代谢途径。
如糖酵解途径中的10种酶构成了一个多酶体系。
多酶复合体:
由几种酶以非共价键彼此嵌合形成一个功能完整的具有特定结构的复合体,称为多酶复合体。
它有利于一系列反应的连续进行,大大提高催化效率,同时有利于进行调控。
这类多酶复合体分子量很高,一般在几百万以上。
四级结构对于多酶复合体很重要,一旦复合体解体,各个酶单独无法实现催化。
二级结构的种类
a-螺旋及结构特点
肽链内形成氢键,氢键的取向几乎与轴平行,每个氨基酸残基的C=O氧与其后第四个氨基酸残基的N-H氢形成氢键。
绝大多数天然蛋白质中的a-螺旋几乎都是右手螺旋。
a-螺旋都是由L-型氨基酸构成的(Gly除外)。
b-折叠(b-pleatedsheet)
b-折叠或b-折叠片也称b-结构或b-构象,它是蛋白质中第二种最常见的二级结构。
b-折叠是由两条或多条几乎完全伸展的多肽链平行排列,通过链间的氢键进行交联而形成的,或一条肽链内的不同肽段间靠氢键而形成的。
肽链的主链呈锯齿状折叠构象
b-转角
在b-转角部分,由四个氨基酸残基组成;弯曲处的第一个氨基酸残基的-C=O和第四个残基的–N-H之间形成氢键,形成一个不很稳定的环状结构。
其特点是肽链回折180度
无规卷曲或自由回转
肽段在空间的不规则排布称为无规则卷曲。
在一般球蛋白分子中,往往含有大量的无规则卷曲,它使蛋白质肽链从整体上形成球状构象。
超二级结构:
在蛋白质分子中,若干具有二级结构的构象单元彼此相互作用,形成有规则的,在空间内上能辨认的二级结构组合体称超二级结构。
只是结构的单位,作为结构域和三级结构的建筑块,只涉及主链构象,不涉及与功能表达相关的侧链结构,故不代表功能单位。
结构域:
多肽链在超二级结构基础上进一步盘绕折叠成的近似球状的紧密结构。
既是结构单位,又是功能单位。
对于较大的蛋白质分子或亚基,多肽链往往由两个或两个以上相对独立的结构域缔合而成三级结构。
结构域包含侧链结构在内的肽链空间构象,相同的结构域可以作为组件存在在不同的酶(三级结构)当中
一级结构:
蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中Aa的排列顺序,包括二硫键的位置。
二级结构:
由蛋白质主链折叠所形成的有规则的构象,称为蛋白质的二级结构。
蛋白质的二级结构是指蛋白质多肽链主链原子局部的空间结构,不包括与其他肽段的相互关系及侧链构象的内容。
三级结构:
多肽链在二级结构、超二级结构和结构域的基础上,主链构象和侧链构象相互作用,沿三维空间多方向卷曲,进一步盘曲折叠形成特定的球状分子结构。
在三级结构中,具有极性侧链基团的AA残基几乎全部在分子的表面,而非极性残基则被埋于分子内部,不与水接确.而形成疏水的核心。
四级结构:
指由两个或两个以上具有三级结构的多肽链按一定方式聚合而成的特定构象的蛋白质分子。
其中每条多肽链称为亚基。
内容包括:
亚基的种类和数目亚基之间的排布
疏水键是最主要的作用力
活性中心的重要化学基团
7种氨基酸出现的频率最高
LysAspGluCysHisTyrSer
研究酶活性中心的方法(了解)
1.物理学方法:
用X射线衍射法直接检测底物或其类似物与酶形成的中间复合物(包括酶和底物)的相对位置。
2.化学修饰法
1)非专一性化学修饰
2)专一性化学修饰
3)亲和标记
催化机制
趋近效应:
在酶促反应中,由于酶和底物分子之间的亲和性,底物分子有向酶的活性中心靠近的趋势,最终结合到酶的活性中心,使底物在酶活性中心的有效浓度大大增加的效应。
定向效应:
当专一性底物向酶活性中心靠近时,会诱导酶分子构象发生改变,使酶活性中心的相关基团和底物的反应基团正确定向排列,同时使反应基团之间的分子轨道以正确方向严格定位,使酶促反应易于进行。
构象变化效应
当酶与底物靠近时,不仅酶构象受底物作用而变化,底物分子也常常受酶作用而变化,也就是酶使底物分子中的敏感键发生“变形”,从而促使底物中的敏感键更易于破裂。
因而更容易形成一个互相契合的酶—底的复合物而提高催化效率。
酸碱催化
狭义酸碱催化:
由H+或OH-来催化反应
广义酸碱催化:
由质子供体或质子受体来催化反应这里指的是广义的酸碱催化。
酶活性中心的一些基团(如:
氨基、羧基、酚羟基、咪唑基等)可作为质子供体或受体对底物进行催化,从而加快化学反应速度。
共价催化
某些酶能与底物形成一个反应活性很高的共价中间复合物。
底物只需越过较低的活化能就可以形成产物,从而提高了反应速度。
共价催化又分为亲核催化和亲电催化。
自我剪接:
核酶通过酶RNA或其辅助因子上所含嘌呤-OH攻击分子本身的剪切点,而催化自我剪接反应。
自我剪切
具有独特空间结构和构象,并且具有特定的保守序列和剪切点序列的核酶在剪切位点的自我切断
米氏方程
米氏常数的意义
1)Km的含义
Km值等于酶反应速度为最大速度一半时的底物浓度。
Km是酶的特征性常数,一般只与酶的性质有关,而与酶浓度无关。
相同的酶在同样实验条件下有相同的Km值。
Km值受温度、pH的影响。
Km作为常数只是对一定的底物、一定的pH、一定的温度条件而言。
测定酶的Km值可以作为鉴别酶的一种手段,但须在指定的实验条件下进行
(2)如果一个酶有几种底物,则对每一种底物,各有一个特定的Km值。
其中Km值最小的底物称为该酶的最适底物或天然底物。
3)Km值的大小可以近似反映酶与底物的亲和力。
Km值越小表明酶对底物的亲和力越大,Km值越大表明酶对底物的亲和力越小。
天然底物与酶的亲和力最大,故Km值最小。
竞争性抑制:
抑制剂I与底物S竞争酶活性中心,从而阻止底物与酶的结合,竞争性抑制剂具有与底物相类似的结构。
S与I和酶的结合均可逆,存在平衡。
非竞争性抑制:
非竞争性抑制剂与酶分子活性中心以外的部位结合,与底物不存在竞争关系。
酶可以同时结合底物和抑制剂。
反竞争性抑制
反竞争性抑制剂单独无法与酶结合,酶只有在与底物结合后才能与抑制剂结合。
别构效应:
调节物(或效应物)与酶分子上的别构中心结合后,诱导出或稳定住酶分子的某种构象,使酶活性中心对底物的结合和催化作用受到影响,从而调节酶反应速度及代谢过程,此效应即为酶的别构效应
别构酶:
别构酶也称变构酶,它是代谢过程中的关键酶。
通过效应物(调节物)和酶的别构中心的结合来调节其活性,从而调节酶反应速度和代谢过程。
同促效应(同种协同效应):
它的调节物分子就是底物分子,这种酶分子上有两个以上的底物结合中心,其调节作用取决于酶是有多少个底物结合中心被占据。
异促效应:
这种别构酶除了与底物分子作用外,还可与其他的调节物分子结合,它的调节物分子不是底物分子。
pH对酶促反应速度的影响
大部分酶的活性受环境pH的影响,在一定pH下酶促反应有最大速度,高或低于此pH酶反应速度均下降。
pH影响酶促反应速度的原因:
[1]过酸过碱会影响酶分子的构象,破坏其稳定性,使酶失活。
[2]当pH改变不剧烈时,酶虽然不会变性,但底物分子或酶活性中心基团的解离状态会发生变化,而在它们诸多解离状态中往往只有一种状态会适于发生反应。
[3]pH的改变会影响到酶分子中另一些基团的解离,从而会影响酶的专一性或活性中心的构象。
温度对酶促反应的影响
温度对酶促反应速度的影响有两方面:
[1]同一般的化学反应一样,温度升高,底物分子内能增加,进入活化态的分子数增多,速度加快。
[2]随温度的升高,酶蛋白逐渐变性失活,速度降低。
在这两种因素的共同影响下,v与温度间表现出钟形曲线。
转录(transcription)
定义:
以DNA为模板,以核苷三磷酸为底物,在RNA聚合酶(转录酶)的作用下,生成RNA分子的过程。
过程:
1.起始2.延长3.终止
翻译(translation)
定义:
以mRNA为模板,以氨基酸为底物,在核糖体上通过各种tRNA、酶和辅助因子的作用,合成多肽链的过程。
过程
1.氨基酸的活化2.肽链合成的起始3.肽链的延伸4.肽链合成的终止与释放
要素
1.模板:
mRNA2.氨基酸载体tRNA3.生物核糖体
4.起始因子IF5.延长因子EF6.释放因子RF
7.氨酰tRNA合成酶8.供能物质和无机离子
酶生物合成的调节
定义:
通过调节酶合成的量来控制微生物代谢速度的调节机制,是在基因转录水平上进行的。
意义:
通过阻止酶的过量合成,节约生物合成的原料和能量。
操纵子
基因表达的协同单位包括
结构:
【分解代谢物阻遏】
【指细胞内同时有两种分解底物(碳源或氮源)存在时,利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。
分解代谢物的阻遏作用,并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的结果,而是通过甲碳源(或氮源等)在其分解过程中所产生的中间代谢物所引起的阻遏作用。
】
产物的诱导和阻遏
分解代谢物阻遏
别构调节
小分子化合物与酶分子活性中心以外的某一部位特异结合,引起酶蛋白分子构象变化,从而改变酶的活性,这种调节称为酶的变构调节或别构调节。
构象变化效应
当酶与底物靠近时,不仅酶构象受底物作用而变化,底物分子也常常受酶作用而变化,也就是酶使底物分子中的敏感键发生“变形”,从而促使底物中的敏感键更易于破裂。
因而更容易形成一个互相契合的酶—底的复合物而提高催化效率。
别构效应:
调节物(或效应物)与酶分子上的别构中心结合后,诱导出或稳定住酶分子的某种构象,使酶活性中心对底物的结合和催化作用受到影响,从而调节酶反应速度及代谢过程,此效应即为酶的别构效应
变构调节
小分子化合物与酶分子活性中心以外的某一部位特异结合,引起酶蛋白分子构象变化,从而改变酶的活性,这种调节称为酶的变构调节或别构调节。
反馈调节方式
无分支途径中酶活的反馈抑制同工酶的反馈抑制顺序反馈抑制
协调反馈抑制积累反馈抑制
酶分子修饰
定义:
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变,从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰(enzymemolecularmodification)。
解决什么问题
酶分子的完整空间结构赋予酶的催化功能,其高效性和专一性与作用条件温和的特点。
实际应用中有局限性:
作为异体蛋白在体内难于吸收、易引起免疫反应和被识别降解;酶蛋白经不起温度、酸碱、有机溶剂及时间的考验,半衰期短、易变性失活;酶的活性、作用专一性和最适条件不一定能适应生产工艺要求,限制了酶的应用范围。
目的
①提高生物活性activity;
②增强在不良环境中的稳定性stability;
③针对特异性反应降低生物识别能力,解除免疫原性immunologicalproperty;
④产生新的催化能力;
⑤体内半衰期及抗原性变化显著
酶分子的修饰方法
金属离子置换修饰
大分子结合修饰(共价/非共价)
侧链基团修饰
肽链有限水解修饰
核苷酸链有限水解修饰
氨基酸置换修饰
核苷酸置换修饰
酶分子的物理修饰
定点突变,定向进化区别
定点突变:
理性设计
是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。
定向进化:
随机突变
是模拟自然进化过程(随机突变和自然选择),在体外进行酶基因的人工随机突变,建立突变基因文库,在人工控制条件的特殊环境下,定向选择得到具有优良催化特性的酶的突变体的技术过程
易错PCR(error-pronePCR)
通过改变PCR反应条件,使扩增的基因出现少量碱基错配,从而导致目的基因的随机突变。
一种相对简单、快速廉价的随机突变方法。
关键是控制DNA的突变频率。
随机引物体外重组法(random-priminginvitrorecombination,RPR)
1.若干条随机序列的引物进行PCR
2.产生若干个与模板不同部分的序列互补的DNA小片段
3.除去模板,小片段互为引物进行扩增,通过碱基重排
包容性强
通过分析比较细胞生长与酶产生的关系,可以把酶生物合成的模式分为4种类型。
即同步合成型,延续合成型,中期合成型和滞后合成型
对于同步合成型的酶,要尽量提高其对应的mRNA的稳定性,措施:
适当降低发酵温度;
对于滞后合成型的酶,尽量减少甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用,使酶的生物合成提早开始,措施:
降低培养基中阻遏物的浓度,
对于中期合成型的酶,则要在提高mRNA的稳定性以及解除阻遏两方面考虑,使其生物合成的开始时间提前,并尽量延迟其生物合成停止的时间。
培养基的设计原则---菌种性质
实例考察:
从阻遏物,ph等考虑
发酵条件及控制
pH值的控制
细菌与放线菌:
pH7-7.5
酵母菌和霉菌:
pH4.5-6范围内生长
细胞发酵产酶的最适pH值与生长最适pH值往往有所不同。
细胞生产某种酶的最适pH值通常接近于该酶催化反应的最适pH值。
有些细胞可以同时产生若干种酶,在生产过程中,通过控制培养基的pH值,往往可以改变各种酶之间的产量比例。
温度的控制
枯草杆菌的最适生长温度为34~37℃
黑曲霉的最适生长温度为28~32℃
有些细胞发酵产酶的最适温度与细胞生长最适温度有所不同,而且往往低于生长最适温度。
在较低的温度条件下,可以提高酶所对应的mRNA的稳定性,增加酶生物合成的延续时间,从而提高酶的产量。
溶解氧的控制
培养液中溶解氧的量,决定于在一定条件下氧气的溶解速度(溶氧速率)。
具体考察一种酶分离纯化方法
盐析与盐溶(了解)
盐溶
大多数蛋白类酶都溶于水,而且在低浓度的盐存在的条件下,酶的溶解度随盐浓度的升高而增加,这称为盐溶现象。
原理:
蛋白质分子在等电点时,容易互相吸引,聚合成沉淀,加入少量离子破坏静电吸引,使分子散开,溶入水中(稀盐的浓度控制在0.02-0.05mol/L)
盐析
利用不同蛋白质在不同的盐浓度下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加一定浓度的中性盐,使酶或杂质从溶液中析出沉淀。
在盐浓度达到某一界限后,酶的溶解度随盐浓度升高而降低,这称盐析现象
原理:
1.大量盐加入后,能与蛋白质争夺水分子,去除水膜;
2.大量盐能中和蛋白质分子表面电荷,使蛋白质沉淀。
3.盐析效果:
二价离子>一价离子;离子半径小>离子半径大
离子交换层析
离子交换层析(ionexchangechromatography,IEX)技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相,以蛋白质等样品为移动相,分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。
原理
利用蛋白质的电荷和层析载体的电荷间的相互作用(离子键)(离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不同),而达到分离目的的一种层析分离方法
阳离子交换剂:
平衡离子带正电的离子交换剂,能与带正电的离子基团发生交换作用
阴离子交换剂:
平衡离子带负电的离子交换剂,与带负电的离子基团发生交换作用
凝胶层析
又称为凝胶过滤层析,分子排阻层析,分子筛层析
是指以各种多孔凝胶为固定相,利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。
原理
凝胶层析柱中装有多孔凝胶,当含有各种组分的混合溶液流经凝胶层析柱时,各组分在层析柱内同时进行两种不同的运动。
一种是随着溶液流动而进行的垂直向下的移动,另一种是无定向的分子扩散运动(布朗运动)
大分子物质不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来;小分子物质可自由出入凝胶孔,流程长而后流出层析柱。
亲和层析
利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力,而使生物分子分离纯化的技术。
原理
酶与底物,酶与竞争性抑制剂,酶与辅助因子,抗原与抗体,酶RNA与互补的RNA分子或片段,RNA与互补的DNA分子或片段等之间,都是具有专一而又可逆亲和力的生物分子对。
故此,亲和层析在酶的分离纯化中有重要应用
酶的固定化方法
吸附法、包埋法、结合法、交联法和热处理法等。
吸附法(adsorption)依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用,使酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上
包埋法:
将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中,使酶固定化的方法称为包埋法
网格型:
将酶包埋在高分子凝胶细微网格中。
微囊型:
将酶包埋在高分子半透膜中。
结合法
选择适宜的载体,使之通过共价键或离子键与酶结合在一起的固定化方法称为结合法。
根据酶与载体结合的化学键不同,结合法可分为离子键结合法和共价键结合法。
交联法与共价偶联法
交联法借助双功能试剂使酶分子之间发生交联的固定化方法。
双功能试剂.常用的是戊二醛:
戊二醛有两个醛基,均可与酶或蛋白质的游离氨基反应,使酶蛋白交联。
共价偶联法:
借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联。
固定化与固定化酶比较
固定化细胞的显著优点
1.可以大大降低成本,省去酶的分离纯化工作,减少酶的活性损失,这一点对于细胞内的酶来说特别有意义;
2.作为可单一的酶发挥作用,也可利用它所包含的复合酶系完成一部分代谢乃至整个发酵过程,特别是那些需要辅酶因子参加的合成代谢过程;
3.固定化细胞直接将细胞当作一个酶袋作为生物催化剂参与催化反应。
更重要的是,固定化细胞保持了胞内酶系的原始状态与天然环境,因而更稳定。
4.用固定化增殖细胞进行发酵,可以不需要微生物菌体的多次培养、扩大,缩短发酵生产周期,提高生产能力,可以较长时间反复使用或连续使用,有希望将发酵罐改变为反应柱进行连续生产。
固定化酶优点
1.产量最优化
2.低保留时间(高体积活性)
3.酶的重复利用
有机介质中水对酶催化反应的影响
酶催化反应中水是不可缺少的成分
空间构象的影响
在无水的条件下,酶的空间构象被破坏;酶分子需要有一层水化层,以维持起完整的空间构象
反应速度的影响
有机介质中水的含量对酶催化反应速度有显著影响。
在催化反应速度达到最大时的水含量称为最适水含量。
在实际应用时应当根据实际情况,通过实验确定最适水含量。
水活度
水活度Aw描述有机溶剂中酶活性与水含量的关系。
体系中水的逸度与纯水逸度之比,用体系中水的蒸汽压与相同条件下纯水的蒸汽压之比:
AW=P/P0
非水相化控制条件---有机溶剂影响
极性过强(lgP﹤2)的溶剂,会夺取较多的酶分子表面结合水,影响酶分子结构,并使疏水性底物的溶解度降低,从而降低酶反应速度,
极性过弱(lgP≥5)的溶剂,虽然对酶分子必需水的夺取较少,疏水性底物在有机溶剂中的溶解度也较高,但是底物难于进入酶分子的必需水层,催化反应速度也不高。
通常选用2≤lgP≤5的溶剂作为催化反应介质。
在与水混溶的有机介质中,水与有机溶剂混合在一起,组成均一的单相体系,有机溶剂的含量对酶的催化作用也有显著影响。
例如,在与水混溶的二氧六环介质中,辣根过氧化物酶(HRP)催化对苯基苯酚的聚合反应,随着二氧六环的含量增加,聚合得到的聚合物分子质量逐渐增大,在二氧六环的含量为85%时,聚合物的相对分子质量达到25000,而二氧六环的含量为60%时,获得的聚合物分子量仅为3000左右。
第八章酶的生产方法
1、影响酶生物合成模式的主要因素?
酶所对应的mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在是影响酶生物合成模式的主要因素。
mRNA稳定性好的,可以在细胞生长进入平衡期以后,继续合成其所对应的酶;mRNA稳定性差的,就随着细胞生长进入平衡期而停止酶的生物合成;
2、最理想的合成模式应?
在酶的发酵生产中,为了提高产酶率和缩短发酵周期,最理想的合成模式应是延续合成型。
属于延续合成型的酶,在发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。
细胞一开始生长就有酶产生,直至细胞生长进入平衡期以后,酶还可以继续合成一段较长的时间。
3、如何使酶的生物合成接近理想模式?
对于其他合成模式的酶,可以通过基因工程\细胞工程等先进技术,选育得到优良的菌株,并通过工艺条件的优化控制,使他们的生物合成模式更加接近于延续合成型。
对于同步合成型的酶,要尽量提高其对应的mRNA的稳定性,为此适当降低发酵温度是可取的措施;
对于滞后合成型的酶,要设法降低培养基中阻遏物的浓度,尽量减少甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用,使酶的生物合成提早开始;
对于中期合成型的酶,则要在提高mRNA的稳定性以及解除阻遏两方面考虑,使其生物合成的开始时间提前,并尽量延迟其生物合成停止的时间。
4、提高酶产量的措施
添加诱导物、控制阻遏物的浓度、添加表面活性剂、添加产酶促进剂
5、控制阻遏物的浓度方法
产物阻遏作用是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。
分解代谢物阻遏作用是由分解代谢物(葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的物质)引起的阻遏作用。
主要方法措施:
1.采用其他较难利用的碳源,如淀粉等
2.采用补料、分次流加碳源
3.添加一定量的环腺苷酸(cAMP)
4.控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。
第九章酶的分离提取纯化
1、酶的主要提取方法
提取方法
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