高中少年生物选修1 总结.docx
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高中少年生物选修1总结
课题1 果酒和果醋的制作
1.果酒的制作原理
(1)菌种是酵母菌,其代谢类型为兼性厌氧型。
(2)反应式:
①有氧条件下:
C6H12O6+6O2―→6CO2+6H2O。
②无氧条件下:
C6H12O6―→2C2H5OH+2CO2。
(3)菌种来源:
自然发酵过程中,来源于附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。
(4)条件:
①氧气:
酵母菌先在有氧条件下进行有氧呼吸大量繁殖,然后在无氧条件下进行酒精发酵产生酒精。
②温度:
最适繁殖温度为20_℃左右,发酵温度一般控制在18~25_℃。
(5)葡萄酒呈现深红色的原因:
在酒精发酵过程中,随着酒精度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
2.果醋的制作原理
(1)菌种是醋酸菌,其代谢类型为需氧型。
(2)原理:
①当氧气充足、糖源充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。
②当氧气充足、缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。
反应简式为:
C2H5OH+O2―→CH3COOH+H2O。
(3)发酵所需条件:
①环境条件:
氧气充足。
②温度:
最适生长温度30~35_℃。
探讨
:
利用酵母菌进行酒精发酵过程中为什么要“先通气后密封”?
提示:
“通气”的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖,“密封”的目的是使酵母菌进行酒精发酵产生酒精。
探讨
:
果酒制作过程中,在不灭菌的情况下,酵母菌是如何成为优势菌种的?
提示:
发酵后期在缺氧和酸性发酵液中,绝大多数微生物的生命活动受到抑制,而酵母菌可以适应这一环境成为优势菌种。
探讨
:
在制葡萄醋时,为什么要适时通过充气口充气?
提示:
醋酸菌是好氧细菌,在将糖或酒精变为醋酸时需要氧的参与,因此要适时向发酵液中充气
果酒制作与果醋制作的比较
果酒制作
果醋制作
发酵菌种
酵母菌
醋酸菌
菌种来源
传统的葡萄酒酿造采用自然发酵,菌种主要是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
购买醋酸菌的菌种或从食醋中分离醋酸菌
发酵产物
酒精、二氧化碳
醋酸、水
发酵条件
温度
一般控制在18~25℃
30~35℃
时间
10~12d
7~8d
氧气
初期需氧,后期不需氧
始终需要氧
pH
最适pH为4.5~5.0
最适pH为5.4~6.0
反应式
①在有氧条件下:
C6H12O6+6O2―→6CO2+6H2O
②在无氧条件下:
C6H12O6―→
2C2H5OH+2CO2
①氧气、糖源都充足时:
C6H12O6+2O2
―→2CH3COOH+2CO2+2H2O
②缺少糖源时:
2C2H5OH+O2―→2CH3CHO(乙醛)+2H2O
2CH3CHO+O2―→2CH3COOH(醋酸)
果酒和果醋的制作流程
1.实验流程
挑选葡萄―→冲洗―→榨汁―→酒精发酵―→醋酸发酵
2.实验操作提示
(1)材料的选择与处理:
选择新鲜的葡萄,榨汁前先将葡萄进行冲洗,除去枝梗。
(2)消毒防污染:
①榨汁机要洗干净,并晾干。
②发酵瓶要清洗干净,并用体积分数为70%的酒精消毒。
(3)榨汁:
将冲洗干净并除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。
(4)装瓶:
将葡萄汁装入发酵瓶,要留大约1/3的空间,并封闭充气口。
(5)发酵条件控制:
①制葡萄酒的过程中,将温度严格控制在18~25℃,时间控制在10~12d左右,可通过出料口对发酵的情况进行及时监测。
②制葡萄醋的过程中,将温度严格控制在30~35℃,时间控制在7~8d左右,并注意适时通过充气口充气。
3.产物检测
(1)果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
也可通过闻气味来判定。
(2)证明葡萄醋中有醋酸生成,简单易行的方法是通过闻气味、品尝或用pH试纸鉴定。
探讨
:
啤酒生产中,发酵是重要环节,发酵后期,如果密封不严,会使啤酒变酸,你知道这是发生了什么变化吗?
提示:
醋酸菌是一种好氧菌,若发酵罐密封不严,酒精就会在醋酸菌的作用下被氧化产生乙醛,最后变为醋酸。
探讨
:
在果酒和果醋制作中,你认为哪些方法可防止发酵液被污染?
提示:
(1)冲洗葡萄时应先冲洗再除去枝梗。
(2)榨汁机要冲洗干净并晾干。
(3)发酵瓶要清洗干净,并用70%的酒精消毒。
(4)排气时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖,防止杂菌污染。
3.具体操作
制果酒
制果醋
制作
流程
选材
及处理
选择新鲜的葡萄,先用清水冲洗1~2遍除去污物后,再去枝梗
发酵
制作发酵液,防止杂菌污染
发酵:
将葡萄汁注入发酵瓶,注意量不要超过塑料瓶总体积的2/3
条件控制
将温度严格控制在18~25℃,时间控制在10~12d左右。
发酵旺盛期的CO2产量非常大,要及时排气,防止发酵瓶爆裂
将温度严格控制在30~35℃,时间控制在7~8d左右,并注意适时通过充气口充气
产物检测
检测指标:
7~10d以后,可以开始进行取样检验。
例如,可以嗅味和品尝、用重铬酸钾检验酒精含量、进行酵母菌的镜检、测定pH等
检测指标:
果醋的制作是否成功可以通过观察菌膜的形成、嗅味和品尝初步鉴定,再通过检测和比较醋酸发酵前后的pH进一步鉴定。
还可以在显微镜下观察发酵液中是否有醋酸菌,并统计其数量作进一步鉴定
课题2 腐乳的制作
1.发酵微生物
有多种微生物参与,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。
毛霉
2.发酵原理
(1)蛋白质
小分子的肽和氨基酸
(2)脂肪
甘油和脂肪酸
3.腐乳的制作流程
加盐腌制
密封腌制:
用胶条将瓶口密封
探讨
:
吃腐乳时,你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。
这层“皮”是怎样形成的呢?
它的作用是什么?
它对人们有害吗?
提示:
“皮”是前期发酵时在豆腐表面生长的菌丝(匍匐菌丝),它能形成腐乳的“体”,使腐乳成形。
“皮”对人体无害。
探讨
:
为什么臭豆腐“闻着臭,吃着香”?
提示:
豆腐经多种微生物的协同作用,蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸,脂肪被分解成甘油和脂肪酸,并形成具有芳香气味的物质;细菌进行发酵产生具有浓烈臭味的含硫化合物等。
所以臭豆腐“闻着臭、吃着香”。
探讨
:
在腐乳制作过程中,避免杂菌污染的措施有哪些?
提示:
(1)用具灭菌处理。
(2)腌制过程密封等可以防止杂菌污染。
(3)加盐可以抑制杂菌的生长繁殖。
(4)卤汤中的酒和香辛料也能抑制杂菌的生长繁殖。
1.腐乳制作的具体操作步骤及注意事项
选材:
所用豆腐的含水量为70%左右最适宜,水分过多腐乳不易成形,
过少则不利于毛霉的生长
切块:
将所选择的豆腐切成3cm×3cm×1cm的小块,若切得过小不易
成形,过大则中间部分很难形成腐乳
接种:
将切好的豆腐块等距离排放,周围留有一定空隙,并将温度控制
在15℃~18℃左右。
该温度下毛霉生长迅速,青霉、曲霉等其他
微生物生长较缓慢
腌制:
大约5d后豆腐表面布满菌丝,将豆腐块间连在一起的菌丝拉断,
并分层整齐排放在容器中且逐层加盐,为防止杂菌从瓶口进入,
在接近瓶口表面盐要铺厚一些。
长满毛霉的豆腐块与盐的质量
分数比控制在5∶1左右
加卤汤装瓶:
在配制卤汤时,可根据口味不同而配以各种不同的香辛
料。
装瓶时动作一定要快,且装瓶前后最好将瓶口均用
酒精灯加热灭菌,然后密封。
在常温条件下,一般6个
月即可食用
2.用盐腌制的目的
(1)调味:
适宜的食盐能给腐乳以必要的口味。
(2)防腐:
防止杂菌污染,避免豆腐腐败。
(3)能够浸提毛霉菌丝上的蛋白酶,使毛霉不能生长,而其产生的蛋白酶却仍不断发挥作用。
(4)降低豆腐的含水量,使豆腐块保持良好的形态,不易松散坍塌。
1.控制好材料的用量
(1)盐用量
(2)酒的含量
2.防止杂菌污染
(1)所用玻璃瓶洗刷干净后要用沸水消毒。
(2)装瓶时要迅速小心;封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,以防止瓶口被污染
探讨
:
影响腐乳风味的因素有哪些?
提示:
豆腐的含水量、发酵条件及装罐时加入的辅料等都会影响腐乳的风味。
探讨
:
市售腐乳有时口感不好,豆腐较硬,你认为是什么原因造成的?
提示:
(1)豆腐块的含水量不当。
(2)发酵时间短,蛋白质未完全水解,在加盐后豆腐脱水,蛋白质变性,于是变硬。
(3)菌种不纯、菌种变异、菌种老化都会影响产品口感。
(4)调味品量不足等。
探讨
:
腐乳制作过程中盐的作用是什么?
提示:
(1)调味——只有一定的咸度才能刺激人的味觉,蛋白质水解所产生的各种氨基酸才表现出鲜味;
(2)防腐——防止杂菌的污染;(3)析水——可以析出豆腐中的水分,使豆腐块变硬;(4)抑制蛋白酶继续起作用——稳定其鲜味和香味。
1.制作过程中影响腐乳品质的因素
(1)菌种:
菌种是生产发酵的关键。
如果菌种退化则表现出生化功能的变化,如水解速率、代谢产物等都会发生变化,从而影响品质,因而要选择优良的菌种。
(2)杂菌:
如有杂菌污染则直接影响产品的色、香、味。
因而要关注培养湿度的控制,盐、酒、香辛料的用量,以及用具的消毒和密封等方面。
(3)水的含量:
含水量70%,用含水量过高的豆腐制腐乳,不易成形。
含水量过少则不利于毛霉的生长。
(4)盐的用量:
盐浓度过高,会影响腐乳的口味,浓度过低,腐乳易腐败变质。
(5)酒的用量:
卤汤中酒的含量一般控制在12%左右。
酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。
①酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,腐乳成熟的时间将延长。
②酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易腐败,难以成块。
(6)香辛料:
具有调味和杀菌的作用,会影响腐乳的风味或质量。
(7)温度:
严格控制在15~18℃。
温度过高或过低会影响毛霉菌丝的生长,从而影响发酵的进程和发酵质量。
如温度过低,则菌丝生长缓慢,不能进入豆腐块的深层;温度过高,菌丝易老化和死亡,影响品质。
(8)发酵时间:
时间过短,发酵不充分,如蛋白质未完全水解,这样在加盐后豆腐脱水,蛋白质变性,就会变硬;时间过长,豆腐会软化不易成形,从而影响腐乳的口味。
2.结果分析与评价
(1)是否完成腐乳的制作的依据:
能够合理地选择实验材料与用具;前期发酵后,豆腐的表面长有菌丝,后期发酵制作基本没有杂菌的污染。
(2)腐乳质量的评价:
制作成功的腐乳应色泽基本一致、味道鲜美、咸淡适口、无异味、块形整齐、质地细腻、无杂质。
(3)总结不同因素对腐乳风味和质量的影响:
可从盐、酒的用量、发酵的温度、发酵时间的长短,以及香辛料等因素中的某一因素分析,说明其对腐乳风味或质量的影响。
课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量
1.泡菜制作所用菌种及原理
(1)菌种:
乳酸菌。
(2)发酵原理:
在无氧条件下,乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸。
2.泡菜制作的流程
原料加工:
选取新鲜的蔬菜,进行修整、洗涤、晾晒,切分成条状或片状
配制盐水:
按清水与盐的质量比为4∶1的比例配制好后煮沸冷却备用
装坛:
将蔬菜装至半坛时,放入调味品,继续装至八成满,再徐徐注入
配制好的盐水,使盐水没过全部菜料
封坛发酵:
盖好坛盖,在坛盖边沿的水槽中注满水发酵时间长短受室
内温度的影响成品
3.腌制的条件及关键
(1)条件:
在腌制过程中,要控制腌制的时间、温度和食盐的用量。
温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短,容易造成细菌大量繁殖,亚硝酸盐含量增加。
(2)关键:
泡菜制作的核心步骤是乳酸菌发酵,选择容器、制备盐水、搭配调料是泡菜制作的关键步骤。
探讨
:
为什么含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶?
提示:
酸奶的制作依靠的是乳酸菌的发酵作用,抗生素能够杀死乳酸菌或抑制其生长。
探讨
:
酸牛奶是经过加工变质的牛奶,与鲜牛奶相比二者谁的营养价值高?
为什么?
提示:
酸牛奶。
因为牛奶经发酵后把大分子物质转变成小分子物质,易被人体吸收。
探讨
:
在泡菜制作的发酵过程中,为什么要经常向泡菜坛的水槽中补充水?
提示:
为了保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。
1.泡菜发酵过程
泡菜在发酵期间,由于乳酸菌的发酵作用,发酵产物乳酸不断积累,因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量,将泡菜发酵过程分为三个阶段。
(1)发酵初期①参与的微生物种类:
主要以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌较为活跃。
②发酵过程:
该阶段主要大量消耗O2,并产生较多的CO2,使坛内逐渐形成无氧状态。
③发酵特点:
此时泡菜液的含酸量约为0.3%~0.4%,是泡菜初熟阶段,其菜质咸而不酸、有生味。
(2)发酵中期①发酵的主要微生物种类:
乳酸菌。
②原因:
由于初期乳酸发酵使乳酸不断积累,pH下降,无氧状态形成。
③发酵特点:
这时乳酸的积累量可达到0.6%~0.8%,pH为3.5~3.8。
大肠杆菌、腐败菌、酵母菌、霉菌的活动受到抑制。
这一期间为泡菜完全成熟阶段,泡菜有清香味。
(3)发酵后期①发酵的主要微生物:
仍然是乳酸菌。
②发酵特点:
在此期间乳酸含量继续增加,可达1.0%以上。
当乳酸含量达到1.2%以上时,乳酸菌的活性受到抑制,发酵速度逐渐变缓甚至停止。
此阶段泡菜酸度过高,风味不协调。
2.泡菜制作的注意事项
(1)泡菜坛的选择:
应选择火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的泡菜坛。
(2)盐水按水盐质量比4∶1配制,煮沸冷却后待用。
煮沸有两大作用,一是除去水中氧气,二是杀灭盐水中的细菌。
(3)材料装至八成满时,再加入盐水至没过全部菜料,盖好坛盖。
(4)封坛时,坛盖边沿的水槽中要注满水,控制严格密封,以保证乳酸菌发酵所需的无氧环境,并注意在发酵过程中经常补水。
2.亚硝酸盐含量的测定
(1)原理:
在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料,可通过目测比较,大致估算其含量。
(2)方法:
比色法。
通过将待测溶液和试剂反应后的样品与标准显色液作比较,得出待测溶液的亚硝酸盐含量。
(3)测定操作:
配制溶液―→制备标准显色液―→制备样品处理液―→比色。
探讨
:
为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜,不宜多吃腌制蔬菜?
提示:
腌制蔬菜中亚硝酸盐含量较高,亚硝酸盐在一定条件下可以转化为亚硝胺,亚硝胺对人体有害。
探讨
:
亚硝酸盐可转化成致癌物质,为什么在食品生产中还可用作添加剂?
提示:
亚硝酸盐在许可范围内不会对身体健康造成危害,而且亚硝酸盐只有在特定条件下才会转化成致癌物质。
1.亚硝酸盐含量测定
(1)亚硝酸盐含量测定流程图:
→
→
→
(2)制备样品处理液流程图:
→
→
→
↓
←
←
←过滤←
(3)计算亚硝酸盐含量:
亚硝酸盐含量=
2.测定实验中所用各种试剂、药品及作用
序号
试剂、药品
作用
1
对氨基苯磺酸
与亚硝酸盐发生重氮化反应
2
盐酸
调节pH成酸性
3
N-1-萘基
乙二胺盐酸盐
与重氮化反应的产物结合,生成玫瑰红色染料,作为测定亚硝酸盐含量的指示剂
4
硅胶
干燥剂,用于干燥亚硝酸钠
5
干燥后的亚硝酸钠
制备相应浓度的标准显色液
6
氯化镉、
氯化钡
溶于蒸馏水并用浓盐酸酸化后作为亚硝酸盐的提取剂
7
氢氧化钠
中和过多的盐酸,营造碱性环境
8
氢氧化铝
作为吸附剂,使泡菜滤液脱色,变澄清
9
蒸馏水
作为溶剂
课题1 微生物的实验室培养
1.培养基
(1)概念:
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。
(2)种类:
按物理性质分
(3)营养组成:
各种培养基一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等)以及氧气的要求。
2.无菌技术
(1)无菌技术的目的是防止外来杂菌的入侵。
主要内容包括:
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
(2)消毒和灭菌:
消毒
灭菌
概念
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)
使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)
常用
方法
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用
对象
操作空间、操作者双手等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等
探讨
:
虽然各种培养基的具体配方不同,但是一般都含有哪些成分?
提示:
虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子。
另外,还必须满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
探讨
:
对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么?
提示:
分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。
探讨
:
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?
提示:
无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。
1.培养基的成分及功能
营养
物质
作用
功能
主要来源
碳源
能为微生物代谢提供碳元素
构成生物体的细胞物质和一些代谢产物,有些是异养生物的能源物质
无机碳源:
CO2、NaHCO3等;有机碳源:
糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等
氮源
能为微生物的代谢提供氮元素
合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物
无机化合物:
N2、NH3、铵盐、硝酸盐等;有机氮源:
尿素、牛肉膏、蛋白胨等
生长
因子
是生长必不可少的
酶和核酸的组成成分
维生素、氨基酸、碱基等
水
是生命活动所必需的
不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定
外界摄入
无机盐
为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素,包括大量元素
细胞内的组成成分,生理调节物质,某些化能自养菌的能源,酶的激活剂
无机化合物
2.培养基的配制原则
(1)目的要明确:
不同的微生物需求不同,根据培养目的进行配制。
(2)营养要协调:
营养物质的浓度和比例要适宜。
(3)pH要适宜:
为维持pH的相对恒定,可在培养基中加入缓冲剂,常用磷酸氢二钾-磷酸二氢钾。
3.几种常用灭菌和消毒方法的比较
灭菌和
消毒种类
主要方法
应用范围
巴氏
消毒法
70~75℃煮30min或80℃煮15min
牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体
灼烧灭菌
酒精灯火焰灼烧
微生物接种工具;如接种环、接种针或其他金属用具等,接种过程中的试管口或瓶口等
干热灭菌
干热灭菌箱160~170℃加热1~2h
玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品
高压蒸
汽灭菌
100kPa、121℃维持15~30min
培养基及多种器材、物品
煮沸
消毒法
100℃煮沸
5~6min
家庭餐具等生活用品的消毒
紫外线
消毒
30W紫外灯照射30min
接种室空气
化学药
物消毒
用体积分数为70%~75%的乙醇、碘酒涂抹,来苏尔喷洒等
用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等的消毒
1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
(1)
(2)培养基应采用高压蒸汽灭菌;倒平板时要待培养基冷却至50_℃左右时,在酒精灯火焰附近进行,等平板冷凝后将平板倒置。
2.纯化大肠杆菌
(1)纯化培养的原理:
想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落,即获得较纯的菌种。
(2)纯化培养方法:
在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌,最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
①平板划线法:
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②释释涂布平板法:
将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。
(3)培养:
将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中,培养12h和24h后,分别记录观察。
(4)菌种保存:
临时保藏法
甘油管藏法
适用对象
频繁使用的菌种
长期保存的菌种
培养基类型
固体斜面培养基
液体培养基
温度
4℃
-20℃
方法
菌落长成后放入冰箱中保存,以后每3~6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上
将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后放在冷冻箱内保存
缺点
菌种易被污染或产生变异
探讨
:
接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针,其目的分别是什么?
提示:
(1)划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。
(2)划线结束后灼烧,能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种,避免污染环境和感染操作者。
探讨
:
在倒平板时为何要在酒精灯的火焰旁进行?
提示:
酒精灯的火焰旁是无菌区域,在酒精灯的火焰旁操作,可以避免周围环境中微生物的污染。
探讨
:
接种结束后,为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养,未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。
如果有菌落生长,说明了什么?
提示:
培养未接种培养基的作用是对照,未接种的培养基在恒温箱中保温1~2d后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的。
若有菌落形成,说明培养基灭菌不彻底,或培养基被污染了,需要重新制备。
1.微生物培养中有关实验操作的注意事项
(1)倒平板操作:
①培养基要冷却到50℃左右时开始倒平板。
其原因是琼脂是一种多糖,在98℃以上熔化,在44℃以下凝固,倒平板时高于50℃则会烫手,低于50℃时若不能及时操作,琼脂会凝固。
②要使锥形瓶的瓶口通过火焰。
通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。
③倒平板时,要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,不要完全打开,以免杂菌污染培养基。
④平板冷凝后,要将平板倒置。
因为平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,培养基表面的温度也较高,平板倒置后,既可使培养基表面的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
⑤在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,那么这个平板不能用来培养微生物,因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
⑥整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行,避免杂菌污染。
(2)平板划线操作:
①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环。
②灼烧接种环之后,要等其冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。
③在做第二次以及其后的划线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
④划线时最后一区域不要与第一区域相连。
⑤划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破。
(3)稀释涂布平板操作:
稀释涂布平板法操作比较复杂,且各个细节均需保证无菌操作,应特别注意:
①稀释操作中的每支试管及其中9mL的水、移液管均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1~2cm处。
②酒精灯与培养皿的距离要合适。
③吸管头不要接触任何其他物体。
④吸管要在酒精灯火焰周围使用。
2.平板划线法和稀释涂布平板法的比较
优点
缺点
适用范围
平板
划线
分离法
可以观察菌落特征,对混合菌进行分离
不能计数
适用于好氧菌
稀释
涂布
平板法
可以计数,可以观察菌落特征
吸收量较少、较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延
适用于厌氧菌和兼性厌氧菌
土壤中分解尿素的细菌的
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