临床微生物学检验复习资料总结.docx
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临床微生物学检验复习资料总结
临床微生物学检验
显性感染(n):
如果宿主的抗感染免疫力较弱,或侵入的病原体数量较多,毒力较强,机体的组织细胞受到不同程度的损害并出现一系列的临床症状和体征。
细菌大小以微米为测量单位。
鞭毛是细菌的运动器官。
培养基按用途分类:
1.基础培养基。
2.营养培养基。
3.鉴别培养基。
4.选择培养基(n):
在培养基中加入某些特殊化学物质,抑制某些细菌的生长而有助于需要的细菌种类的生长,使需要菌从混杂的微生物群体中分离出来。
细菌的遗传物质包括染色体和质粒,其化学组成为DNA,DNA籍其构成特定基因来传递遗传信息。
质粒(n):
是染色体外的DNA,携带有编码某些遗传特性的基因,它能独立于染色体进行自我复制。
质粒的特性:
不相容性;可转移性;自主复制质粒;质粒可自然丢失或用人工方法消除。
(P67)
S-R变异(n):
新从患者体内分离的沙门菌通常为光滑型,经人工培养后菌落呈粗糙型。
丝状菌(或称霉菌n):
营养体呈多细胞类型的真菌是由菌丝和孢子交织组成。
细菌的科学命名:
属名在前,是名词,首字母大写;种名在后,是形容词,无论是人名还是地名均小写,两者均用斜体表示。
中文译名则种名在前属名在后。
氧化-发酵试验(O-F):
细菌在分解葡萄糖的过程中,必须以分子氧作为电子受体的称为氧化型;细菌在分解葡萄糖的过程中,可以进行无氧降解的称发酵型,此类细菌无论有氧或无氧均可以分解葡萄糖,通常为兼性厌氧菌;不分解葡萄糖的细菌称产碱型。
此试验用于细菌种属间的鉴别:
肠杆菌科细菌为发酵型,非发酵菌通常为氧化型或产碱型。
此外,微球菌属可氧化葡萄糖,而葡萄球菌属则能发酵葡萄糖。
迟缓分解乳糖(n):
只有β-半乳糖苷酶而缺乏半乳糖苷渗透酶(或是其活性很弱)的细菌,不能很快将乳糖运送到细菌细胞内,需要几天时间乳糖才能被分解。
氧化酶试验:
氧化酶或称细胞色素氧化酶,是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。
作氧化酶试验时,此酶首先使细胞色素C氧化,然后氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应。
本试验肠杆菌科阴性,弧菌科和非发酵菌阳性(个别菌种除外),奈瑟菌属阳性。
荚膜肿胀试验:
有夹膜的细菌如肺炎链球菌等,当与相应的抗血清反应时荚膜将明显增宽,在显微镜下可见在蓝色细菌周围有边界清晰的环状物,厚薄不等,而对照侧则无,则为荚膜肿胀试验阳性。
二倍体细胞培养广泛用于病毒分离和疫苗制备。
体外联合药物敏感试验的意义:
1.治疗混合性感染;2.预防或延迟细菌抗生素耐药性的发生;3.联合用药可以减少剂量以避免达到毒性剂量;4.联合用药比单一用药时常常效果更好。
联合抑菌试验的判断标准:
FIC指数<0.5为协同作用;0.5到1为相加作用;1到2为无关作用;>2为拮抗作用。
一般而言,斜面培养基的长度为试管长度的三分之二;MH平板的厚度应为4mm.
灭菌器上最好装上温度记录装置,或用生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌或变色的化学指示剂等监视灭菌效果。
医院感染(n):
又称医院获得性感染,指感染来自医院或医疗机构,包括在医院获得而出院后才发现的感染。
探视者在医疗机构中获得的感染,工作人员的职业性感染也属于医院感染。
入院48小时后发生的感染通常认为是医院感染。
医院感染病原体特点:
1.大多数为条件致病微生物。
2.多数病原菌对抗菌药物具有耐药性或多重耐药。
3.免疫功能低下患者可以感染多种病原体。
4.病原体以细菌为多见,真菌感染显著增多。
学培养的指征:
当患者发热(大于或等于38℃),或低体温(小于或等于36℃)时,或外周白细胞计数超过10*10^9/L(特别是存在核左移时),或绝对粒细胞减少(成熟中性粒细胞计数少于1*10^9/L)或合并有明显感染症状体征和伴有感染病灶存在时,就应该采血进行血液细菌培养。
怀疑有脓毒血症的患者应尽早血液细菌培养。
血液标本的采集:
1.采血时机(理想的血液细菌培养应该在患者接受抗生素治疗之前进行)2.采血部位(应行经皮外周静脉穿刺采血)3.采血份数(对每名患者应至少从不同部位采集血培养2到3份;对原因不明的发热,应先从不同部位采血2到3份,若培养24到48h后结果为阴性,再从不同部位采血至少2份进行培养;对怀疑亚急性心内膜炎的患者,应间隔1h,连续采集3份血进行培养。
要同时使用需氧和厌氧培养瓶,分别注入)。
4.采血量(通常采血量应是培养基的1/5或1/10。
成人10到15ml;儿童1到5ml)5.血培养瓶的使用(根据不同的血培养方法,采集到的血液标本应立即注入血培养瓶或还有聚茴香磺酸钠即SPS(脑膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌和厌氧消化链球菌不能用)的无菌容器中,并尽快进行培养。
)
用于常规细菌检测的脑脊液量应为1ml或大于1ml;用于检测抗酸菌的脑脊液量应为5ml或大于5ml.
封闭性脓肿:
局部消毒后,用注射器抽取脓液和脓肿壁标本置于厌氧运送培养基内送检。
放线菌感染标本:
用无菌棉拭子挤压瘘管,选取流出脓液中的“硫磺样颗粒”置于无菌试管内送检。
也可用无菌纱布带塞入瘘管,次日拔出送检。
皮肤和软组织感染的真菌学检查方法包括直接涂片显微镜检查(湿片镜检和染色镜检)和分离培养和鉴定。
急性上呼吸道感染约有70%到80%由病毒引起。
通过支气管镜用保护性导管支气管刷采取上呼吸道标本最适合进行细菌培养(包括需氧与厌氧培养)。
痰液标本一般细菌和真菌涂片检查目的一为:
确定标本是否适合做细菌培养,采用标本直接涂片镜检,依据低倍镜下(*100)白细胞和上皮细胞数目的多少来判定(低倍视野中鳞状上皮细胞<10个,或白细胞>25个),同时几乎见不到鳞状上皮细胞为符合要求.其二为初步判定是否有病原菌存在。
上呼吸道标本的分离培养一般使用常规接种血平板或巧克力平板或麦康凯平板。
消化道感染病及其临床特征(P234)
粪便标本中由于含有大量的正常菌群,再直接涂片上根据其染色性和形态无法区别病原菌,故一般不做直接涂片检查。
抗生素相关性腹泻的诊断(ADD):
有关病原菌主要有艰难梭菌,金黄色葡萄糖球菌,产气荚膜梭菌等。
取粪便直接涂片和革兰染色,油镜下观察各菌群的数量,可初步观察球菌与杆菌的比例并报告结果。
膀胱穿刺法:
常采用耻骨上膀胱穿刺抽取尿液法,该方法是目前判断膀胱内有无细菌感染的金标准。
集尿法在怀疑结核分枝杆菌时采用。
尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数>10^5CFU/ml提示可能为秘尿系统感染。
培养法是WHO推荐的淋病筛查的唯一方法,也是实验室诊断的金标准。
脑脊液VDRL有助于神经梅毒的诊断。
淋病奈瑟菌,衣原体,生殖道支原体,杜克嗜血杆菌的分离培养是淋病,生殖道沙眼衣原体感染,生殖道支原体感染,软下疳实验室诊断的金标准,阳性者可确诊.
葡萄球菌属的生物学特性:
需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适生长温度35℃,最适pH7.4,多数菌株耐盐性强。
葡萄球菌属的分离培养:
血标本应先增菌培养,脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物直接接种血平板,金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明(β)溶血环。
尿标本必要时做细菌菌落计数,粪便、呕吐物应接种高盐甘露醇平板,可形成淡黄色菌落。
CAMP试验:
无乳链球菌能产生CAMP因子,它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力,使其产生显著的协同溶血作用。
试验时先将金黄色葡萄球菌,沿直径划线接种,再沿该线垂直方向接种无乳链球菌,两线不得相接,间隔约3~4mm。
35℃孵育过夜,两种划线交界处出现箭头状溶血,即为阳性反应。
本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
肠球菌属:
PYR试验:
是一种快速筛选鉴定试验,用于鉴定能产生吡咯烷酮芳基酰胺酶的细菌、如肠球菌、化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。
盐耐受试验:
肠球菌能在含6.5%NaCL的心浸液肉汤中生长。
肠球菌的耐药分为天然耐药和获得性耐药,对一般剂量或中剂量氨基糖苷类药物和对万古霉素低度耐药常是先天性耐药,耐药基因存在于染色体上。
近年来获得性耐药菌株不断增多,表现为对氨基糖苷类高水平耐药和对万古霉素、肽可霉素高度耐药,临床实验室应对肠球菌进行耐盐监测试验。
肠杆菌科细菌的共同特征:
①革兰阴性杆菌,无芽孢,有菌毛,多数有周身鞭毛。
②需氧或兼性厌氧,营养要求不高,在普通培养基上生长良好,血平板生长为灰白、湿润、光滑的菌落,在肠道选择性培养基(MAC、EMB、SS等)上,因乳糖分解或不分解,生长为不同特征的菌落。
③生化反应活跃,发酵葡萄糖,氧化酶阴性,触酶阳性,能还原硝酸盐或亚硝酸盐。
④肠杆菌科抗原物构成主要有菌体抗原(O抗原)、鞭毛抗原(H抗原)、表面抗原和菌毛抗原等。
O抗原与H抗原为肠杆菌科血清学分群与分型的依据;表面抗原可阻断O抗原与相应抗体之间的反应,加热去除表面抗原能消除这种阻断作用。
菌毛抗原亦能阻断O抗原与相应抗体结合。
⑤肠杆菌科细菌抵抗力不强。
肠出血性大肠埃希菌(EHEC)又称Vero毒素大肠埃希菌(VTEC),主要引起出血性结肠炎(HC),其主要血清型为O157:
H7。
肥达反应:
即用已知伤寒、副伤寒沙门菌O、H抗原,检测受检血清中有无相应抗体及其效价的凝集试验,用来辅助诊断伤寒和副伤寒。
志贺菌属的微生物学检验:
①标本采集:
在抗生素使用前采集新鲜粪便中脓、血、黏液部分,床边接种或立即送检,不能及时接种者可用卡-布运送培养基送检,昏迷不能排便患者可用肛拭取样。
②直接显微镜检查:
标本图片染色镜检为革兰阴性杆菌。
可用胶乳凝集及荧光免疫技术直接检测志贺菌抗原。
③分离培养:
将标本接种于MAC/EMB、SS,35℃培养18~24h观察结果,如有无色半透明菌落生长,应作进一步检查。
也可用木糖-赖氨酸-去氧胆盐酸(XLD)分离,效果更好。
④鉴定:
血清学鉴定:
首先用志贺菌属4种多价血清做玻片凝集试验,如凝集,再进一步做血清学鉴定。
鼠疫耶尔森菌是烈性传染病鼠疫的病原菌。
鼠疫是自然疫源性疾病,是我国的甲类传染病。
非发酵革兰阴性杆菌是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。
铜绿假单胞菌的微生物学检验:
①标本采集:
按疾病和检查目的分别采取不同的临床标本,如痰、伤口分泌物、尿液、脓及穿刺液、血液、脑脊液、胸腹水、关节液等。
②直接显微镜检查:
脑脊液、胸腹水离心后去沉淀物涂片,脓汁、分泌物直接涂片革兰染色镜检。
为革兰阴性杆菌,菌体长短不一,有些菌体周围可见荚膜。
③分离培养:
血液和无菌体液标本可先增菌后再转种血平板和麦康凯平板,痰、脓液、分泌物、中段尿等可直接接种上述培养基。
④鉴定:
根据培养基的菌落特征、产生水溶性蓝绿色、红色或褐色色素、特殊的气味、氧化酶试验阳性、氧化发酵试验为氧化分解葡萄糖等即可做出初步鉴定。
但对色素产生不典型的铜绿假单胞菌还需要做其他生化反应(如明胶液化、精氨酸双水解试验、42℃生长试验等,乙酰胺酶检测试验也有一定价值)与其他假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌主要生化反应结果如下:
氧化酶阳性,在氧化发酵培养基上,能氧化利用葡萄糖、木糖产酸,不能发酵乳糖。
精氨酸双水解触酶阳性,乙酰胺酶多阳性,利用枸橼酸盐,还原硝酸盐并产生氮气。
吲哚试验阳性,赖氨酸脱羧酶阴性。
不动杆菌属为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、不能运动的革兰阴性杆菌。
窄食单胞菌对大多数临床常用的抗生素如氨基糖苷类和很多β-内酰胺类(包括对铜绿假单胞菌很有效的抗生素,如碳青霉烯类)天然耐药。
第二十五章弧菌属和气单胞菌属
古典生物型和EITor生物型的不同生物学特征
特征
古典生物型
EITor生物型
羊红细胞溶血
-
D
鸡红细胞凝集
-
+
V-P试验
-
+
多黏素B敏感试验
+
-
IV组噬菌体裂解
+
-
V组噬菌体裂解
-
+
注:
+:
90%以上菌株阳性,-:
90%以上菌株阴性
副溶血弧菌是一种嗜盐性细菌,主要存在于近海的海水和海产品中。
弯曲菌属为微需氧菌,多氧或无氧环境下均不生长,最适生长环境是含5%氧气、10%二氧化碳、85%氮气的微氧环境。
临床常见弯曲菌的主要鉴定特征
鉴定特征
空肠弯曲菌空肠亚种
大肠弯曲菌
胎儿弯曲菌胎儿亚种
胎儿弯曲菌性病亚种
氧化酶
+
+
+
+
硝酸盐还原
+
+
+
+
亚硝酸盐还原
-
-
-
-
需氢气
-
-
-
-
脲酶
-
-
--
硫化氢
-
-
-
-
马尿酸盐水解
+
-
-
-
醋酸吲哚酚水解
+=
+
-
-
15℃生长
-
-
-
-
25℃生长
-
-
+
+
42℃生长
+
+
-
-
3.5%氯化钠生长
-
-
-
-
1%甘油生长
+
+
+
-
麦康凯平板
+
+
+
+
萘啶酸
V
S
V
R
头孢噻吩
R
R
S
S
注:
+:
90%以上菌株阳性,-:
90%以上菌株阴性,V:
可变S:
敏感R:
耐药
卫星现象:
将流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌共同培养时,因金黄色葡萄球菌能合成较多的v因子,靠近金黄色葡萄球菌周围的流感嗜血杆菌菌落越大,距离越远的菌落越小。
鲍特菌属常用培养基为鲍-金培养基。
炭疽芽孢杆菌简称炭疽杆菌,是最早发现的病原菌,也是芽孢杆菌属中致病力最强的一种,引起人、兽共患的烈性传染病—炭疽。
串珠试验为炭疽芽孢杆菌特有的现象。
李斯特菌属在半固体培养基中沿穿刺线向四周蔓延生长,形成倒伞状。
棒状杆菌属用亚甲蓝、Albert法、Nesisser法等染色可显示菌体有浓染的异染颗粒。
分离培养是鉴定肺结核病最可靠的微生物学检查方法。
结合分枝杆菌涂片镜检结果应报告“找到抗酸菌”或“未找到抗酸菌”,而不能报告“找到结合分枝杆菌”。
在临床厌氧菌感染中,绝大多数是由无芽孢厌氧菌引起的内源性感染(约占90%)。
厌氧菌感染的临床及细菌学指标:
①感染局部有气体产生②发生在黏膜附近的感染③深部外伤④有特殊分泌物⑤某些抗生素治疗无效的感染⑥细菌学特征:
分泌物直接涂片革兰染色,发现细菌染色不均、形态奇特呈明显多形态;或镜检查见细菌,而需氧培养阴性;或在液体及半固体培养基深部有细菌生长,均可能为厌氧菌感染。
厌氧手套箱是目前国际上公认的厌氧菌培养的最佳设备。
汹涌发酵:
在牛乳培养基中,能分解乳糖产酸使酪蛋白凝固,同时产生大量气体将凝固的酪蛋白冲散形成蜂窝状,并将液面上的凡士林向上推挤,甚至冲开棉塞,气势凶猛。
支原体是一群没有细胞壁、介于细菌和病毒之间、能在人工培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物,形态上呈高度多形性,最小个体直径200微米左右,可通过滤菌器。
衣原体是一类能通过滤菌器、严格细胞内寄生、有独特生活周期的原核细胞型微生物。
支原体和细菌L型的区别
性状
支原体
细菌L型
大小
0.2~0.3微米
0.6~1.0微米
细胞膜
含胆固醇
不含胆固醇
遗传性
与细菌无关
与原细菌相同
回复成细菌
不能
能
致病性
支原体肺炎等
慢性感染
立克次体病的发热期均有立克次体血症存在,因此血液为最常用的分离标本。
用患者脑脊液做墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便。
最快速的方法。
HSV-2与子宫颈癌发生关系密切。
巨细胞病毒核内出现周围绕有一轮“空晕”的大型包涵体,形似“猫头鹰眼”状。
由EBV感染引起或与EBV感染有关疾病主要有三种:
①传染性单核细胞增多症②Burkitt淋巴瘤③鼻咽癌
甲型H1N1流感与2009年4月30日纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,依照甲类传染病采取预防、控制措施。
流感病毒可在鸡胚和培养细胞中增殖,其中最适于在鸡胚中生长。
初次分离时接种鸡胚羊膜腔最佳,传代后可接种于尿囊腔。
逆转录病毒科是一大组含有逆转录酶的RNA病毒。
根据其致病性,ICTV将其分为2个亚共科7个属,对人类致病的主要有正反转录病毒亚科中慢病毒属的人类免疫缺陷病毒(HIV)和森个吗逆转录病毒属的人类嗜T细胞病毒(HTLV)。
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