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嗽宁口服液的镇咳祛痰及平喘作用的实验研究
嗽宁口服液的镇咳、祛痰及平喘作用的实验研究
(作者:
___________单位:
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___________)
【摘要】目的观察嗽宁口服液的镇咳、祛痰及平喘作用。
方法采用豚鼠枸橼酸引咳实验、小鼠SO2引咳实验、小鼠酚红法祛痰实验、乙酰胆碱组胺豚鼠引喘实验、卵白蛋白豚鼠引喘实验方法进行嗽宁口服液镇咳、祛痰及平喘作用的研究。
结果嗽宁口服液在豚鼠枸橼酸引咳实验及小鼠SO2引咳实验中表现出显著的镇咳作用,在小鼠酚红法祛痰实验中祛痰作用显著,对乙酰胆碱、组织胺引喘实验豚鼠及卵白蛋白引喘实验豚鼠具有显著的平喘作用。
结论嗽宁口服液的中医处方具有镇咳、祛痰及平喘的功效。
【关键词】嗽宁口服液;咳嗽/治疗;祛痰;喘/治疗;动物,实验【Abstract】ObjectiveTostudytheantitussive,eliminatingphlegmandantiasthmaticeffectsofSouningoralliquid.MethodsSomeexperimentsweredone,includingcoughinducedbycitricacidinguineapigs,coughinducedbySO2inmice,expectoranttestsbyphenolredinmice,asthmainducedbyhistamineandacetylcholineinguineapigs,asthmainducedbyovalbumininguineapig,tostudytheantitussive,eliminatingphlegmandantiasthmaticeffectsofSouningoralliquid.ResultsSouningoralliquidexhibitedsignificanteffectsinthetestsofcoughinducedbycitricacid,coughinducedbySO2,expectoranttestsbyphenolred,asthmainducedbyhistamineandacetylcholine,andasthmainducedbyovalbumin.ConclusionThestudysuggeststhatSouningoralliquidhasantitussive,eliminatingphlegmandantiasthmaticeffects.【Keywords】Souningoralliquid;Cough/Treatment;Eliminatingphlegm;Asthma/Treatment;Animal,experiment嗽宁口服液是根据祖国传统医学理论,采用目前先进的中药制剂技术精制而成的纯中药制剂,具有宣肺降逆,清热化痰之功效,主治小儿发热、咽喉疼痛、咳嗽,甚至气急欲喘等,临床有较好的疗效,为进一步证实该药的疗效,本实验就其镇咳、化痰、平喘作用进行了药效学研究,现报道如下。
1材料与方法1.1材料1.1.1动物昆明种小鼠,体质量20~23g用于镇咳实验,体质量24~26g用于祛痰实验。
白豚鼠,体质量180~200g,雌雄两性。
上述动物均由大连医科大学实验动物研究室提供,动物饲养条件合格,动物质量合格,合格证号:
SCXK(辽)20020002。
1.1.2药品嗽宁口服液(深棕色口服液,每毫升含2g生药,由辽宁中医药大学药学院制剂教研室提供,批号:
20061015),儿童用量为60g/d生药,儿童平均体质量按25kg计算,用时按体表面积等效量的折算方法折算成动物剂量,并以蒸馏水稀释成所需要的浓度灌胃给药;蜜炼川贝枇杷膏由川贝母、枇杷叶、桔梗、苦杏仁、甘草等组成,具有润肺化痰、止咳平喘等功效(医药产品注册证号zc20050012,香港京都念慈菴总厂有限公司),按说明书小儿的日用量为22.5mL,小儿体质量按25kg计算,则0.9mL/kg,按体表面积等效量折算,小鼠剂量为5.73mL/kg,大鼠剂量4.05mL/kg,豚鼠剂量4.46mL/kg,用时以蒸馏水配成所需要的浓度灌胃给药。
1.1.3试剂枸橼酸(国药集团化学试剂有限公司,批号:
20050122);无水亚硫酸钠(沈阳市兴顺化学试剂厂,批号:
19990412);浓硫酸(锦西市化学试剂厂,批号:
20050326),配制浓度50%;酚红(沈阳市试剂三厂,批号:
20030801),用时配制成浓度0.5%;氯化乙酰胆碱(上海试剂三厂,批号:
20020501)配制浓度2%;磷酸组织胺(上海东风生物技术有限公司,批号:
20011011)配制浓度0.1%;卵白蛋白(上海生物化学试剂公司,批号:
20041015)。
1.1.4仪器超声波雾化器(广东省汕头市奥华医疗器械厂);可见紫外分光光度计(日本岛津公司)。
1.2方法1.2.1镇咳作用1.2.1.1豚鼠枸橼酸引咳实验选用无异常行为体征,外观健康活泼,体质量180~200g,雌雄两性白色豚鼠进行预选。
将17.5%的枸橼酸溶液盛于超声雾化器雾化室的雾化杯内,排雾口连于钟罩下方扣板开口处,使枸橼酸溶液雾化气由钟罩底部喷入。
将豚鼠扣于4L的钟罩内,调节超声雾化器的风速、雾化量及喷雾头的口径于适当,向钟罩内恒速喷入枸橼酸溶液雾化气1min,记录5min内的咳嗽次数。
豚鼠咳嗽声音响亮,以听到咳嗽声音计1次咳嗽,淘汰5min内咳嗽次数少15次的预选例,将预选合格的50只豚鼠按体质量和性别随机分成生理盐水对照组、嗽宁口服液低剂量组(12g/kg)、中剂量组(18g/kg)、高剂量组(27g/kg)及阳性对照组(4.5mL/kg蜜炼川贝枇杷膏),每组10只,雌雄各半。
将嗽宁口服液配成30%原浓度(内含60g生药)用于低剂量组、45%原浓度(内含90g生药)用于中剂量组、67.5%原浓度(内含135g生药)用于高剂量组,蜜炼川贝枇杷膏配成22.3%原浓度。
各组灌胃给药,灌胃容积均为20mL/kg,每日给药2次,连续给药3d。
于末次给药1h后,将豚鼠扣于4L的钟罩内,按预选的条件,向钟罩内恒速喷入枸橼酸溶液雾化气1min,记录5min内豚鼠咳嗽的次数。
对各组豚鼠5min内咳嗽的次数进行t检验[1]。
1.2.1.2小鼠SO2引咳实验选用无异常行为体征,外观健康活泼,体质量20~23g,雌雄两性小鼠50只用于实验,按体质量、性别随机分成生理盐水对照组、嗽宁口服液低剂量组(15g/kg生药)、中剂量组(22.5g/kg生药)、高剂量组(33.75g/kg)及阳性对照组(蜜炼川贝枇杷膏5.73mL/kg),每组10只,雌雄各半。
嗽宁口服液配成37.5%原浓度(内含75g生药)用于低剂量组,56.25%原浓度(内含112.5g生药)用于中剂量组,84.38%原浓度(内含168.75g生药)用于高剂量组,蜜炼川贝枇杷膏配成28.65%原浓度,各组灌胃给药,灌胃容积为20mL/kg,每日给药2次,连续给药3d,于末次给药1h后,将小鼠扣于500mL的烧杯内。
在1个25mL蒸发皿内盛0.5g无水亚硫酸钠,将50%硫酸5mL迅速倒入蒸发皿内,随即将烧杯连同小鼠扣于蒸发皿上,记录小鼠咳嗽的潜伏期(从将小鼠扣于充满SO2气体的烧杯内开始到小鼠第1次出现咳嗽的时间)及2min内小鼠咳嗽的次数。
对各组小鼠咳嗽的潜伏期和2min内小鼠咳嗽的次数进行t检验[1]。
1.2.2祛痰作用小鼠酚红法祛痰实验:
选用无异常行为体征,外观健康活泼,体质量24~27g雌雄两性小鼠60只用于实验,按体质量和性别随机分成生理盐水对照组、嗽宁口服液低剂量组(15g/kg生药)、中剂量组(22.5g/kg)、高剂量组(33.75g/kg生药)及阳性对照组(5.73mL/kg蜜炼川贝枇杷膏),每组12只,雌雄各半。
药物的稀释浓度同小鼠SO2引咳实验,各组小鼠灌胃给药,灌胃容积均为20mL/kg,每日给药2次,连续给药3d。
末次给药前饥饿过夜(只供水),末次给药后1h,腹腔注射0.5%酚红生理盐水溶液25mL/kg,酚红剂量为125mg/kg。
注射酚红后30min,麻醉后脱臼处死小鼠,背位固定,分离气管。
在气管上端用注射针头刺一小口,插入连接7号针头(针头前端剪短磨平)内抽5%碳酸氢钠溶液0.8mL的2mL注射器,插入支气管的深度为0.4~0.5cm,并用手术线结扎气管与插入的针头,用碳酸氢钠溶液反复缓慢冲洗小鼠肺部10次,抽出冲洗液留存。
以同样的方法共冲洗7次。
将留存的冲洗液2500r/min离心,取其上清液,在分光光度计波长546nm处测其吸光度(A值),并以A值间接表示酚红由小鼠支气管的分泌量,对A值进行组间t检验[2]。
1.2.3平喘作用1.2.3.1乙酰胆碱组胺豚鼠引喘实验选择无异常行为体征,外观活泼健康,体质量180~200g,雌雄两性的白色豚鼠。
首先对豚鼠引喘的潜伏期进行预选,将豚鼠扣于4L钟罩内,按预实验调定的参数调节超声雾化器的风速、雾化量及喷雾头的口径,从钟罩底部扣板向钟罩内恒速喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组织胺混合液雾化气15s,观察、记录豚鼠从喷雾开始到哮喘发作的引喘潜伏期,豚鼠出现明显呼吸急促、困难,口周发绀,腹肌随呼吸快速大幅度地收缩、舒张,头随呼吸频率点头式震颤,躁动不安,步态蹒跚,抽搐即将跌倒,即为哮喘发作。
迅速将豚鼠移至通风良好处,必要时辅以人工呼吸。
选择潜伏期小于100s的豚鼠用于正式实验,并以此潜伏期作为给药前潜伏期。
将筛选出敏感的豚鼠按潜伏期的长短,并兼顾体质量和性别随机分成生理盐水对照组、嗽宁口服液低剂量组(12g/kg生药)、中剂量组(18g/kg生药)、高剂量组(27g/kg生药)及阳性对照组(4.5mL/kg蜜炼川贝枇杷膏),每组10只。
药物稀释浓度同豚鼠枸橼酸引咳实验。
各组灌胃给药,20mL/kg,每日给药2次,连续给药3d。
末次给药后1h,以同样条件测定各组每只豚鼠的引喘潜伏期(如豚鼠用药后在6min内无喘息发作,则该豚鼠的引喘潜伏期按6min计算)。
对各实验组豚鼠的引喘潜伏期进行组间t检验[1,3]。
1.2.3.2卵白蛋白豚鼠引喘实验选择无异常行为体征,外观活泼健康,体质量180~200g白色豚鼠,分别腹腔注射10%卵白蛋白1mL进行致敏,致敏后的第14天,应用2%卵白蛋白,以超声雾化器喷雾引喘。
将豚鼠置于4L钟罩内,将超声雾化器按预实验已调定的参数调节风速、雾化量及喷雾头的口径,从钟罩底部扣板向钟罩内恒速喷入2%卵白蛋白溶液雾化气30s,观察记录从喷雾开始到哮喘发作的引喘潜伏期。
豚鼠出现明显的呼吸急促,呼吸困难,口周发绀,腹肌随呼吸快速大幅度地收缩、舒张,头随呼吸频率点头式震颤,躁动不安,步态蹒跚,抽搐将要跌倒,即为哮喘发作。
迅速将豚鼠移至通风良好处,必要时辅以人工呼吸。
选择哮喘潜伏期在120s内的豚鼠用于正式实验,并以此潜伏期作为给药前的潜伏期。
将预选出的豚鼠,按潜伏期的长短,并兼顾性别和体质量随机分成生理盐水对照组、嗽宁口服液低剂量组(12g/kg生药)、中剂量组(18g/kg生药)、高剂量组(27g/kg生药)、阳性对照组(4.5mL/kg蜜炼川贝枇杷膏),每组10只。
药物稀释浓度同豚鼠枸橼酸引咳实验。
各组灌胃给药,20mL/kg,每日给药2次,连续给药3d。
末次给药后1h,仍将豚鼠扣入4L钟罩内,以相同的条件向钟罩内恒速喷入2%卵白蛋白30s,记录各实验组各豚鼠的引喘潜伏期(如豚鼠用药后在6min内无哮喘发作,则该豚鼠的引喘潜伏期按6min计算)。
对各组引喘潜伏期进行组间t检验[3,4]。
2结果2.1嗽宁口服液对雾化枸橼酸引咳豚鼠咳嗽次数的影响见表1。
表1嗽宁口服液对雾化枸橼酸引咳豚鼠咳嗽次数的影响注:
与生理盐水对照组比较,aP0.05,bP0.01。
2.2嗽宁口服液对SO2引咳小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响见表2。
表2嗽宁口服液对SO2引咳小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响注:
与生理盐水对照组比较,aP0.05,bP0.01。
2.3嗽宁口服液对小白鼠支气管酚红分泌量吸光度值的影响见表3。
表3嗽宁口服液对小白鼠支气管酚红分泌量吸光度值的影响注:
与生理盐水对照组比较,aP0.05,bP0.01。
2.4嗽宁口服液对乙酰胆碱组胺引喘豚鼠引喘潜伏期的影响见表4。
表4嗽宁口服液对乙酰胆碱组胺引喘豚鼠引喘潜伏期的影响(±s,n=10)注:
与生理盐水对照组比较,aP0.05,bP0.01。
2.5嗽宁口服液对卵白蛋白引喘豚鼠引喘潜伏期的影响见表5。
表5嗽宁口服液对卵白蛋白引喘豚鼠引喘潜伏期的影响注:
与生理盐水对照组比较,aP0.05,bP0.01。
3讨论嗽宁口服液由蜜炙桑白皮、炒杏仁、前胡、炒牛蒡子、桔梗、甘草等组成,具有止咳、祛痰、平喘、发散风热等功效。
方中重用桑白皮为君药,杏仁为臣药,桔梗、前胡、牛蒡子为佐药,甘草为使药。
桑白皮甘寒清肺,杏仁苦温降肺,又兼宣散止咳,二者配伍杏仁助君降肺化痰而兼清热,一升一降而助肺之宣肃。
桔梗、前胡苦辛微寒,宣散肺气兼化痰,二者以化为主。
牛蒡子辛苦寒以宣散肺热利咽为主,再加甘草调和诸药。
使肺热得清、痰浊得化,肺气清肃之气下行,咳逆诸症得平。
从表1可见,嗽宁口服液低、中、高剂量组均能显著减少豚鼠5min内的咳嗽次数,作用呈量效关系,在临床等效剂量下,其作用与蜜炼川贝枇杷膏相似。
实验结果表明嗽宁口服液对雾化枸橼酸引咳豚鼠具有显著的镇咳作用。
从表2可见,嗽宁口服液低、中、高剂量组均能显著延长由SO2引咳小鼠的咳嗽潜伏期,也均能显著减少小鼠2min内的咳嗽次数,作用呈量效关系。
在临床等效剂量下,作用与蜜炼川贝枇杷膏相似。
实验结果表明嗽宁口服液对SO2引咳小鼠具有显著的镇咳作用。
从表3可见,嗽宁口服液低、中、高剂量组均能显著增加小鼠支气管酚红分泌量,升高A值,作用呈量效关系。
在临床等效剂量下,作用与蜜炼川贝枇杷膏相似。
实验结果表明,嗽宁口服液具有显著的祛痰作用。
从表4可见,嗽宁口服液低、中、高剂量组均能显著延长乙酰胆碱组胺引喘豚鼠的引喘潜伏期,作用呈量效关系。
在临床等效剂量下,作用与蜜炼川贝枇杷膏相似,实验结果表明,嗽宁口服液对乙酰胆碱组胺引喘的豚鼠具有显著的平喘作用。
从表5可见,嗽宁口服液低、中、高剂量组均能显著延长卵白蛋白引喘豚鼠的引喘潜伏期,作用呈量效关系。
在临床等效剂量下,作用与蜜炼川贝枇杷膏相似,实验结果表明,嗽宁口服液对卵白蛋白引喘豚鼠具有显著的平喘作用。
实验结束后,采取麻醉后处死各鼠。
本动物实验表明,嗽宁口服液对雾化枸橼酸引咳豚鼠及SO2引咳小鼠具有显著的镇咳作用,能显著增加小鼠支气管酚红分泌量,增加大鼠排痰量,有明显祛痰作用,对乙酰胆碱和组胺引喘的豚鼠及卵白蛋白引喘豚鼠具有显著的平喘作用,为临床应用提供了药效学依据。
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341.
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