积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究.docx
- 文档编号:12533324
- 上传时间:2023-06-06
- 格式:DOCX
- 页数:5
- 大小:20.55KB
积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究.docx
《积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究.docx(5页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究
积雪草酸与化疗药物联用抗肿瘤效应的初步研究
(作者:
___________单位:
___________邮编:
___________)
作者:
林娜,高静,方春钱,张海峰,杨永建,顾亚君,郭文洁【摘要】 目的:
研究积雪草酸(asiaticacid,AA)与化疗药物环磷酰胺(CTX),5氟尿嘧啶(5Fu)联用的抗肿瘤作用。
方法:
采用在体与离体实验相结合的方法,观察AA与5Fu或CTX联用对肝癌细胞株HepG2增殖和Heps肝癌腹水瘤、实体瘤生长的影响。
用MTT法检测联用AA和5Fu的抗肿瘤效果。
结果:
10,15,20,25μmol/LAA与50,7.5,1μmol/L5Fu联用,具有显著的抗肿瘤作用,AA不降低5Fu对HepG2细胞增殖的抑制作用。
AA和CTX联用于Heps腹水瘤小鼠,发现AA(50,100mg/kg)和CTX(20mg/kg)联用与单用CTX一样,能抑制腹腔积液的增生,且可延长Heps腹水瘤小鼠的寿命;AA和CTX联用于Heps实体瘤小鼠,有明显的抑瘤作用,而且AA能对抗CTX诱导的谷胱甘肽(GSH)水平的降低,可能对肝脏的抗氧化能力有一定的保护作用。
结论:
AA与化疗药物联用,可以减弱化疗药物的毒副作用。
【关键词】积雪草酸;5氟尿嘧啶;环磷酰胺;联合用药;抗肿瘤 [Abstract]Objective:
Studytheantitumoreffectsofasiaticacid(AA)combinedwithchemotherapeuticscyclophosphamide(CTX)or5fluorouracil(5Fu).Methods:
ThecytotoxiceffectsofthecombinationofAAand5FUontumorcelllinesHepG2weredetectedbyMTTassay.MicetransplantedwithHepssolidtumorandascitescarcinomawereusedtostudythecombinationantitumoreffectofAA(50,100mg/kg)andCTX(20mg/kg).Results:
WhenAA(10,15,20,25μmol/L)and5Fu(50,7.5,1μmol/L)wascombinatedtotreatthecells,thegrowthofHepG2cellswereinhibitedobviously.Ontheotherhand,AAprolongedthesurvivaltimeofmicewithHepsascitescarcinomacomparedwiththoseinCTXgroupandshowedsignificantantitumoractivitysimultaneously.TheprotectionofAAonhepaticGSHlevelinsultedbyCTXinmicewithHepssolidtumortreatedwithAAandCTXconfirmedtheattenuatedtoxicityeffectsofAA,whichmightbeassociatedwithhepatopretectionofAA.Conclusion:
ThepresentdatasuggestthatAAattenuatethetoxicityofsomechemotherapeuticsandmaybehelpfulincancertreatmentwiththecombinationofchemotherapeutics.[Keywords]asiaticacid;5fluorouracil;cyclophosphamide;drugcombination;antitumor肿瘤已成为人类致死的三大疾病之一。
目前临床使用的环磷酰胺(CTX),5氟尿嘧啶(5Fu)等抗肿瘤药物化疗时均产生明显的不良反应,引起正常组织的多器官毒性、免疫抑制、反复感染,机体衰弱等现象[1,2]。
本实验室已有的研究也发现CTX通过影响小鼠肝脏线粒体功能从而导致肝损伤[3]。
我国一些传统中药因其较少的不良反应、对机体具有保护和调理作用,成为中西药联合化疗的研究热点。
研发新型抗肿瘤增效、减毒剂可能是战胜恶性肿瘤的途径之一[4]。
积雪草酸(asiaticacid,AA),又名亚细亚酸,是我国传统中药积雪草的五环三萜类组分之一。
经研究证明,AA具有促进成纤维蛋白合成[5,6]、对抗CCl4和DGalN诱导的肝损伤[7]、对抗神经细胞的氧化损伤[8]等细胞保护作用。
另外,也发现AA具有抑制肿瘤细胞增殖的作用[9,10]。
但是对于AA应用于在体抗肿瘤治疗的实验研究尚未见报道。
本研究将在体与离体实验相结合,观察了AA与5Fu或CTX联用对肝癌细胞株HepG2增殖和Heps肝癌腹水瘤、实体瘤生长的影响。
1材料和方法 1.1材料人肝癌细胞株(HepG2):
南京大学徐力致老师惠赠;ICR小鼠(雄性),体质量18~22g,购自扬州大学比较医学中心,合格证号:
SCXK(苏)2002-0009。
动物饲养昼夜循环为10/14h,环境温度为25℃左右,自由饮食进水;Heps腹水瘤种鼠源自江苏省肿瘤医院;MTT(Sigma公司);5Fu(上海旭东海普药业有限公司);积雪草酸,纯度95%(广西昌洲天然产物有限公司),用于在体实验的AA用β环糊精包埋,由江苏大学化学化工学院张蓉仙老师制备;环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:
国药准字H32020857);β环糊精(南京中脉远红股份有限公司谢家坤高工惠赠);谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2离体实验 1.2.1细胞培养 HepG2细胞培养于含10%小牛血清的MEM培养基。
细胞接种于培养瓶中,置于37℃,5%CO2的孵箱中培养,2~3d传代1次。
1.2.2实验分组 将处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板,接种密度为2×104个/ml,每孔100μl。
培养24h后,加入10,20,30,40μmol/LAA,48h后用检测细胞活性,分析AA对HepG2细胞增殖的影响。
采用50,7.5,1μmol/L的5Fu分别与不同浓度AA(10,15,20,25μmol/L)联合用药。
以含1‰DMSO的培养基为对照。
1.2.3MTT法检测细胞存活率 96孔培养板中细胞经药物处理后,弃去培养基,每孔加100μlMTT(Dhank′s液溶解,1mg/ml),37℃孵育4h后,吸去上清,每孔加DMSO100μl,待结晶物充分溶解,用酶标仪(Spectrum190,MoleculerDevices)于570nm处测光密度值。
1.3在体实验 1.3.1荷瘤小鼠模型 Heps腹水瘤模型:
取Heps腹水瘤小鼠,处死后浸泡于75%乙醇5min,腹腔穿刺取腹腔积液,计数稀释至1×107个/ml,取0.2ml肿瘤细胞悬液接种于ICR小鼠腹腔。
Heps实体瘤模型:
同Heps腹水瘤模型,制备2×107个/ml的Heps瘤细胞悬液,0.2ml/只,接种于ICR小鼠右侧腋下。
1.3.2实验分组 荷瘤小鼠随机分为5组,对照组、CTX组、低剂量AA和CTX联用组、高剂量AA和CTX联用组及高剂量AA组,每组10只。
于腹腔接种瘤细胞的次日开始给药,联合用药组每日皮下注射CTX(20mg/kg)并分别灌胃低剂量(50mg/kg)和高剂量(100mg/kg)AA;CTX组皮下注射CTX(20mg/kg),以等量环糊精灌胃作为对照;高剂量AA组灌胃高剂量AA(100mg/kg),皮下注射等量生理盐水。
对照组皮下注射等量生理盐水,灌胃等量环糊精。
腹水瘤小鼠存活率检测分3组:
对照组,20mg/kgCTX组,50mg/kgAA和20mg/kgCTX联用组。
1.3.3腹水瘤小鼠存活率分析 观察小鼠的存活情况,并记录每天存活小鼠只数,进行生存期比较。
存活率=存活小鼠/小鼠总数×100% 1.3.4实体瘤小鼠抑瘤率检测 给药15d后,小鼠眼底静脉丛取血,然后颈椎脱臼处死小鼠,剥取肿瘤组织,称重,计算肿瘤抑制率。
1.3.5肝脏GSH含量检测 取肝脏左大叶相同部位肝组织,用适量生理盐水制备成10%组织匀浆,试剂盒检测GSH含量。
1.4统计方法 实验数据运用SAS软件进行单因素方差分析(ANOVA),组间比较作SNKq检验。
显著性标准为α=0.05。
腹水瘤小鼠存活率比较用χ2检验。
2结果 2.1AA对肿瘤细胞增殖的影响如图1所示,AA的剂量小于20μmol/L时,对HepG2细胞的生长没有明显影响;当剂量达到30μmol/L时,细胞活性显著降低;随着剂量的继续加大,抑制细胞增殖的作用逐渐加强。
2.2AA和5Fu联用抑制肿瘤细胞增殖采用10,15,20,25μmol/L的AA,分别与50,7.5,1μmol/L5Fu联用。
结果如图2所示。
随着5Fu浓度的降低,5Fu和AA联用的抗肿瘤效果也逐渐降低。
10,15,20,25μmol/L的AA和5Fu联用后抗肿瘤趋势与单用5Fu的趋势一致。
说明AA对3个浓度5Fu的抗肿瘤效果均没有影响。
2.3AA与CTX联用对Heps腹水瘤小鼠存活率的影响 由图3可以看出:
CTX组小鼠出现死亡较早,和AA联用后,死亡延缓。
说明AA有降低CTX毒性,延长荷瘤鼠寿命的作用。
接种肿瘤后第14天荷瘤小鼠存活率统计分析表明,20mg/kgCTX组小鼠的存活率低于对照组,说明CTX抑瘤的同时产生了明显的毒性作用;而AA与CTX联用组小鼠的存活率有所提高,提示AA有延长荷瘤小鼠寿命、降低CTX毒性的作用(表1)。
表1化疗第14天各组荷瘤鼠的存活率(略)2.4AA与CTX联用抑制Heps实体瘤的作用 由图4可以看出:
20mg/kgCTX对Heps实体瘤具有良好的抑制作用,单用100mg/kgAA的抗肿瘤活性较弱,两者联用后具有显著的抗肿瘤作用,50,100mg/kgAA均没有减弱CTX的抗肿瘤活性。
2.5AA与CTX联用对荷瘤小鼠抗氧化能力的影响从图5可以看出:
CTX组荷瘤小鼠肝组织中GSH含量显著下降,而AA和CTX联用组GSH含量和对照组相比差异无统计学意义,说明AA对抗了CTX诱导的荷瘤小鼠肝脏GSH水平的降低。
3讨论AA对不同肿瘤细胞具有不同的抗肿瘤机制[9,10],低剂量时则可以保护细胞对抗损伤[5,7]。
本研究首次将AA应用于中西药联合化疗,通过AA和5Fu联用,观察体外联合用药的效果;AA和CTX联用,观察在体抗肿瘤的效果。
结果表明,选择合适的剂量,可以使AA在不影响抗肿瘤药物作用的前提下,发挥其细胞保护作用。
之前有文献报道:
在CTX引起的肝毒性过程中,自由基和氧化应激是两个不可忽视的因素,两者导致脂质过氧化反应的剧烈进行,胞内抗氧化防御体系通过非酶促反应清除自由基,GSH迅速耗竭[11]。
从Heps实体瘤模型结果可知,AA对抗CTX诱导的肝脏GSH活性的降低,提示AA对肝脏具有保护作用,这与以前的研究结果一致[8]。
AA单独应用没有发挥理想的抑瘤作用,而影响药物作用的因素很多,且由于实验中观察到AA的水溶性不好,我们推测生物利用度不高可能是重要的影响因素之一。
因此也许通过改变AA的剂型,使其在体内能达到抗肿瘤的血药浓度,可以进一步研究AA的在体抗肿瘤效果,为AA的临床应用提供理论依据。
【参考文献】 [1]BukowskiRM.Theneedforcytoprotection[J].EurJCancer,1996,32A(4):
S2-S4. [2]FraiserLH,KanekelS,KehrerJP.Cyclophosphamidetoxicity.Characterizingandavoidingtheproblem[J].Drugs,1991,42(5):
781-795. [3]张海峰,高静,林娜,等.环磷酰胺致肝损伤时肝细胞线粒体的变化[J].江苏大学学报:
医学版,2008,18
(1):
19-22. [4]马岩,张锐,于小风,等.黄蘑多糖对小鼠化疗的增效减毒作用[J].中草药,2006,37(8):
1199-1202. [5]MaquartFX,BellonG,GilleryP,etal.StimulationofcollagensynthesisinfibroblastculturesbyatriterpeneextractedfromCentellaasiatica[J].ConnectTissueRes,1990,24
(2):
107-120. [6]SooLeeY,JinDQ,BeakSM,etal.InhibitionofultravioletAmodulatedsignalingpathwaysbyasiaticacidandursolicacidinHaCaThumankeratinocytes[J].EurJPharmacol,2003,476(3):
173-178. [7]GaoJ,TangX,DouH,etal.HepatoprotectiveactivityofTerminaliacatappaL.leavesanditstwotriterpenoids[J].JPharmPharmacol,2004,56(11):
1449-1455. [8]LeeMK,KimSR,SungSH,etal.Asiaticacidderivativesprotectculturedcorticalneuronsfromglutamateinducedexcitotoxicity[J].ResCommunMolPatholPharmacol,2000,108(1-2):
75-86. [9]ParkBC,BosireKO,LeeES,et.al.AsiaticacidinducesapoptosisinSKMEL2humanmelanomacells[J].CancerLett,2005,218
(1):
81-90. [10]LeeYS,JinDQ,KwonEJ,etal.Asiaticacid,atriterpene,inducesapoptosisthroughintracellularCa2+releaseandenhancedexpressionofp53inHepG2humanhepatomacells[J].CancerLett,2002,186
(1):
83-91. [11]LearL,NationRL,StupansI,etal.EffectsofCPandadriamycinonrathepaticmicrosomalglucuronidationandlipidperoxidation[J].BiochemPharmacol,1992,44(4):
747-753.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 积雪 草酸 化疗 药物 联用 肿瘤 效应 初步 研究
![提示](https://static.bingdoc.com/images/bang_tan.gif)