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毒理学
毒理学
名词解释
外源化合物:
在人类生活的外界环境中存在,可能与机体接触进入机体,在体内呈现一定生物学作用的化学物质,又称为“外源生物活性物质”,包括药物、农药、食品添加剂、化工产品及环境化合物等。
蓄积毒性:
当较长时间连续反复给药,或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时,出现药物进入机体的速度或总量超过排出的速度或总量的现象。
这时,药物就有可能在体内逐渐增加并且贮存起来产生毒性。
选择毒性:
指一种化学物质只对某种生物产生损害作用,而对其他生物无害,或只对机体某一器官发挥毒性,而对其他组织器官不具毒作用。
代偿能力:
当体内组织或器官局部发生病变时,病变处功能降低,此时非病变处组织通过自身功能的加强来弥补病变处功能不足的能力。
最大无作用剂量:
指药物在一定时间内,按一定方式与机体接触,按一定的检测方法或观察指标,不能观察到任何损害作用的最高剂量。
中毒阈剂量:
是指能使机体的某项指标发生异常变化所需的最小剂量,即能使机体开始出现毒性反应的最低剂量。
急性毒作用带:
用于表示一种药物的急性毒性,用药物的半数致死量与急性毒性最小作用剂量的比值表示。
慢性毒作用带:
用药物的急性毒性最小作用剂量与长期毒性最小作用剂量表示,亦可用于表示一种药物的长期毒性。
QAU:
质量保证部门,指负责保证安全性研究机构的各项研究工作符合本规定要求的机构。
SOP:
标准操作规程,为得到准确地实验数据,要求正确而且统一的操作,对所有实验操作应以SOP为标准,是GLP中最重要的工作软件。
急性毒性:
24h内单次或多次大剂量给予某药物所出现的有害作用,亦指机体一次性大剂
量接受某种药物后所产生的快速而剧烈的中毒反应,包括死亡效应。
质反应:
药理效应不是随药物剂量或浓度的递减呈连续性量的变化,而表现为反应性质的变化,则称为质反应。
机体对药物的反应是以某特定指标出现或不出现为准。
因此又称“有或无”反应(allornoneresponse)。
近似致死量(ALT):
介于最小致死量(MLD,LD5)与最大非致死量(MNLD,LD0)之间的剂量。
SPF动物:
是指无特定病原体动物,指机体内无特殊的微生物和寄生虫存在的实验动物。
悉生动物*(已知菌动物)对无菌动物人工投予某些已知微生物而获得。
蓄积系数=LD50(n)/LD50
(1);
=n次给药的半数致死剂量/1次给药的半数致死剂量(越大,蓄积毒性越小)
脏器系数(脏体比)=器官重量/体重
毒代动力学:
运用药代动力学的原理和方法结合毒性研究定量的分析药物及其代谢产物在毒性剂量下全身暴露的代谢动力学,是药代动力学在全身暴露评价中的延伸。
突变作用:
指生物体遗传物质发生急剧的遗传学变化,导致可以遗传的表型变异,其表型变异不可逆,这种现象称为突变作用。
(可视为DNA结构在某一水平上受到破坏,并由此改变了体细胞或生殖细胞中的遗传信息)
移码突变:
指DNA多核苷酸链上碱基序列丢失一个或几个碱基,或插入一个或几个化合物分子,结果使突变位点以下的碱基序列发生变更,以致使三联密码转录和翻译时,发生较多遗传信息改变的基因突变类型。
转换型突变:
是指DNA多核苷酸链上的碱基中,嘌呤互相取代或嘧啶互相取代所引起的基因突变。
可导致转录时的一个RNA密码子改变和翻译时的多肽链的一个氨基酸的改变。
染色体畸变:
是指某个或几个染色体结构或数目发生改变的突变。
碱基类似物:
分子结构与DNA碱基类似,多为人工合成,在DNA代谢过程中可以取代正常碱基,阻碍DNA合成(如5-氟尿嘧啶)
多倍体:
正常的生殖细胞染色体为单倍体,体细胞为双倍体,在突变细胞中,染色体可以成整倍的发生变化,以致形成三倍体四倍体等,二倍体以上统称为多倍体。
间接致突变物:
是指那些本身不引起突变,必须在体内经代谢活化后才具有致突变作用的药物。
微核:
骨髓细胞经致突变物作用,其染色体发生畸变以致断裂,断裂的碎片在分裂间期留在子代细胞中形成的规则的圆形或椭圆形结构的小块物质,由于它比普通细胞核小,故称之为微核。
程序外DNA合成:
DNA受损后,发生于正常复制合成期(S期)以外的DNA修复合成。
/
肯定的人类致癌物:
有足够的流行病学证据,支持因素接触与癌症发生的因果关系,这样的一类致癌物叫做肯定的人类致癌物。
非遗传毒性致癌物:
部分致癌物用常规的致突变实验不能检出致突变性,但可促使细胞增殖诱发肿瘤。
由于其不直接作用于遗传物质,称为非遗传毒性致癌物(如免疫抑制剂,石棉等)
直接致癌物:
不需代谢活化即具有亲电子活性,能与亲核分子(包括DNA)共价结合形成加合物而诱导细胞癌变,如致癌性烷化剂和金属致癌物。
间接致癌物:
需在体内代谢活化后才具有致癌活性。
活化前的间接致癌物叫做前致癌物,经活化代谢后的产物称为终代谢物,在活化过程中的中间产物叫近似致癌物。
促癌物:
本身不具有致癌性,单独作用不会诱发肿瘤,但当它与致癌物共同作用,或在致癌物作用之后,反复作用于细胞,具有促进启动细胞发展称为肿瘤的作用。
原癌基因:
细胞中存在的核酸水平及蛋白质产物水平与病毒癌基因高度相似的DNA序列称为原癌基因。
抑癌基因:
拮抗癌基因作用的一类基因,在正常细胞中能抑制细胞增殖和促进细胞分化。
生殖毒性:
化学物对亲代(育龄人群)生殖系统以及与生殖相关的神经、内分泌系统产生的损害作用。
生育毒性:
化学物对子代(胚胎)发育过程的损害作用,特别是化学物的致畸性。
反应停事件:
1956年联邦德国生产了一种新的镇静剂,即反应停(沙利度胺)。
经常规毒理学方法检测,认为是安全的,该药上市后,广泛用于早孕反应。
此后,陆续出现反应停致畸的事件,主要是短肢样畸形,称“海豹胎”。
到1961年底,全世界由此致畸的婴儿达1万例以上。
对药物致畸作用的警惕始于此,此后美国和欧洲相继立法,把药物致畸作用的研究作为药物安全性评价的一部分。
细胞凋亡:
在一定生理或病理条件下,细胞遵循自身的基因程序,激活核酸内切酶,自动结束生命的过程,最终细胞从群体脱离,或裂解为若干凋亡小体,被其他细胞所吞噬。
(在细胞生物学中德定义:
是指多细胞生物在发育过程中,一种由基因控制的主动的细胞生理性自杀行为)
激素干扰物:
又叫内分泌干扰物。
是指一类能干扰激素代谢而产生不良反应的化合物。
植物性拟雌激素:
植物中的很多天然物质具有拟雌激素活性,这些物质通过食物及饲料进入人体及动物体内,对机体产生影响。
如很多黄酮类物质。
问答题
1.影响化学物毒性作用的因素有哪些?
1)药物的理化性质;2)种属和个体差异;3)药物赋形剂,添加剂;
4)给药途径(静脉最大,皮肤最小);5)环境因素
2.损害作用具有哪些特点?
1)机体的功能形态、生长发育过程受到严重影响,导致寿命缩短。
2)功能的容量下降
3)对外界不利因素的易感性增强,对应激状态的代偿能力下降。
4)维持内环境稳态能力下降且为不可逆。
5)剂量增加,而代谢转化消除减少
6)酶受到抑制或活力发生改变
7)天然底物浓度上升,负荷试验中对专一性底物代谢能力下降。
3.试述毒性作用的分类。
1)局部作用,全身作用;2)可逆作用,不可逆作用;3)速发作用,迟发作用;4)变态反应(有接触史,不是典型的S型剂量反应曲线),特异质反应(遗传性异常反应)
4.试述毒性作用的常用参数。
毒性上限参数:
在急性毒性实验中以死亡为终点的各项毒性参数。
包括:
1)绝对致死量(LD100或LC100):
只引起一群实验动物全部死亡的最低剂量或浓度;2)半数致死量(LD50或LC50);3)最小致死量(MLD)或浓度(MLC):
指药物在最低剂量组的一群实验动物中仅引起个别动物死亡的剂量或浓度;4)最大耐受量或最大耐受浓度(LD0或LC0或MTD):
指药物在实验动物中不引起实验动物死亡的最大剂量或最大浓度。
5)致死剂量或致死浓度:
LD或LC笼统的表示药物对实验动物引起死亡的剂量或浓度。
毒性下限参数:
有害作用阈剂量及最大未观察到有害作用的剂量。
包括:
1)急性阈剂量或阈浓度,指一次接触药物所得的阈剂量或阈浓度;2)慢性阈剂量或阈浓度:
指长期连续接触药物所得的阈剂量或阈浓度;3)最大无作用剂量或浓度(ED0或ED0):
指药物在一定时间内,按一定方式与机体接触,按一定的检测方法或观察指标,不能观察到任何损害作用的最高剂量;4)中毒阈剂量或中毒阈浓度:
即最小中毒量,一群实验动物中只有少数个别动物某项生理指标改变。
5.A型损害性反应与B型损害性反应有何异同?
A型:
为一过性的,是常用剂量下出现的药理作用的延伸,具有可预测性,剂量相关性,发生率高,死亡率低,可通过调整剂量来降低或避免。
B型:
为完全异常的反应,不可预测,通常与剂量无关,发生率低但死亡率高,如发生则需停药。
6.试述LD50测定的意义
1)LD50是药物重要特性参数之一(数值越大越安全)
2)有助于计算其他相关的毒性参数
3)为药物急性毒性分级依据
4)为长期毒性试验、特殊毒性试验和临床药理评价提供指标及剂量设计依据
5)为毒效应靶器官确定和机制分析提供线索
6)作为生产过程中的质量监控的检测措施
7.试述实验动物按微生物标准的分级
分为五级
国内:
普通级动物CV、清洁级动物CL、无特定病原体动物SPF、无菌动物GF、悉生动物;
国外:
清洁级动物CL、无特定病原体动物SPF、无菌动物DF、悉生动物;
8.试述长期毒性实验中主要的血液生化学指标及其意义
1)氨基转移酶:
ALT其含量与肝细胞病变程度大致平行,对于判断肝脏损伤有重要意义;AST在心肌中含量较高,可用于辅助诊断心肌炎、心肌梗塞等疾病。
2)总胆红素:
当肝胆管阻塞或肝细胞受损的情况下,胆红素会反流入血液出现高胆红素血症而使组织黄染。
3)碱性磷酸酶:
成骨细胞活性增强,肝功能损伤,胆汁淤积时该酶活性升高,而营养缺乏时下降。
4)尿素氮:
指示肾功能损伤、通风和肌肉损伤等。
5)乳酸脱氢酶:
根据同工酶谱分析可判断什么组织或器官出现损伤。
6)血糖:
相关激素水平和腺体功能。
7)蛋白:
包括白蛋白,球蛋白,血红蛋白;白蛋白/球蛋白=1:
1~1.5:
1肝硬化使,白升球降,出现倒置。
8)电解质:
钠、钾、钙、氯、磷酸根离子等。
9)肌酸磷酸激酶:
肌肉异常、心肌梗塞和肺循环异常时该酶增高。
10)R-谷氨酰转肽酶:
肝胆疾病指标。
9.基因突变有哪些常见类型?
1)点突变:
a.转换型——嘌呤之间或嘧啶之间互相取代;b.颠换型——嘌呤嘧啶互相取代
2)移码突变:
嘌呤取代嘧啶或嘧啶取代嘌呤。
(DNA多核苷酸链上的碱基序列丢失或插入,一个或几个碱基)
10.Ames试验原理及方法评价
原理:
组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长,但在加有突变原的培养基上培养,则可使突变型产生回复突变成野生型,即恢复合成组氨酸的能力,能在缺乏组氨酸的培养基上生长成菌落,通过计数菌落数目就可以估算药物的诱变性的强弱。
方法评价:
可靠,我国新药审批办法推荐其为致突变试验首选方法,但对于有明显杀菌作用的药物来说不适合。
11.Ames试验菌株鉴定及试验方法
鉴定:
1)组氨酸营养缺陷鉴定:
方法:
两组底层葡萄糖平皿,一组加组氨酸和生物素,一组加仅加生物素
2)rfa鉴定(结晶紫杀伤抑菌圈):
深粗糙型突变的细菌缺乏多糖屏障,大分子物质进入菌体。
方法:
滴加0.1%结晶紫,竖起平皿,在结晶紫溶液流下的方向垂直划线接种,在结晶紫渗透区出现抑菌,证明有rfa突变。
3)uvrB缺失鉴定(紫外线敏感试验):
4)R因子测定(氨苄青霉素耐药性试验):
带R因子的菌株具有抗氨苄青霉素的特性。
方法:
平皿低价氨苄青霉素,不含R因子的在其周围有生长抑制区,含R因子的无抑制区。
5)自发回变数测定:
受试菌株在培养过程中,能产生自发回变,不同菌株的自发回变菌落数有一定范围。
试验方法:
1)掺入法:
将测试菌液0.1ml。
测试样品0.1ml。
S90.5ml加入顶层琼脂,充分混匀后迅速倾入葡萄糖琼脂底层培养平皿上,稍微倾斜转动平皿使顶层琼脂均匀全面的扩散开,水平放置任其固化。
琼脂凝固后将平皿放入37℃培养箱,2天后计数测试平皿和对照平皿的菌落数。
2)点试法:
测试菌液0.1ml,S90.5ml加入顶层琼脂,充分混匀后迅速倾入葡萄糖琼脂底层培养基平皿上,然后每皿放入直径6mm的无菌滤纸片4-5枚,向滤纸片滴加不同浓度的药物10ul。
37℃培养24-48h。
12.微核试验的原理及方法
原理:
骨髓细胞经致突变作用后,染色体发生畸变,在子代细胞中形成微核,发育成骨髓红细胞后检查微核的出现率。
(骨髓细胞经致突变作用,其染色体可发生畸变以致断裂。
其断裂的碎片在分裂间期留在子代细胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆形结构的小块物质,由于比普通细胞核要小,故称之为微核。
所以观察骨髓细胞的微核率有助于检验药物是否具有致突变作用。
但由于骨髓细胞缺乏代谢活化酶系,对间接诱变物反应较差,有一定局限性。
正常核叶极难以与微粒相鉴别,所以采用骨髓中无核的嗜多染红细胞进行观察,微核检出率与染色体畸变率之间确有明显相关性。
)
方法:
一般选择NIH小鼠,每组10只雌雄各半的性成熟动物,分高(1/2LD50)、中、低三个剂量给药,给药途径尽量与临床拟用途径相同,以溶酶为阴性对照,环磷酰胺为阳性对照,进行试验,骨髓采样,骨髓直接涂片法涂片,观察和鉴别。
13.果蝇伴性隐性致死试验的原理及结果判定
原理:
阴性基因在伴性遗传中的交叉遗传特性,即雄性果蝇X染色体的突变传给F1代雌性果蝇,F1雌性果蝇为杂合子不能表达,传给F2代雄性果蝇时表达出来,由于其隐性致死性突变,所以F2代雄性果蝇数目比雌性果蝇数目少一半。
结果判断:
奖受试染色体数,给药的和无生育力的雄性数,F2代培养群数目,每一生殖细胞期检测的带有致死基因的染色体数目,按以下公式计算突变致死率。
致死突变率%=
。
1)当致死率大于自然突变率的2倍并有剂量关系时记阳性;
2)在F2代中,有一支培养管中,若雌雄合计20只以上未发现有雄性者为阳性,反之有20只以上者雄蝇者为阴性;
3)在F2代中,有一支培养管中,若雌雄合计少于20只时或至少有一只雄果蝇者为可以,需观察F3代;
4)仅存雌雄果蝇亲本而无子代者为不育。
14.啮齿动物显性致死试验的原理。
哺乳动物生殖细胞在减数分裂期和受精期最易发生突变,突变后失去与异性生殖细胞结合的能力,或者结合后发育不成正常的胚胎,以致总着床数减少或早期胚胎死亡及畸胎现象。
通过观察计数算出:
突变指数=
;显性致死率%=
可以判断药物致哺乳动物显性致死的能力
15.如何鉴别活胎、早期死亡胚胎和晚期死亡胚胎?
活胎:
成型,色鲜红,有自然运动,机械刺激后有运动反应。
早期死亡胚胎:
胎盘小,不明显,颜色紫红,无自然运动。
晚期死亡胚胎:
有明显完整的胎盘,呈暗灰色,无自然运动。
16.SOS显色试验的原理及评价
原理:
通过直接监测DNA受损后的SOS修复反应来检测遗传毒性,SOSchromotest是一种特异性的β-半乳糖苷酶诱导试验,一旦DNA损伤,组成该系统的RecA蛋白即转化为RecA蛋白水解酶,此酶分解阻遏蛋白,使受阻遏的SfiA基因去阻遏,并启动lac基因转录翻译,产生Gal,此酶分解邻硝基苯β-D-半乳糖苷酶ONPG,产生黄色可溶性物质。
评价:
1)快速,方便,7h;2)灵敏,被测试细胞只要产生或不产生SOS反应,测OD值;3)准确,直接,测定的是遗传物质对细胞原发的直接反应产物,阳性结果可信。
1.肿瘤的致病因素
(一)环境中致癌因素:
化学物质:
汞、铅、苯、甲醛、雌激素样物质等;物理性因素:
电离辐射(X射线、放射性同位素)、紫外线、电磁场、热辐射、慢性机械刺激、石棉纤;生物性因素:
病毒(乙肝)、细菌(幽门螺杆菌)、寄生虫(血吸虫)
(二)医源性化学致癌作用:
临床诊断:
X射线、γ射线、同位素;药物:
己烯雌酚、雌激素替代疗法
(三)生活方式:
吸烟:
肺癌、口腔、食道、咽癌等;饮酒:
肝硬化引发肝癌;饮食:
食品添加剂(色素、甜味剂、防腐剂)、霉菌毒素(黄曲霉素)、烹调热裂解产物(烟熏、煎炸);化妆品:
砷、雌激素、对苯二胺
(四)职业因素:
煤矿、印刷、家具等工种
(五)病理因素:
慢性炎症、烧伤外伤可能是一种促癌因素,诱发肿瘤
(六)社会心理因素:
长期紧张、恐惧、忧郁、悲伤等不良因素
(七)影响发生发展的内在因素:
遗传:
直接遗传只是少数,大多通过致癌因子易感性或倾向性发挥作用。
;免疫:
免疫低下者易感、细胞免疫溶解肿瘤细胞;激素:
内分泌紊乱;性别及年龄:
性别差异、50岁以上;种族:
某些与种族生活习惯环境有关
2.影响肿瘤发生发展的内在因素有哪些?
1)遗传因素:
对于单基因常染色体显性遗传疾病(如视网膜母细胞瘤),遗传因素起决定作用;对于单基因常染色体隐性遗传疾病(如着色性干皮病),遗传因素不直接决定肿瘤的发生,仅决定肿瘤的易感性。
但大多数情况下,遗传因素和环境因素在肿瘤发生中起协同作用,而且环境因素更加重要。
2)免疫因素:
当免疫缺陷时,诱发肿瘤的敏感性明显增高。
宿主和肿瘤之间的作用是相互的。
一方面,宿主可以通过识别肿瘤抗原,启动免疫机制限制与杀灭肿瘤;另一方面,肿瘤可以破坏宿主免疫功能,从而免疫逃逸,得以继续增殖生长。
3)激素因素
4)性别与年龄因素
5)种族因素
3.化学致癌物代谢活化的特点有哪些?
1)代谢以氧化过程为主
2)代谢活化主要在肝脏,但也可以在多种组织、器官中进行,有组织器官的特异性(P450氧化酶系在大多数组织细胞中都存在,某些组织细胞还含有特殊的酶)
3)代谢酶的活性存在在种属、品系、家族和个体差异,个体之间可相差30~100倍。
4.简述DNA修复和化学致癌理论
化学物可与DNA碱基、戊糖或磷酸发生反应,形成稳定的等价加合物,也可以迅速导致碱基脱氨或水合作用以及DNA断裂、碱基丢失、DNA双螺旋扭曲变形,引起移码突变,DNA链内交联等。
尽管DNA易受到亲电子物质和自由基的攻击,但是DNA是相对稳定的,原因在于在长期的进化过程中,细胞形成了一套有效的DNA修复系统,以此保持遗传稳定性和正常功能。
但是DNA聚合酶在修复过程中并非绝对按照其模板上的顺序,因此存在错误配对形成突变的可能,特别是在切除大片段是时候(Bp>20)。
DNA损伤如果不能得到修复或者修复不正确,损伤可以经DNA复制传到子代细胞中,引起基因突变和细胞转化,成为发生肿瘤的潜在危险。
发生基因突变可能性有以下几种:
1)修复发生错误;2)当DNA损伤不被修复系统所识别或损伤水平太高,超过了修复的能力,DNA损伤不会被修复。
;3)当修复系统异常时,如存在DNA损伤修复缺陷时,某些损伤不会被修复。
综上所述:
化学致癌物作用于机体能引发癌症,既取决于致癌物对DNA的损伤,也取决于机体对损伤DNA的修复能力。
5.简述细胞凋亡和化学致癌理论
细胞凋亡:
实在一定的生理或病理的条件下,细胞遵循自身的基因程序,激活核苷酸内切酶,自动结束生命的过程,最终从群体脱离,或裂解为若干凋亡小体,被其他细胞所吞噬。
以p53为例:
DNA受损时,p53基因编码的蛋白质水平升高,阻断细胞周期的循环,使细胞停留在G1期,使DNA在复制之前有充分的时间修复。
当DNA受损严重无法修复时,p53蛋白持续升高并诱导细胞凋亡,以免受损DNA传入子代细胞。
突变后的p53会出现相反作用,DNA损伤时细胞周期不能暂停,使受损DNA无充分的修复时间;也不引起细胞凋亡,如此继续复制,导致突变细胞增多,为癌变创造了必要条件。
细胞凋亡的存在可以抑制肿瘤的发生和发展,一旦细胞凋亡被抑制,可使正常细胞转化为肿瘤细胞的几率增加。
6.简述化学致癌三阶段理论
化学致癌至少有三个阶段:
启动阶段、促癌阶段、进展阶段。
1)启动阶段:
化学致癌物作用于DNA,造成DNA损伤,DNA损伤经细胞分裂增殖(一次到数次)被固定下来,导致基因突变,使细胞发生了不可逆的遗传性改变,但此刻细胞并不表现出肿瘤细胞的生物学特性。
启动细胞不一定都能存活下来,其他转归方式:
a.被机体的免疫系统清除;b.通过细胞凋亡而消失;c.在组织稳态因素控制下,保持休眠状态。
2)促癌阶段:
促癌物质通过特定受体而影响信息传递,从而可逆地增加或减弱基因的飙到,促进已突变的启动细胞迅速分裂,形成良性肿瘤。
3)进展阶段:
在肿瘤形成的促癌阶段中或之后,细胞表现出复杂的基因改变(染色体的结构变异、大段丢失、易位或嵌入),细胞形态或行为发生变化(如生长加速、高度的侵犯性、转移能力、对激素的反应性以及生化、免疫性能的改变等),从而获得了恶性肿瘤细胞特性。
7.检测药物致癌的方法有哪些,最具说服力的是哪一个?
检测药物致癌的方法有:
1)致突变试验:
Ames试验、SOS显色试验、UDS试验、果蝇伴性隐性致死试验、微核试验等。
2)短期致癌试验:
哺乳动物培养细胞恶性转化试验、动物短期致癌试验
3)动物长期致癌试验:
又叫哺乳动物终生致癌试验。
最具说服力的是动物长期致癌试验。
8.试述长期致癌试验的设计原则和基本要求
短期筛检试验阳性的受试物,若有重要使用价值,应进行哺乳动物长期致癌试验。
多数已知的人类致癌物都能诱发动物肿瘤,因此,通过动物长期致癌试验可以对化学物的致癌性作出充分估计。
肿瘤的发病过程缓慢,距初次接触化学致癌物至最终形成恶性肿瘤,有5~30年的潜伏期。
用啮齿类动物进行1~2年的诱癌试验,相当于人类大半生时间,故又称哺乳动物终生致癌试验,是鉴定动物致癌物的经典方法,结果比较可靠。
1.试验动物的选择
(1)种属:
选用两种啮齿类动物,可选大鼠、小鼠、金黄地鼠等。
啮齿类动物的优点:
对致癌物敏感性高,寿命相对较短、对其生理和病理特征了解较多,“自发肿瘤率”资料较全,饲养费用较低等。
(2)品系:
同一种属不同品系的动物对化学致癌物的反应也相当不同。
要选择敏感、自发肿瘤率低,生活力强的品系。
纯系动物的优点:
自然寿命和自发肿瘤率较恒定,免疫性状相同,试验容易重复,便于结果比较。
杂交系动物的优点:
抗感染力较强,遗传特性比纯系动物复杂而更具有代表性。
杂交一代动物,可兼具二者的优点。
2.动物年龄:
选用刚断奶的幼年动物,不迟于出生后7-9周。
幼年动物肝药酶和免疫系统的发育还不完善,对受试物较敏感。
可保证有较长的试验观察期,使致癌性较弱,潜伏期较长的致癌物有充分发挥作用的机会。
3.动物数量:
每组动物至少雌雄个50只。
4.动物性别:
为了接近人类实际情况,应选用同等数量的雌雄两性动物。
5.给药途径:
原则上与临床拟给药途径相同。
口服给药可采用喂饲法和灌胃。
6.剂量选择和分组:
至少分高中低三个剂量组。
设立高剂量的原则:
一般选进行短期预实验,根据其结果,同时参考长期毒性试验结果来确定高剂量。
低剂量原则:
临床拟用量的1-3倍
中剂原则量:
与高低剂量成等比级数关系
另设立空白对照组和溶媒或赋形剂对照组,必要时可以设立阳性对照组,一般选用与受试物结构相似的已知致癌物作阳性对照物。
7.试验期限:
动物正常寿命的大部分时间或终生。
吧、另外,试验开始不久若发生大量动物死亡时,应提早结束试验
8.观察与检查:
一般观察大体解剖和病理组织学检查
9.统计分析:
肿瘤发生率和潜伏期
10.结果判断:
a.给药组肿瘤发生率显著高于对照组自发肿瘤率;b.给药组肿瘤发生的潜伏去显著短于对照组;c.给药组肿瘤发生部位多于对照组;d.给药组肿瘤类型与对照组不同(对照组应有历史对照资料);符合上述情况之一,并有统计学意义时可以判断为阳性,如有明显的剂量反应关系,结果更为可靠。
11.结果评价:
从动物试验结果推论对人体致癌性应极为慎重。
一种动物试验结果为阳性时,预示该受试药对人可能有致癌潜力。
两种动物试验结果皆为阴性时,可初步认为该受试药对动物和人都没有致癌性。
9.生殖与发育
生殖:
是人和哺乳动物繁衍种族的生
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- 毒理学