1例遗传性MYH9相关疾病家系老年白内障患者临床和基因突变特点.docx
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1例遗传性MYH9相关疾病家系老年白内障患者临床和基因突变特点
1例遗传性MYH9相关疾病家系老年白内障患者临床和基因突变特点
张淑芳张应爱王顺兰邓湘东肖敬川余平
【摘要】目的了解海南省MYH9相关疾病家系1例老年白内障患者的临床表现和MYH9基因突变特点。
方式对该患者进行临床体征评估和实验室检测;应用光学和电子显微镜进行外周血细胞形态和超微结构分析;对MYH9基因的40个外显子和侧翼区进行PCR扩增和测序,确认突变类型。
结果通过临床表现和实验室检测,该患者具有典型的庞大血小板、血小板减少和粒细胞内包涵体三联症,且表型复杂多样如伴有长期高脂血症、蛋白尿、肌酐升高、心功能不全、转氨酶升高、哮喘、鼻炎等多种疾病;MYH9基因40个外显子和侧翼区未见致病突变(除25号外显子发生一同义突变,突变类型为A1143A)。
结论该老年白内障患者MYH9基因未见致病性突变,其具有的严峻临床表型可能与存在新的基因突变类型或新的致病基因有关。
【关键词】MYH9相关疾病;老年白内障;临床表型;基因突变
【Abstract】ObjectiveTocharacterizetheclinicalphenotypesandidentifythemutationsofthenonmusclemyosinheavychaintypeⅡA(NMMHCⅡA)geneofthecataractwithMYH9relateddisease(MYH9RD)inAscreenwasmadeforthepresenceorabsenceofabnormalhemostasis;Techniqueoflightandelectronmicroscopewasappliedtoanalyzethecellmorphologyandultrastructureofperipheralblood;PCRwasusedtoamplifyallthe40exonsandfrankingregionsoftheMYH9gene,andtheamplifiedexonDNAwassubjectedtosequenceThepresenilecataractnotonlyhadthrombocytopenia,giantplateletsandinclusionbodiesingranulocytes,butalsosufferedfromhyperlipemia,proteinuria,abnormalhepaticfunction,serumcreatininerising,asthmaanddisorderedactionofheartetc;NopathogenicmutationwasdetectedintheexonandfrankingregionsofMYH9geneexceptasynonymousmutation(A1143A)intheexonThepresenilecataractwithseriousclinicalentitiesmayberesultedfromanovelmutationoranothernovelpathogenicgenewithMYH9RD.
【Keywords】MYH9relateddisease;Presenilecataract;Clinicalphenotypes;Mutationdection
非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病(nonmusclemyosinheavychain9relateddisease,MYH9relateddisease,MYH9RD)是指一组由MYH9基因突变而引发的常染色体显性遗传性疾病,轻度至中度出血偏向是上述疾病患者最多见的病症和就医缘故,部份病例还表现为一系列类似于Aport综合征(APS)的病症〔1〕。
既往研究显示该病是由人类第22对染色体上的MYH9基因突变所致〔2,3〕,但也有研究显示此病存在较大的遗传异质性,MYH9基因可能不是该病的唯一致病基因〔4,5〕。
本文拟将1例由MYH9RD致使的老年白内障患者的临床特点及基因检测结果汇报如下。
1对象与方式
对象
患者,女,62岁。
自8岁起皮肤黏膜常常有出血点,多次检测(手工法)血小板为43×1012~73×1012L-1,确诊为MYH9相关疾病。
多次检查还发觉该患者具有高脂血症(总胆固醇~mmol/L,正常:
~mmol/L;甘油三酯~mmol/L,正常:
~mmol/L)、转氨酶中度升高(58~160IU/L)、贫血(血红蛋白95~110g/L),蛋白尿(+~,正常:
阴性)、血肌酐升高(179~225μmol/L之间,正常:
44~133μmol/L)等现象;此患者共孕育5个子女(前夫3个与此刻丈夫2个)均为MYH9RD患者。
另外,还常常有哮喘、鼻炎、心动过速、心律不齐等病症。
5年前显现视物模糊并伴视力慢慢下降,怕光、看物体颜色较暗,有时看物体变形。
到医院检查发觉白内障混浊位于晶状体中央,现视力愈来愈差,光感愈来愈弱,近视度数不断加深,需要频繁改换眼镜;常常发觉眼前有固定性黑影或视物发暗。
MYH9基因突变检测与分析
①总DNA提取:
签定知情同意书后,抽取家系成员外周血,以天为时期血液DNA制备试剂盒提取白细胞基因组DNA,80℃保留备用;②40个外显子引物设计和合成:
依照GenebankMYH9基因组全长序列设计引物,由上海生工生物技术合成;③PCR反映体系:
变性95℃30s,退火55℃30s,延伸72℃45s,设置31个循环;④%琼脂糖凝胶电泳后,切胶回收,利用Invitrogen凝胶回收试剂盒回收目的片段;⑤目的片段送往广州Invitrogen公司测序,结合图谱分析结果。
超微结构检测
取患者假设干及正常对照静脉血5ml,依照常规方式然用%戊二醛和%锇酸双固定细胞。
丙酮梯度脱水后用Epon812包埋,LEICAUCT型超薄切片机(德国莱卡公司生产)超薄切片,然后用醋酸铀和枸橼酸铅双染色,JEM1230型透射电镜(日本电子公司)观看和分析血小板和粒细胞包涵体的超微结构特点。
2结果
临床表现和实验室检测及形态学结果
多次血常规和外周血涂片检查发觉具有典型的庞大血小板、血小板减少和中性粒细胞包涵体三联症。
电镜下观看血小板及中性粒细胞包涵体超微结构可见庞大血小板结构,大量空泡结构和明显的线粒体肿胀及中性粒细胞包涵体(图1)。
MYH9基因检测结果
将测定的40个外显子的结果与Genebank对应的外显子序列通过DNAMAN软件分析各测定序列与正常人MYH9基因的不同,40个外显子及侧翼区测序结果未见突变,只有25号外显子有一同义突变。
25号外显子的第157位点、在全长CDS的第3429位的核苷酸发生了突变,由T转变成G(T3429C)(图2)。
密码子由GCT转变成GCG,但由于密码子的简并性,在蛋白质一级结构上,对应第1143A位的丙氨酸(Ala,A)没有改变,为同义突变(无义突变)。
琼脂糖电泳结果
该白内障患者25号外显子可见一310bp条带,见图3。
3讨论
MYH9RD包括MayHegglin异样(MayHegglinanomaly,MHA)、Fechtner综合征(Fechtnersyndrome,FTNS)、Epstein综合征(Epsteinsyndrome,EPS)和Sebastian综合征(Sebastiansyndrome,SBS)等类似于庞大血小板综合征(AlportlikeSyndrome,APSM)的临床表现,轻度至中度出血偏向是上述疾病患者最多见的病症和就医缘故,可表现为牙龈出血,鼻出血,皮肤淤点、淤斑或月经期延长等病症〔1〕。
MYH9RD4种综合征彼此之间也存在着紧密联系,类似一种疾病的不同进展时期,从起初轻微的具内涵物的庞大血小板症乃至慢慢进展成为听力障碍、白内障和肾功能损伤等一系列更为严峻的临床表现〔6,7〕,临床和实验室特点比较说明:
4种综合征均有庞大血小板和血小板减少症;除EPS外,均有粒细胞包涵体;FINS和EPS常伴有神经性耳聋和肾损害;仅FINS伴有白内障。
由本实验结果可知:
本家系白内障患者具有典型的庞大血小板、血小板减少和粒细胞内包涵体三联症,且伴有高脂血症、蛋白尿和肌酐升高、心功能不全、转氨酶升高、哮喘、鼻炎等多种疾病;本家系白内障患者不仅具有MYH9RD4种综合征临床表现,而且表型复杂多样,尤其是长期伴有蛋白尿和肌酐升高,极有可能会进展成肾损伤。
另外,从实验结果还得知:
此MYH9RD家系白内障患者MYH9基因的40个外显子和侧翼区未见致病突变(除25号外显子发生一同义突变,突变类型为A1143A),不同于目前国内外报导的情形。
目前,国内外关于MYH9相关疾病基因突变类型的研究发觉,大多为错义突变阻碍了MYH9基因编码蛋白NMMHCⅡA蛋白的头部或卷曲状结构域,从而阻碍蛋白的功能〔8,9〕。
最近几年来,有关MYH9RD基因型与表型关系的研究接踵被报导,有学者研究发觉:
不仅同一突变可引发不同的疾病,而且,临床诊断相同的不同家系也可有不同的突变位点和方式,即便具有相同的突变位点或方式,上述MYH9相关疾病的临床表现往往不同也会专门大;可是这些突变是如何引发、进展、从而最终形成不同表现型的MYH9相关失调症异样的分子机制目前仍不清楚,有待进一步研究〔1,7〕。
另外,少数临床上诊断为上述疾病的家系不存在MYH9基因突变。
提示这一类疾病存在遗传异质性,MYH9基因型可能不是该病的唯一致病基因,提示MYH9RD存在其他致病基因〔1,4〕有待发觉。
本家系是不是属于这种类型,有待于深切研究。
目前,国内外已发觉的MYH9RD基因突变致使白内障的方式要紧为点突变,其突变位点和突变类型均发生在MYH9基因的11个外显子中〔9〕。
已报导的MYH9RD的突变类型有30多种,要紧为MHA表型,即为38号外显子突变,突变类型为E1841K,这一突变是国外已报导的家系MYH9基因突变中较常见的一种类型〔6,10,11〕。
目前还没见有MYH9RD家系MYH9基因未发生致病性突变而致使白内障的报导。
该白内障患者临床表型的复杂多样是不是与此有关,仍是偶然同时发病,有待深切研究。
另外,由于本白内障患者临床表型复杂多样,尤其是长期伴有蛋白尿和肌酐升高,极有可能会发生肾损伤,咱们会长期随诊,按期复查来紧密关注是不是会进展成为肾损伤。
致谢:
本文在透镜方面取得海南省人民医院电镜室谢瑤云教师的帮忙和指导,在此致以衷心的感激。
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