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组织化学
组织与细胞化学
一、填空题:
体视学里是主要的填空题。
二、名词解释
1、异染现象
染料离子以某种方式使它对所吸收的波长有所改变,因而观察到被染的组织显示与该染料本身颜色不一样,此现象为异染现象。
2、诱发荧光和自发荧光
诱发荧光:
自发荧光:
由于紫外线的照射,标本中的荧光物质吸收光能后,呈现出不同颜色的荧光,这是自发荧光。
3、原位杂交组织化学和免疫组织化学
原位杂交组织化学(Insituhybridizationhistochemistry,ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统通过组织化学或免疫组织化学在核酸原有的位置进行细胞内定位。
免疫组织化学(immunohistochemistry):
将化学反应中呈色反应与免疫学抗原抗体反应结合起来,用标记的特异性抗体(或抗原)对细胞及组织内抗原(或抗体)的分布进行组织或细胞内原位检测的一门技术。
4、点计数(P116)
估计面积和面积分数的方法,称为点计数。
5、形态计量术
形态计量术(morphometry)是运用数学和统计学原理对组织和细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的相对值与绝对值的测量,其中以研究组织和细胞内某种结构的三维立体结构的研究称体视学(sterology)。
6、DAB系统
7、各向同性和各向异性
指物体的物理、化学等方面的性质不会因方向的不同而有所变化的特性,即某一物体在不同的方向所测得的性能数值完全相同。
材料在各方向的力学和物理性能呈现差异的特性。
8、饲养细胞
在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feedercell)。
9、完全抗原、半抗原和不完全抗原
完全抗原:
兼有免疫原性和反应原性的物质称完全抗原。
大多数蛋白质是良好的完全抗原。
半抗原:
只有反应原性而无免疫原性的物质称半抗原或不完全抗原,绝大多数低分子量的多糖和所有的类脂均属半抗原。
10、抗体的效价(滴度)
指抗体在保持其最佳特异性染色,并且具备最小背景条件下的最高稀释倍数。
11、灰度(greylevel)(p113)
12、交叉点计数(p118)
13、特征物
特征物就是要定量研究的形态结构,即感兴趣的某种组织结构,它具有一定的形态和分界,在肉眼或显微镜下可以识别或分辨。
14、等距抽样、随机抽样和盲点抽样
等距抽样:
它是首先将总体中各单位按一定顺序排列,根据样本容量要求确定抽选间隔,然后随机确定起点,每隔一定的间隔抽取一个单位的一种抽样方式。
是纯随机抽样的变种。
在系统抽样中,先将总体从1~N相继编号,并计算抽样距离K=N/n。
式中N为总体单位总数,n为样本容量。
然后在1~K中抽一随机数k1,作为样本的第一个单位,接着取k1+K,k1+2K……,直至抽够n个单位为止。
随机抽样:
按照随机的原则,即保证总体中每个单位都有同等机会被抽中的原则抽取样本的方法。
盲点抽样:
(p108)
15、OD值
OD是opticaldensity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,是检测方法里的专有名词,检测单位用OD值表示,OD=lg(1/trans),其中trans为检测物的透光值。
光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
三、问答题
1、试述荧光显微镜的原理,结构以及生物学上的应用。
答:
是用以观察细胞及组织内荧光物质的分布。
荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。
它是装有、能产生紫外线(短波长)的光源及系列滤片装置的显微镜。
由于紫外线的照射,标本中的荧光物质吸收光能后,呈现出不同颜色的荧光,这是自发荧光,如维生素A呈绿色荧光、心肌细胞内脂褐素呈棕黄色~金黄色荧光。
但是,细胞内的某些成分只有与荧光素结合后,在紫外线的激发下,才可呈现一定颜色的荧光;如应吖啶橙(荧光素)处理细胞后,细胞核内的DNA呈绿~黄绿色荧光,细胞质及核仁内的RNA呈桔黄~桔红色荧光。
利用荧光染色法及荧光显微镜可以观察组织、细胞的结构、细胞内某些成分含量的变化,并探讨细胞的功能状态。
或用荧光素标记免疫球蛋白,进行免疫荧光细胞化学研究。
2、如何进行抗原修复,方法有哪些?
(酶法、热修复······)
答:
免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露。
组织经甲醛固定,甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联,使抗原决定簇被掩盖,从而影响对蛋白表达的检测。
要充分暴露抗原决定簇,通常用到抗原修复。
加热抗原修复法酶消化法
高压加热修复法
①切片脱蜡至水;
②0.3%H2O2甲醇处理切片10min;
③蒸馏水洗;
④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)中,连同容器放入高压锅中加热至沸腾。
盖上压力阀至喷汽后持续1-4min;
⑤待修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。
电炉加热修复法
①切片脱蜡至水;
②0.3%H2O2甲醇处理切片10min;
③蒸馏水洗;
④将切片放入抗原修复液中于电炉上加热,不时用温度计测量温度,当达92℃后,即可拔离电源,当温度低于92℃时,再插上电源,如此反复持续至10min左右;
⑤待抗原修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。
微波修复法
①切片脱蜡至水;
②0.3%H2O2甲醇处理10min;
③蒸馏水洗;
④0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH6.0),于微波炉内微波辐射10min;
⑤待修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色
胃蛋白酶消化法
①切片脱蜡至水;
②0.3%H2O2甲醇处理切片10min;
③蒸馏水洗;
④PBS洗3次;
⑤滴上配制好或商品化的胃蛋白酶,处理切片20min左右;
⑥PBS冲洗3次;
⑦按选择好的免疫组化该法进行染色。
胰蛋白酶消化法
①切片脱蜡至水;
②0.3%H2O2甲醇处理切片10min;
③蒸馏水洗;
④PBS洗3次;
⑤滴上自配的或商品化的胰蛋白酶,处理切片20min左右;
⑥PBS洗3次;
⑦按选好的免疫组化染色方法进行染色。
注意事项:
1)、抗体的保存
浓缩抗体:
有效期内,只需放在4℃冰箱内,保存时间可达1-3年。
即用型抗体:
理论上在4℃冰箱内可保存半年左右。
PBS或抗体稀释液稀释的抗体:
一般只可放置1-2个月。
2)、出现假阳性的原因
组织切片质量不佳,造成假象,如刀痕裂缝边缘的组织着色过深,不能作为判断阳性的依据。
出血和坏死:
红细胞的内源性过氧化物酶,坏死细胞释放的内源性过氧化物酶均可出现假阳性反应。
抗体的交叉反应。
3)、出现假阴性的原因
•固定时间过长,浸蜡、烤片温度过高,导致抗原丢失,无法补救。
•固定液不合适或浓度不对,导致固定不佳。
最好使用10%中性福尔马林。
•抗体浓度过低。
•孵育时间太短,或孵育温度太低。
•缓冲液pH值不正确。
4)、必须严格设置阳性对照和阴性对照。
5)、DAB有致癌性,用后不应随处倒弃。
3、酶组织化学方法通常有哪些?
在酶组织化学中应注意哪些事项?
答:
1)、金属-金属盐显示法
酶作用于底物时,其分解产物与底物混合液中某种物质结合,沉着在作用部位。
然后结合物被金属置换,通过金属显色来证明酶的存在。
或者,酶作用于底物后生成的分解产物,与底物孵育液中的金属离子相结合,直接沉着于酶反应部位,使其显色。
方法Ⅰ:
钙-钴法
方法Ⅱ:
铅法
2)、偶联偶氮色素法
同时偶联法:
该法是孵育液中的底物在酶作用下产生分解产物,后者立即与重氮盐结合(偶联偶氮反应),形成不溶性偶氮色素而显色。
后偶联法:
该法是为了防止重氮盐对酶的抑制作用,而先使酶作用于底物,使其分解产生反应物沉淀,然后将其浸渍于重氮盐溶液中,使其形成偶氮色素而显色。
3)、色素形成法
四唑盐法:
主要用于显示脱氢酶。
底物中含有四唑盐或双四唑盐。
在脱氢酶的作用下,底物释出氢原子,并与四唑盐或双四唑盐形成红色或蓝色的甲(càn)或二甲色素。
酶组织化学注意事项:
1)、选择最适温度、pH值及缓冲液
2)、为保持酶活性,最好使用冰冻切片,固定时间不能过长
3)、有些物质能提高或抑制酶的活性,故要选择合适的捕捉剂
4)、进行对照实验:
用酶的抑制剂、用去底物的孵育液、用已确定含该酶的组织细胞进行对照
4、举例说明细胞色素氧化酶的原理。
答:
细胞色素氧化酶(CCO):
线粒体标志酶
5、什么叫多克隆抗体和单克隆抗体?
对它们的优缺点进行比较。
答:
抗体:
浆细胞合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白(immunoglobulin,Ig)
多克隆抗体:
(polyclonalantibody,PcAb)
大多数天然抗原物质往往具有多种不同的抗原决定簇,而每一决定簇都可刺激机体产生一种特异性抗体。
多克隆抗体是多个抗原决定簇刺激机体后,由多个免疫淋巴细胞分泌的多种抗体的混合物。
PcAb特异性差,易出现交叉反应。
单克隆抗体:
(monoclonalantibody,McAb)
由单一克隆B细胞杂交骨髓瘤细胞产生的,只识别一种抗原表位的具有高度特异性的抗体。
制备单一表位特异性抗体的理想方法是获得针对单一表位的浆细胞克隆,使其在体外扩增并分泌抗体。
但浆细胞在体外的寿命较短,也难以培养。
于是,将可产生特异性抗体但短寿的浆细胞与无抗原特异性但长寿的恶性浆细胞瘤细胞融合,建立了可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞和单克隆抗体技术。
优点:
结构均一、纯度高、特异性强、效价高、易大量制备。
比较:
单抗特异性高,而且一旦制备成功就可以永续生产完全一致的抗体。
多克隆抗体在特异性方面无法与单抗相比拟,而且即便是用相同抗原制备的不同批次的多抗也不能保证其一致性,因而多抗在特异性、一致性方面有很大局限。
但多抗有制备时间短、首次制备成本低的特点,在一些情况下也是一种选择。
6、免疫酶技术常用作标记酶的有哪些及其优缺点。
答:
免疫酶技术
抗原抗体免疫结合反应+酶组织化学反应
常用作标记物的酶有:
辣根过氧化物酶(HRP)
碱性磷酸酶(AP)
葡萄糖氧化酶
半乳糖苷酶
辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)
H2O2和DAB(diaminobenzidine,二氨基联苯胺)为其常用底物,产物为稳定的棕黄色沉淀。
四甲基联苯胺(TMB)经HRP作用后共产物显蓝色,目视对比鲜明。
TMB性质较稳定,可配成溶液试剂,只需与H2O2溶液混和即成应用液,可直接作底物使用。
另外,TMB又有无致癌性等优点,因此在ELISA中应用日趋广泛。
酶反应用HCL或H2SO4终止后,TMB产物由蓝色呈黄色,可在比色计中定量,最适吸收波长为405nm。
碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)
BCIP(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate,5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐)和NBT(Nitro-Blue-Tetrazolium,四唑氮蓝)是AP的常用底物组合。
BCIP被AP水解成一种蓝色的中间物,后者然后被NBT氧化形成二聚体(不溶性紫蓝色沉淀)。
7、根据免疫组化的相关理论,试述如何对免疫组织化学结果进行判断和分析。
答:
免疫组织化学的免疫学依据
免疫组织化学的基本原理:
利用免疫学中抗原与抗体特异性结合的特点以及组织化学的原理,在组织或细胞标本中加入特定的标记抗体,然后对标记物进行显示,从而对组织或细胞内的抗原物质进行定性、定位或定量研究。
免疫组化结果的判断:
●免疫组化的呈色深浅可反映抗原存在的数量,可作为定性、定位和定量的依据。
阳性反应的染色特征:
●阳性反应染色分布有四种类型:
细胞间质、胞浆、细胞核、细胞膜表面。
● 阳性细胞分布呈灶性和弥漫性。
●由于细胞内含抗原量不同,所以染色强度不一。
如果细胞之间染色强度相同,常提示其反应为非特异性。
●阳性细胞染色定位于单个细胞,且与阴性细胞相互交杂分布;而非特异性染色常不限于单个细胞,而是累及一片细胞。
●切片边缘、刀痕或皱褶区域,坏死或挤压的细胞区,常表现为相同的阳性染色强度,不能用于判断阳性。
假阳性及其处理:
●所用的抗体与其它无关的抗原有交叉反应,特异性差,特别是使用多克隆抗血清时较易出现;
●组织细胞内含有DAB沉淀相类似的色素。
●假过氧化物酶活性:
组织中存在红细胞时,即不加过氧化物酶,也可出现阳性结果。
●内源性过氧化物酶活性:
过氧化物酶体等存在过氧化物酶,能够与H2O2~DAB反应,导致假阳性。
●游离醛基:
用小分子赖氨酸、白蛋白等预先孵育切片,可封闭之。
●疏水键和离子键:
用正常羊血清于第一抗体前孵育切片可消除之。
▪天然抗体及不纯抗体:
增加第一抗体的稀释度,可以降低上述抗体的非特异性染色。
非特异性染色特征:
●组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称非特异性背景染色。
●常出现在切片边缘、刀痕或皱褶区域,坏死或挤压的细胞区,表现为无一定的分布规律,常呈现某一部位成片的均匀着色。
免疫组化染色结果的定量分析:
●计算机图像分析
8、在体视学技术中,抽样设计应注意哪些事项?
(p110)
9、细胞凋亡的检测方法和原理,细胞凋亡研究在免疫学中有哪些重要意义。
(P142、158)
答:
细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。
细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
检测方法:
一、细胞凋亡的形态学检测
1光学显微镜和倒置显微镜
(1)未染色细胞:
凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
(2)染色细胞:
常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。
凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割
成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
2荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。
常用的DNA特异性染料有:
HO33342(Hoechst33342),HO33258(Hoechst33258),DAPI。
三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。
紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释,终浓度为10ug/ml。
DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。
储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为10ug/ml。
结果评判:
细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:
Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1)。
3透射电子显微镜观察
结果评判:
凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。
凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。
意义:
细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象,是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施。
在胚胎发育阶段通过细胞凋亡清除多余的和已完成使命的细胞,保证了胚胎的正常发育;在成年阶段通过细胞凋亡清除衰老和病变的细胞,保证了机体的健康。
和细胞增殖一样细胞凋亡也是受基因调控的精确过程。
10、设计实验方案,如何确定细胞内蛋白质的分布。
四、简答题
1、组织化学技术的基本要求。
答:
1)、保持组织和细胞的良好形态结构,保持组织和细胞生前的化学成分和酶的活性
2)、反应产物不被溶解、不易位、不弥散,保证反应产物的精确定位
3)、反应产物具有可视性,反应产物的颜色深度与相应物质含量或酶的活性具有一定的量效关系
4)、所用组织化学方法必须具备一定的特异性(仅与某种化学成分发生反应)和灵敏性(能够显示微量的物质)
5)、方法稳定并能重复
6)、设置必要的对照实验
2、免疫组织化学技术包括哪些?
免疫组织化学技术包括:
一、免疫荧光技术
将荧光作为标记物的免疫组织化学技术。
当某种常温物质经某种波长的入射光(激发光,通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退激发并发出比入射光的波长长的出射光(发射光,通常波长在可见光波段);而且一旦停止入射光,发光现象也随之立即消失。
具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
免疫荧光双标记法的应用:
1.将两种抗体分别用不同的荧光素加以标记,用来显示含有不同成分的两种细胞在同一区域的定位模式
2.将两种抗体分别用不同的荧光素加以标记,用来定位同一细胞内存在的两种不同成分
荧光显微镜:
荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。
透射式:
低倍镜时荧光强,随放大倍数增加其荧光减弱
落射式:
视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大荧光愈强
二、免疫酶技术
抗原抗体免疫结合反应+酶组织化学反应
常用作标记物的酶有:
辣根过氧化物酶(HRP)
碱性磷酸酶(AP)
葡萄糖氧化酶
半乳糖苷酶
辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)
•H2O2和DAB(diaminobenzidine,二氨基联苯胺)为其常用底物,产物为稳定的棕黄色沉淀
四甲基联苯胺(TMB)经HRP作用后共产物显蓝色,目视对比鲜明。
TMB性质较稳定,可配成溶液试剂,只需与H2O2溶液混和即成应用液,可直接作底物使用。
另外,TMB又有无致癌性等优点,因此在ELISA中应用日趋广泛。
酶反应用HCL或H2SO4终止后,TMB产物由蓝色呈黄色,可在比色计中定量,最适吸收波长为405nm。
碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)
BCIP(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate,5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐)和NBT(Nitro-Blue-Tetrazolium,四唑氮蓝)是AP的常用底物组合。
BCIP被AP水解成一种蓝色的中间物,后者然后被NBT氧化形成二聚体(不溶性紫蓝色沉淀)。
三、亲合素-生物素技术
亲合素(avidin)也称卵白素,一种糖蛋白
生物素(biotin)即维生素H
过氧化物酶(HRP)
生物素与亲合素有很高的亲和力
一个亲合素分子上有四个生物素结合位点
1)、标记亲合素–生物素法(LAB法)
(一)直接法
(二)间接法
2)、桥连亲合素–生物素法(BAB法)
(一)直接法
(二)间接法
3)、亲合素–生物素–过氧化物酶复合物法(ABC法)
亲合素作为“桥”将生物素化的抗体与生物素结合的酶连接起来,使抗原与抗体反应信号放大,以增强敏感性
4)、链霉亲合素–生物素–过氧化物酶复物(SABC)法
此法为上述ABC法的改良,是用链霉亲合素
(streptavidin)代替ABC法中的亲合素(avidin)
亲合素是糖蛋白,含有约7%的糖类,可与组织中含糖基的物质起反应,造成背景着色。
链霉亲合素为蛋白质,非糖蛋白,不与其它分子结合,可降低背景。
5)、链霉亲合素-过氧化物酶(streptavidinperoxidase,S-P)技术
四、免疫胶体金技术
胶体金的制备:
还原剂
氯金酸(HAuCl4或AuCl3·HCl)————→胶体金
免疫胶体金染色法
(一)直接法
(二)间接法
蛋白A胶体金染色法
(一)直接法
胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。
金黄色葡萄球菌蛋白A具有与多种生物IgG的Fc段结合的能力,被广泛应用于抗体的分离与检测。
(二)间接法
胶体金双标记法
(一)直接法
(二)间接法
免疫组织化学技术的基本要求:
1、有高度特异性;
2、有高度敏感性;
3、不引起受检物质的移位和丢失;
4、不影响抗原和抗体的免疫活性;
5、不损伤组织和细胞的本来结构;
6、免疫结合物借标记物明显可见
3、在荧光标记抗体的标记当中,它的主要作用是消除非特异性荧光(降低····交叉····),它的方法和步骤有哪些?
组织化学:
应用化学或物理反应原理,通过显示组织或细胞内的化学成分或酶活性而对其进行定性、定位和定量研究.
☆尽量保持组织的原有结构和化学组成
☆组织原位
☆借助显微镜
组织化学:
研究组织细胞内的化学组成及其含量、酶的存在及其活性
组织学:
研究组织细胞的形态结构及其与功能的关系
生物化学:
通常将组织和细胞破坏,制成匀浆进行化学测定(不考虑定位)
几种酶的反应原理
碱性磷酸酶
酸性磷酸酶
三磷酸腺苷酶
乙酰胆碱酯酶
细胞色素氧化酶
一氧化氮合酶
显示方法
Ø 金属沉淀法:
利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀,借以辨认所检查的物质或酶活性。
如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀,而显示出酶活性。
Ø偶氮偶联法:
酚类化合物与偶氮染料结合后可以形成耐晒染料。
ØSchiff反应:
细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。
这种反应通常用于显示糖和脱氧核糖核酸(Feulgen反应)。
Ø联苯胺反应:
过氧化物酶分解H202。
产生新生氧,后者再将无色的联苯胺氧化成联苯胺蓝,进而变成棕色化合物。
Ø普鲁士蓝反应:
三价铁与酸性亚铁氰化钾作用,形成普鲁士蓝。
ØFormazane反应:
显示脱氢酶。
Ø“Nadi”反应:
显示细胞色素氧化酶。
Ø脂溶染色法:
借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。
Ø茚三酮反应:
显示蛋白质。
1. 抗体的分类
目前,根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。
多克隆抗体(第一代抗体)
将一种天然抗原经各种途径免疫动物,由于抗原性物质具有多种决定簇,故可刺激产生多种抗体形成细胞克隆,合成和分泌抗各种决定簇的抗体分泌到血清中,故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物,称这种用体内免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体(多数抗血清系由家兔制得)。
单克隆抗体(第二代抗体)
由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体,称为单克隆抗体,具有特异性强、纯度高的特点。
应用杂交瘤技术可获得几乎所有抗原的单克隆抗体(多数单克隆抗体由小鼠制备)。
基因工程抗体(第三代抗体)
将对基因结构与功能的了解与DNA重组技术相结合,根据研究者的意图在基因水平对分子进行切割、拼接或修饰,甚至是人工全合成后导入受体细胞表达,产生新型抗体。
2.抗体的特性
包括亲和力、专一性和交叉性、抗体效价、抗体的稳定性四大特
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