王卫东版细胞生物学实验指导修改.docx
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王卫东版细胞生物学实验指导修改
王卫东_2008版细胞生物学实验指导(修改)
实验一:
细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察
【基本原理】
细胞膜表面的有分支状糖外被,细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应、肿瘤的发生等都和细胞表面的分支状糖分子有关。
凝集素(lectin)是一类含糖并能与糖分子专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞表面间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。
可选择性地让某些物质进出细胞,各种物质出入细胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶剂,水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散,以至于在高渗环境中,动物细胞会失水而收缩;在低渗环境中,动物细胞会吸水膨胀直至破裂。
本实验将红细胞分别放于各种等渗溶液中,由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同,使得不同溶质透入细胞的速度相差很大,有些溶质甚至不能透入细胞。
当溶质分子进入细胞后可引起渗透压升高,水分子随即进入细胞,使细胞膨胀,当膨胀到一定程度时,红细胞膜会发生破裂,血红素溢出,此时,原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为红细胞溶血。
由于各种溶质进入细胞的速度不同,所以不同的溶质诱导红细胞溶血的时间不同,相反可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。
【实验用品】
1.材料:
土豆块茎,鸡(采血)
2.器材和仪器:
显微镜、载片、盖片、天平、滴管、小烧杯、移液管、离心管、试管和试管架
3.试剂:
0.85%生理盐水、2%鸡红细胞、PBS缓冲液、Alsever溶液、0.17M氯化钠、0.17M氯化铵、0.17M醋酸胺、0.17M硝酸钠、0.17M草酸铵、0.17M硫酸钠、0.17M葡萄糖、0.17M甘油、0.17M乙醇、0.17M丙酮
【方法步骤】
1.制备土豆凝集素液和红细胞悬浮液,制备无血清的鸡红细胞悬液,使凝集素液和红细胞悬液混合,静置后,在光镜(低倍)下观察凝集素使红细胞凝集的现象。
(以PBS缓冲液加2%血细胞作对照实验)
2.观察10%的鸡红细胞悬液,可见该悬液为一种不透明的红色液体
3.观察溶血现象取一支试管,加入0.4ml鸡红细胞悬液,再加入4ml蒸馏水,混匀后注意观察溶液颜色的变化,可见溶液由不透明的红色变成透明的红色液体(可将试管贴靠在书上,隔着试管看书中的字,如发现溶血则文字可被看清)。
4.观察鸡红细胞对不同物质的通透性
(1)取一支试管,加入0.4ml鸡红细胞悬液和0.17M的Nacl溶液4ml,轻轻摇匀,用上述方法观察是否
出现溶血现象,如出现溶血,记下发生溶血所需要的时间(从加入4ml溶液算起)
(2)按上述方法分别加入下列6中溶液是否导致红细胞溶血并记录实验结果。
①0.17M氯化铵④0.17M醋酸胺
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②0.17M硝酸钠⑤0.17M草酸铵③0.17M硫酸钠⑥0.17M葡萄糖⑦0.17M甘油⑧0.17M乙醇⑨0.17M丙酮
【实验结果】
1.土豆凝集素能使鸡红细胞凝集,PBS对照液中红细胞分散均匀
对照组:
未凝血
2.细胞膜渗透性实验结果比较和分析
实验组:
凝血
【实验报告】
1.简图表示凝集素使血细胞凝集原理
2.怎样根据细胞膜渗透性实验结果分析确定物质进入细胞的速度?
物质进入细胞的快慢有什么规律?
实验二:
聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合
【基本原理】
两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下,两个细胞接触并不发生融合现象,因为各自存在完整的细胞膜,在特殊融合诱导物的作用下,两个细胞膜发生一定的变化,就可促进两个或多个细胞聚集,相接触的细胞膜之间融合,继之细胞质融合,形成一个大的融合细胞。
人工细胞融合开始于五十年代,六十年代到七十年代作为一门新兴的技术发展很快,应用范围极广。
细胞与组织不同,不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合,而且也能诱导动植
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湖北师范学院生命科学学院细胞生物学实验指导物细胞间产生融合。
因此,融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
细胞融合(Cellfusion),即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合,也能产生种间细胞的融合,因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域,如研究核质关系、绘制染色体基因图谱、制备单克隆抗体、育种等。
细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus),聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。
聚乙二醇(PEG)结构为:
HOH2C(CH2OCH2)nCH2OH,相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,从而使细胞发生融合。
【实验用品】
1.材料鸡红细胞
2.器材和仪器:
显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片
3.试剂Alsver液(pH7.4)、0.85%生理盐水、GKN液、50%PEG(MW4000)
【方法步骤】
1.采血及鸡红细胞悬液的制备(同教材57页)。
2.(共2组)取鸡红细胞悬液1mL,移人10mL离心管,加入4mL0.85%生理盐水混匀。
1000r/min离
心5min。
3.弃上清液(用吸管吸去),加0.85%生理盐水5mL,用指弹法(或吸管轻吹)将细胞团块弹散,混匀后
1000r/min离心5min;重复上述条件,再离心洗涤1次。
4.收集最后1次离心沉淀的血细胞,加入适量(5-8mL)的GKN液,轻吹散,混匀。
5.(每4人)取悬液1mL到1个试管中,加入0.5mL预热的50%PEG混匀,置于30℃水浴中温浴3-5min;
取未融合和融合的血细胞悬液各1滴分别滴于载玻片上的两侧,盖上盖玻片。
6.利用光学显微镜(高倍)以未融合细胞为对照观察2个靠近细胞形成融合的过程。
【结果观察】
在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起,形成一个同核体细胞。
要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。
【实验结果】
在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起,形成一个同核体细胞。
要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。
【实验报告】
l.在显微镜下按顺序绘制所观察到的细胞融合各阶段,并注明主要特点。
2.什么是同核体、异核体?
细胞融合主要有哪几种方法?
简述细胞融合的应用。
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实验四:
线粒体和液泡系的超活染色与观察
【基本原理】
线粒体是细胞内一种重要细胞器,细胞的各项活动所需要的能量,主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B(JanusgreenB)是线垃体的专一性活细胞染色剂,毒性很小,属于碱性染料,解离后带正电,由电性吸引堆积在线粒体膜上。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色,从而使线粒体显色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。
细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
中性红对液泡系的染色具有专一性,将活细胞中的液泡系染成红色。
【实验用品】
1.器材:
显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2.试剂:
Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1/3000中性红
3.材料:
人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦(或绿豆)幼根根尖
【方法步骤】
1.线粒体的超活染色与观察
1)口腔上皮细胞线粒体的超活染色:
1/5000詹纳斯绿B1-2滴,口腔上皮细胞(牙签刮取),载玻片于37℃
恒温染色10-15min,显微镜下观察。
2)洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察:
1/5000詹纳斯绿B溶液1-2滴,洋葱鳞茎内表皮,载
玻片于37℃恒温水浴染色10-15min,显微镜下观察。
2.小麦(或绿豆)幼根根尖液泡系的中性红染色观察
小麦(或绿豆)幼苗根尖(1-2cm)纵切面切片,1/3000中性红溶液1滴染色5-10min,载玻片于37℃恒温水浴,盖上盖玻片压扁根尖,显微镜下观察。
【实验结果】
口腔上皮细胞的线粒体分布
洋葱内表皮细胞线粒体分布植物根尖液泡的中性红染色
【实验报告】
1.绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。
2.绘出小麦幼根根尖组织液泡系的形态与分布并简要分析。
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实验五:
植物细胞微丝束的光学显微镜观察
【基本原理】
细胞骨架在通常情况下不稳定:
如低温、高压、饿酸处理等。
当用适当浓度的TritonX-100处理细胞时,能溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质,而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏显得更清晰,M-缓冲液洗涤细胞,可以提高细胞骨架的稳定性,戊二醛固定能较好地保存细胞骨架成分,经考马斯亮蓝R250染色后,可使细胞骨架蛋白着色,而胞质背景着色弱,有利细胞骨架纤维显示。
微丝、微管和中间纤维都是直径很小的结构,最大的单根微管才25nm左右,只能在电镜下才能观察到。
目前研究细胞骨架的主要方法是应用高压电镜或免疫荧光显微镜技术。
本实验用普通光镜观察到细胞骨架,是因为骨架纤维成束分布、结构经染色后,有夸大作用。
由于细胞经TritonX-100抽提后剩下的主要是细胞骨架成分,使得显现更清晰。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构,按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1%TritonX-100处理细胞,可使细胞膜溶解,而细胞骨架系统的蛋白质被保存,再用考马斯亮兰R250染色,使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
【实验用品】
1.材料:
新鲜洋葱鳞茎
2.试剂
1)M缓冲液(pH7.2)各成分终浓度为:
50mmol/L咪唑(MW:
68.08);50mmol/LKCl(MW:
74.55);0.5mmol/LMgCl2?
6H2O(MW:
203.30);1mmol/LEGTA(MW:
380.36);0.1mmol/LEDTA-Na2(MW:
372.24);1mmol/LDTT(MW:
154.3)
2)6mmol/LPBS磷酸缓冲液(pH6.5):
KH2PO4:
Na2HPO4.2H2O=7:
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3)0.7%NaCl生理盐水
4)1%TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于M-缓冲液
5)3%戊二醛100mL:
25%戊二醛取12mL,PBS88mL
6)0.2%考马斯亮蓝R250染液200mL:
考马斯亮蓝R2500.2g;甲醇46.5mL;冰乙酸7mL;水46.5mL
3.仪器:
光学显微镜,镊子,剪刀,试管,表面皿,滴管,载玻片,盖玻片
【方法步骤】
【实验结果】
洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较(放大倍数10×20)
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【实验报告】
1.光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征?
2.请设计一个实验鉴定你所观察到的细胞骨架是哪一类型。
附:
各种主要试剂的作用
1.TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)作用:
非离子去垢剂;适当浓度的TritonX-100,可使细胞膜溶解,
而细胞质中的细胞骨架系统可被保存
2.M-缓冲液和磷酸缓冲液作用:
维持细胞的渗透压
3.EDTA(乙二胺四乙酸)和EGTA(乙二醇双醚四乙酸)作用:
前者可螯合大部分金属离子;后者专一
性螯合Ca2+,主要是高浓度的Ca2+可是微管解聚,因此加入EGTA来降低Ca2+的浓度。
4.戊二醛作用:
良好的固定剂,使细胞结构保持它原有状态;
5.考马斯亮兰作用:
非专一性结合蛋白质,使蛋白着色(蓝色)
实验六:
叶绿体的分离与荧光观察
【基本原理】
细胞经过破碎后制成匀浆,在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。
利用细胞各组分质量大小、形状和密度的不同,选择不同的离心力和离心时间,即可分离得到所需要的细胞器或大分子组分。
几乎所有的植物组织中都有质体的存在。
叶绿体是研究最透彻的质体。
分离完整叶绿体有三个主要困难:
1)有细胞壁包裹。
破碎细胞的力量要能足以打破细胞壁的同时保持叶绿体的完整性。
2)叶绿体中由于淀粉积累成致密颗粒会在离心过程中使叶绿体破碎。
淀粉的积累可以通过自然植物在短光照时间和/或低光照强度的条件下生长而得以消除。
若有必要可以在匀浆前将植物放在黑暗中24-48hr以除去淀粉。
3)匀浆过程中,液泡中储藏的有毒物质会释放出来。
在有酚类化合物积累的物种中,可以通过在研磨缓冲液中加入可溶解的聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白(BSA)和巯基化合物来降低其有毒影响。
菠菜是分离完整叶绿体的极好材料,其细胞中所含的质体较大,而且它们都能在不积累淀粉和酚类物质的条件下生长。
菠菜的叶绿体/湿重比率较高。
叶绿体具有荧光现象,可利用荧光显微镜观察。
菠菜叶富含叶绿体,可采用徒手切片观察其形态和分布
叶绿体的分离在等渗溶液中进行(0.38mol/L甘露醇,4mmol/L—50mmol/LTris-HCl(pH8.0)),以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
用8层纱布除去组织残渣和一些未被破碎的完整细胞,然后在3000g条件下离心6min,即可获得沉淀的叶绿体。
离心技术可用于细胞器的分离。
分离的过程包括两个主要阶段:
破碎细胞和细胞成分的分离。
常用离心技术一般包括差速离心法和密度梯度离心法。
1)差速离心法
采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心,使沉降速度不同的颗粒在不同的分离速度和离心时间下分批分离的方法,称为差速离心法。
常用于从组织匀浆中分离各种细胞器。
2)密度梯度离心
当不同颗粒存在浮力密度差时,在离心力场下,在密度梯度介质中,颗粒或向下沉降,或向上浮起,一直移动到与它们各自的密度恰好相等的位置上形成区带,从而使不同浮力密度的物质得到分离。
密度梯度离心主要有两种类型,速率区带离心和等密度梯度离心。
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湖北师范学院生命科学学院细胞生物学实验指导等密度梯度离心一般常用CsCl、蔗糖、甘油等做介质。
介质梯度不需预先制备,离心时把密度均一的介质液和样品混合后装入离心管,通过离心形成梯度,让颗粒在梯度中进行再分配。
此法一般应用于物质的大小相近,而密度差异较大的核酸、亚细胞器和质粒等。
【实验用品】
1.材料:
菠菜
2.试剂:
蒸馏水,0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙
3.器材:
立式冰冻高速离心机、组织匀浆机、光学显微镜、荧光显微镜、天平、研钵、漏斗、50mL离心
管、纱布、载玻片、盖玻片等。
【方法步骤】
1.叶绿体的制备
1)选取新鲜的菠菜嫩叶,洗擦干后去除叶梗及粗脉,称3g于0.35mol/L氯化钠溶液15ml中置组织捣碎机或研钵中。
2)利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆,3~5min,或研磨成匀浆。
3)用6层纱布过滤,滤液盛于烧杯中。
4)取滤液4ml在1000r/min下离心2min,弃去沉淀。
5)将上清液在3000r/min下离心5min,弃去上清液,沉淀即为叶绿体(混有部分细胞核)。
6)沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
7)取叶绿体悬液1滴置于载玻片上,加盖玻片后用普通光学显微镜观察。
使用荧光显微镜观察(荧光显微镜使用方法)时,将叶绿体悬液滴在无荧光的载玻片上,再滴加1滴0.01%吖啶橙荧光染料,盖上无荧光的盖玻片后即可观察。
8)观察叶绿体的形态结构、叶绿体发射荧光的现象。
2.菠菜叶片徒手切片观察
用剃须刀将新鲜的嫩菠菜叶片削一个斜面至于载片上,滴加1-2滴0.35mol/LNaCl溶液,加盖片后轻压,置于显微镜下仔细观察。
观察三种细胞(细胞表皮细胞,保卫细胞,叶肉细胞)和叶绿体
【实验结果】
差速离心获得并纯化的叶绿体镜检为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。
菠菜叶片徒手切片可以观察到三种细胞分别是边缘呈锯齿形的鳞片状的表皮细胞,构成气孔的成对的肾形保卫细胞,排列成珊栏状的长形和椭圆形叶肉细胞。
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【实验报告】
1.绘图:
菠菜叶肉细胞的形态,示叶绿体。
2.观察经过加热和未加热这两种叶绿体在形态上的区别,并绘出草图。
实验八:
DNA的显示——Feulgen反应
【基本原理】
Feulgen反应(Feulgenreaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应,为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明,简称为Feulgen法。
因对DNA的显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。
自Feulgen等发明该显示DNA的Feulgen反应法以来,其作用机制也久经研究和讨论,现已取得一致意见。
其具体反应原理是,标本经稀盐酸水解后,DNA分子中的嘌呤碱基被解离,从而在核糖的一端出现了醛基。
Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应,形成含有醌基的化合物分子,因醌基为发色团,故可呈现出紫红色。
也就是说,DNA经稀酸水解后产生的醛基,具有还原作用,可与无色品红结合形成紫红色化合物,从而显示出DNA的分布。
其反应机制如下图所示。
2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3
【实验用品】
1.器材显微镜、立式染色缸、水浴锅
2.材料香柏油,擦镜纸,盖玻片,载玻片
3.试剂
1)schiff氏试剂将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中,时时摇动玻璃瓶,煮沸5min使之充分溶解,冷却至50℃时过滤,加入10ml1mol/LHCl,冷至25℃时,加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)无水亚硫酸钠(NaHSO3),在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天),使其颜色退至淡黄色,密封瓶口,藏于暗处,最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。
在使用前加入0.5g活性碳,摇1min,用粗滤纸过滤,滤液应为无色;若液体颜色变为粉红色,便不能再用。
2)亚硫酸水(洗涤剂):
用200ml普通自来水(不要用蒸馏水,以免引起误差)、10ml10%的偏重亚硫酸
钠水溶液和10ml1mol/LHCl,三者在使用前混合,现用现配。
3)1mol/LHCl(水解用):
取82.5ml比重为1.19的盐酸加蒸馏水1000ml即成(应将盐酸缓缓加入水中)。
【方法步骤】
【实验结果】
细胞核中的DNA呈鲜亮的紫红色反应,它不但反应出DNA存在的部位及其分布情况,而且还可从颜色反应的深浅,来判断DNA的相对含量。
细胞质被亮绿复染成绿色,核仁通常为负反应;但在有些材料的细胞质中,DNA也会出现阳性反应。
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【实验报告】
1.绘图表示Feulgen反应的染色结果。
2.总结Feulgen反应染色结果的影响因素。
附:
Feulgen方法应注意的几个问题:
1.对照切片的制做:
进行Feulgen反应时,一般要做一对照切片以便验证反应结果。
对照切片应不经水解
直接放在schiff剂内,且应为负反应。
但需要注意的是,对照切片在schiff试剂中最多不要超过1h(0.5h即可),时间过长,试剂本身的酸性也会使DNA水解,从而出现假的正反应。
2.固定剂的选择:
以前很多人认为,选用的固定剂不应含有醛基或含有氧化剂。
后来发现含醛基或氧化
剂的固定剂对反应的专一性并没有影响。
实践证明,一切好的组织学固定剂均适用于Feulgen反应。
如Bhampy固定剂、Helly固定剂、Flemming固定剂、OsO4固定剂、Carnoy固定剂、zenker固定剂和Bouin-Aller固定剂。
但在上述固定剂中,以OsO4和Carnoy效果较好,OsO4(1%或0.5%)是Feulgen反应的理想固定剂,只是因OsO4价钱较贵,故一般多采用Carnoy固定液。
在Feulgen反应中,不能单独使用Bouin定液,因为它是Feulgen反应的最坏固定剂,但经Aller改进后的Bouin-Aller固定液效果却较好。
3.水解时间:
Feulgen反应通常用稀酸进行水解,但水解的时间一定要适当。
如水解时间不够,反应就会
变弱;如水解时间过长。
或水解地过于剧烈,则脱氧核糖也易掉下来,反应也会减弱。
适当的水解时间一般为8~12min。
但是水解时间长短也要视标本的类型(如厚薄等)、固定剂的性质以及酸的浓度而定。
4.Schiff试剂的作用:
Feulgen反应成功与否的一个非常关键的因素,就是schiff试剂的质量。
有一大类
试剂均称为碱性品红,它们实际上是由几种产品分别组成的。
因此只能选用注明“DNA染色反应用”的碱性品红才行。
此外,Schiff试剂的配制方法也可影响DNA的染色反应。
实验十:
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
【基本原理】
细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式,在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能,是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。
巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成,当病原微生物或其他异物侵入机体时,巨噬细胞由于具有趋化性,便向异物处聚集,巨噬细胞可将之内吞入胞质,形成吞噬泡,然后在胞内与溶酶体融合,将异物消化分解。
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助,如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞,则可阻断吞噬泡的形成;免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
巨噬细胞起源于骨髓,经血液进入组织中而成,分布于全身各处。
当机体受到某些损伤因素时(如微生物或其它病原体或异物侵入),能招引巨噬细胞,同时巨噬细胞有趋化性,主动向病原体或异物游走,在接触到病原体或异物时,细胞膜凹陷伸出伪足包围异物,并发生胞吞作用形成吞噬泡,继而细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合,消化分解异物。
含台盼蓝的淀粉肉汤,可使腹腔中有较多的吞噬细胞,以供观察吞噬活动。
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【实验用品】
1.材料:
小白鼠、1%鸡红细胞悬液
2.试剂:
6%的淀粉肉汤(含台盼蓝),0.9%生理盐水
3.仪器设备:
显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片、记号笔
【方法步骤】
1.实验前二天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤(含台盼兰,起标记作用)1ml以刺激腹腔产生较多的
巨噬细胞(此步由教师在实验前进行完毕)。
2.实验时,每组取一只上述处理的小鼠,腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml,注射后轻揉小鼠腹部以使红细
胞悬液分散均匀。
3.20分钟后,用颈
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