推荐下载关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究.docx
- 文档编号:15676230
- 上传时间:2023-07-06
- 格式:DOCX
- 页数:24
- 大小:25.65KB
推荐下载关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究.docx
《推荐下载关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《推荐下载关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究.docx(24页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
推荐下载关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究
[键入文字]
关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
论文网为您提供医药论文范文参考,以及论文写作指导和格式排版要
求,解决您在论文写作中的难题。
关于几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究
作者:
李妍,鞠晓红,任旷,李强,钟越
【摘要】目的分析4种不同中药单体对非小细胞肺癌SPCA-1的生长抑制作用,为
其临床应用提供实验依据。
方法采用WST-1还原法分析不同浓度斑蝥素(2.5,5.0,
10,20mg/ml)、去甲基斑蝥素(2.5,5.0,10,20mg/ml)、-榄香烯(5,10,20,40
mg/ml)和大黄素(10,20,40,80mg/ml)对SPCA-1细胞生长增殖的影响。
结果-榄香
烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素均能抑制非小细胞肺癌增殖,且呈剂量依赖性,其
中去甲斑蝥素的抗肿瘤活性最强,IC50为(7.621.35)mg/L。
结论4种中药单体成分均
能抑制肿瘤细胞SPCA-1的生长增殖,其中显著导致细胞生长抑制的是去甲基斑蝥素
1
[键入文字]
和斑蝥素。
【关键词】肿瘤;中药;斑蝥素;-榄香烯;大黄素;去甲基斑蝥素
肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病率、病死率在我国居前列,其中非小细胞肺癌的预后
比较差。
尽管现在的治疗不断取得进展,生存率提高得还是很少[1]。
寻找有效的抗癌
药物成为肿瘤治疗领域的重要研究内容。
中医药在肿瘤治疗中的应用日益受到关注。
随着中药有效组分分离、纯化和结构修饰技术的进步,从中药中寻找高效、低毒的抗
癌成分已经成为新药开发的重要途径。
筛选肺癌细胞敏感的中药单体成分,将有助于
推动中药在肺癌治疗中的应用,改进肺癌的治疗效果。
本实验分析了4种不同的中药
单体对非小细胞肺癌SPCA-1的生长抑制作用,以期为临床治疗非小细胞肺癌提供实
验依据。
1材料与方法
1.1材料肺癌细胞株SPCA-1购自美国典型生物收藏中心(Americantypeculture
collection,ATCC)。
RPMI-1640培养液购自Sigma公司,小牛血清购自黄岩四季青生
物试剂有限公司。
斑蝥素和去甲基斑蝥素购自大连市医药科学研究所,-榄香烯购自
大连金港制药厂,大黄素购自复旦大学药学院天然药物研究所。
WST-1细胞增殖检测
试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司。
2
[键入文字]
1.2细胞培养SPCA-1细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液,在37℃,5%
CO2,饱和湿度的条件下连续传代培养,2d更换1次培养液,实验时取对数生长期细
胞。
1.3细胞增殖检测取对数生长期细胞,用0.05%胰酶和0.02%EDTA消化,1000
r/min离心5min收集细胞,调细胞密度为2104/ml,接种于96孔板,100l/孔。
待细
胞贴壁生长后,分别加入-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素4种中药成分至终
浓度,液体总量200l/孔,每组做4复孔,为实验组(T)。
另外设置不加药物的对照组
(C)和不加WST-1溶液的空白对照组(B)。
继续培养72h,参照WST-1试剂盒说明,
检测4种中药单体对细胞增殖抑制的作用。
简言之:
除空白对照孔外,每孔加入WST-
1溶液20ml,在37℃培养2h后,酶联检测仪检测450nm的吸光度值(A450)。
按下列
公式计算细胞增殖抑制率(InhibitionRate),并以3次独立生物学实验的平均值表示最
终实验结果。
绘制药物浓度-细胞生长曲线,计算抑制50%细胞生长的药物浓度
(inhibitoryconcentration50%,IC50)。
细胞增殖抑制率(%)=[1-(A450T-A450B)/(A450C-A450B)]100%
1.4形态学观察对数生长期细胞分别加入不同浓度-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和
大黄素继续培养72h后,收集细胞,光镜下观察、拍照。
3
[键入文字]
2结果
2.14种药物对细胞的抑制作用去甲斑蝥素、斑蝥素、-榄香烯和大黄素对SPCA-1
细胞的抑制作用见图1。
去甲斑蝥素,斑蝥素,-榄香烯和大黄素均能抑制SPCA-1细
胞增殖,并呈剂量依赖性,其中去甲斑蝥素的抗肿瘤作用最显著,IC50为7.621.35
mg/L,其次为斑蝥素,IC50为(9.141.69)mg/L,-榄香烯和大黄素的IC50分别为(16.71
3.54)mg/L和(23.653.87)mg/L。
2.2药物作用下细胞形态学变化不同中药单体作用24h,光镜下观察生长状况和细胞
形态的变化。
与对照组相比,随着去甲斑蝥素浓度的增加,视野中细胞的数量减少,
即细胞生长受抑制;同时非贴壁细胞的圆形细胞(G2/M期细胞)比例增加,斑蝥素对细胞
生长和形态影响与去甲斑蝥素相似(见图2);-榄香烯随着浓度的增加,视野中细胞的数
量减少,即细胞生长受抑制;同时细胞膜起泡和核皱缩的细胞(凋亡细胞)比例增加;大黄
素对细胞生长抑制作用也随药物浓度增加而增强(见图3)。
3讨论
中药治疗肿瘤已取得了较好效果,愈来愈受到国内外的关注。
我国中药资源丰富,
从中寻找抗癌活性成分是新药开发的良好途径。
在各种恶性肿瘤中,非小细胞肺癌是
发病率最高的肿瘤,传统的手术切除、放疗、化疗是主要的治疗方法,但治疗结果往
往难令人满意。
筛选有效的中药成分单独应用或与化疗药物联合应用,可能为非小细
4
[键入文字]
胞肺癌的治疗提供新的选择和契机。
斑蝥素是广泛存在于一千五百多种斑蝥体内的一种天然防御性毒素,能抑制蛋白磷
酸酯酶1(PP1)和蛋白磷酸酯酶2a(PP2A)的活性、增强p53的功能,并能影响肿瘤细胞
蛋白质的合成过程,医治疾病已有二千多年的历史[2]。
去甲斑蝥素是我国研制合成的
斑蝥素衍生物,与斑蝥素相比,少了2,3位甲基,毒副作用大大降低,对肺癌、肝癌、
结肠癌、胆囊癌和乳腺癌等有明显抑制作用[3,4]。
去甲斑蝥素抗癌作用机制是多方面
的,越来越多的实验结果显示去甲斑蝥素可通过抑制血管生成从而达到抑制肿瘤生长
的作用[5~7],进一步提示去甲斑蝥素在肿瘤治疗中的潜在价值。
-榄香烯是从中药温
莪术挥发油中提取的萜烯类化合物,而大黄素为中药大黄中提纯的蒽醌类衍生物。
体
外研究表明,-榄香烯和大黄素均对肝癌、结肠癌、乳腺癌和宫颈癌细胞有一定的抑
制作用。
用细胞生物学和分子生物学技术阐明中药的作用机制是促进其应用的前提,
我们以非小细胞肺癌SPC-A-1为模型,比较研究斑蝥素、去甲斑蝥素、-榄香烯和大
黄4种中药成分的抗肿瘤活性以及作用机制。
tips:
感谢大家的阅读,本文由我司收集整编。
仅供参阅!
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
论文网为您提供医药论文范文参考,以及论文写作指导和格式排版要
5
[键入文字]
求,解决您在论文写作中的难题。
其他通冠胶囊对大鼠颈动脉球囊损伤术后血管内膜VEGF表达的影响
作者:
訾勇张敏州王磊郭力恒张军温春瑜杨澄
【摘要】目的探讨通冠胶囊对血管损伤后内膜增生及VEGF表达的影响。
方法制备
大鼠左颈总动脉球囊损伤模型,将54只SD大鼠随机分为通冠胶囊组、盐水对照组和
辛伐他汀对照组,于术后第4周、第8周和第12周处死动物。
分别进行取材检测指
标:
HE染色及弹力纤维染色后光镜下观察管壁增生情况,计算机图像分析内、中膜面
积及其比值观察通冠胶囊对新生内膜形成的影响。
血管内皮生长因子(VEGF)免疫组织
化学法检测明确损伤后血管内皮修复情况。
结果通冠胶囊组在4周、8周和12周时免
疫组化VEGF表达较盐水对照组明显升高(均P0.01),辛伐他汀组的变化趋势与通冠胶
囊组相似。
通冠胶囊组4周、8周与同时段辛伐他汀组比较无统计学差异(均P0.05),
12周较辛伐他汀组明显升高(P0.05)。
球囊损伤后4周各组内膜增生明显,8周时形成
的增生内膜减少,12周时形成的增生内膜明显减少。
通冠胶囊组在损伤后4周、8
周、12周形成的增生内膜较盐水对照组显著减少(均P0.01),内膜面积与中膜面积的比
值较盐水对照组明显降低(均P0.01)。
结论通冠胶囊可以促进大鼠颈总动脉球囊损伤处
的VEGF的表达,并减少新生内膜的形成。
【关键词】通冠胶囊;大鼠颈动脉;球囊损伤;血管内膜;血管内皮生长因子
6
[键入文字]
Abstract:
ObjectiveToobservetheeffectsofTongguancapsuleontheexpressionof
vascularendothelialgrowthfactorandintimalhyperplasyinTunicaintimainratsafter
ballooninjury.Methods60maleSprague-Dawleyratswhoseleftcommoncarotidarteries
wereinjuredwererandomlydividedinto3groups(n=18):
Groupl(10mgkg-1d-1ofPSwas
givenafterinjury),group2(2mgkg-1d-1ofSimvastatinwasgivenafterinjury)andgroup
3(600mgkg-1d-1ofTongguancapsulewasgivenafterinjury).18ratsfromeachgroupwere
euthanizedbyexsanguinationinweek4,week8andweek12afterinjury.Theinjuredleft
commoncarotidarterieswerecarefullyremovedforHEandelasticfibersstaining.Intima
area,mediaareaandIA/MAwereperformedinIPP6.0.whichisanautomaticcomputerized
imaginganalysissystem.Toobservethereparationafterinjuryofbloodvesselendothelium
throughdetectionofVEGFwithimmunohistochemistry.ResultsIncomparisonwithGroupl,
theexpressionofVEGFintunicaintimainratsafterballooninjuryinGroup3increased
obviously(P0.01).ThechangesoftheexpressionofVEGFofGroup2weresimilartoGroup
3.TheexpressionofVEGFofGroup3increasedobviouslyinweek12(P0.05).4weeksafter
theoperation,morphologicalanalysisdemonstratedthatthereweremarkeddifferencesin
theareaofneointimaproliferationamongallthegroups.ConclusionTongguancapsulecan
improvetheexpressionofVEGFintunicaintimainratsafterballooninjuryandinhibit
intimalhyperplasiaofinjuredvascular.
Keywords:
Tongguancapsule;Ratcarotidartery;Ballooninjury;Tunicaintima;VEGF
7
[键入文字]
目前普遍认为血管内膜增生在粥样斑块以及血管成形术后再狭窄的形成过程中都起
到了关键性的作用。
内皮细胞结构和功能损伤是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、
冠心病介入治疗后再狭窄(restenosis,RS)共有的始动病理机制[1,2]。
VEGF是一种二
聚体糖蛋白,特异作用于血管内皮细胞,促使内皮细胞增殖、新血管再生。
在冠心病自然
病程中,冠状动脉粥样硬化导致不同程度的心肌缺血,心肌能逐渐建立自身的侧枝循环,靠
代偿性血管新生适应心肌局部的缺血缺氧,其新生的血管现认为与VEGF有关[3]。
从
VEGF着手,有可能成为抑制内膜增生的新策略。
本研究利用大鼠左颈总动脉球囊损
伤模型,观察通冠胶囊对于血管损伤后内膜增生的影响,并探讨其可能机制。
1材料
VEGF免疫检测试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司(一抗)、上海西唐科技有限
公司(二抗)。
日本OLYMPUS公司CHA-213W型显微镜。
通冠胶囊由广东省中医院制
剂科提供(0.5g/粒,生产批号:
07110504),舒降之片(辛伐他汀,40mg/片,生产批号:
08023)由默沙东制药有限公司提供。
2方法
2.1动物分组雄性SD大鼠54只,SPF级,体重180~220g,由南方医科大学实验
动物中心提供,许可证编号:
SCXK(粤)2003-0001。
将54只大鼠随机分为3组,各18
只。
辛伐他汀组:
造模后,给予2mgkg-1d-1;通冠胶囊组:
造模后,给予600mgkg-1
8
[键入文字]
d-1;生理盐水对照组:
造模后,给予10mlkg-1d-1。
以上3组分别于术后4周、8周、
12周取材,每个时间段每组各6只。
2.2模型复制采用100mg/L水合氯醛溶液,按400mg/kg腹腔麻醉大鼠,取仰卧位固
定,常规消毒大鼠颈前皮肤,取颈部正中切口,从颈外静脉注射肝素钠100U/kg,寻找
到左颈总动脉和颈外、颈内动脉分叉处,在左颈总动脉近心端暂时阻断血流,靠近分
叉处用血管分离棒分离颈外动脉,其近心端和远心端各穿一4号丝线待用。
从颈外动
脉处将1.5FForgaty导管插入至颈总动脉约1.5cm,在直视下观察球囊的插入深度,肝
素生理盐水充盈球囊,缓慢回抽球囊至动脉分叉处,反复3次剥脱内膜。
将导管撤出
后,结扎颈外动脉近段,去除血管夹,恢复血流,查看颈总动脉和颈内动脉搏动良
好。
缝合伤口,送回动物观察室,腹腔注射青霉素预防感染。
2.3标本采集及处理用100mg/L水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠,取出损伤部位的
左颈总动脉约2cm长,PBS缓冲液反复冲洗后置入4%多聚甲醛溶液中固定24h,石
蜡包埋病理切片,每个标本均匀间断切片8张,切片厚度3m。
切片行HE染色、弹力
纤维染色及VEGF免疫组化染色。
在光镜下观察血管内膜增生情况,以内弹力板和外
弹力板为标准区分内膜、中膜和外膜。
VEGF免疫组化染色采用SP法,石蜡切片脱蜡
至水化,3%双氧水阻断内源性过氧化物酶10min,微波修复抗原10min,正常羊血清
37℃封闭20min,甩掉封闭液,滴加稀释的兔抗大鼠VEGF一抗(1∶250)37℃孵育
1h,取出以0.01mol/LPBS漂洗3次后,加入稀释的山羊抗兔IgG二抗(1∶10000)37
℃孵育30min,再取出以PBS漂洗3次,滴加辣根过氧化物酶标记的链亲和素37℃孵
育40min,再取出以PBS漂洗3次,DAB显色5~10min,显微镜下观察至出现阳性
着色,以蒸馏水冲洗终止反应,苏木精复染,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶
9
[键入文字]
封片。
VEGF阳性表达呈棕黄色,表达主要位于血管内膜损伤处,细胞内及细胞外间
质均有表达。
2.4图像分析及统计学处理在普通光镜下固定各种光学参数,对标本进行扫描,以
TIFF格式存入电脑;用ImageProPlus6.0软件进行图像分析。
(1)通过血管HE染色及弹
力纤维染色计算:
管腔面积(lumenarea,LA)内膜面积、中膜面积、内膜和中膜面积比
(intimaarea/mediaarea,IA/MA)。
①在40倍视野偏振光光镜下,固定显微镜的各项光
学常数,对损伤血管进行扫描,图像以TIFF格式存入电脑;②在ImageProPlus6.0环
境下打开一幅图像,利用软件中的CountandSize功能自动计算出LA、内弹力板包绕
面积(internalelasticarea,IEA)、外弹力板包绕面积(externalelasticarea,EEA),再计算出
内膜面积(IEA-LA)和中膜面积(EEA-IEA),并计算IA/MA。
(2)用江苏省捷达科技发展
有限公司的JD801数码医学显微图像分析系统在400倍放大倍数下,连续扫描5个视野,
读取平均光密度值作为VEGF的相对表达量。
各值以(s)表示,用SPSS11.5统计软件
包进行数据处理,组间差异性比较用单因素方差分析,组间两两比较用LSD检验法。
tips:
感谢大家的阅读,本文由我司收集整编。
仅供参阅!
本实验结果表明,斑蝥素、去甲斑蝥素、-榄香烯和大黄素对SPCA-1细胞增殖均有
抑制效应,其中去甲斑蝥素的抗肿瘤活性最强,IC50值为(7.621.35)mg/L。
细胞增殖
10
[键入文字]
过剩和细胞凋亡下降是恶性肿瘤形成的原因,分析抗肿瘤制剂对细胞周期和细胞凋亡
的影响是研究其抗癌机制的关键指标。
4种中药成分均能诱导一定程度的细胞凋亡,斑
蝥素和去甲斑蝥素显著的导致G2/M期的阻滞,而b-榄香烯和大黄使细胞阻滞于G1期
和S1期。
通过上述指标的分析表明,斑蝥素和去甲斑蝥素抑制SPCA-1增殖主要与有
丝分裂阻滞和诱导细胞凋亡有关;而-榄香烯和大黄可能主要作用于G1和S期。
调控
细胞周期和细胞凋亡的机制复杂,上述中药成分影响肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡的
分子机制还有待于进一步研究探索。
【参考文献】
[1]MortensonMM,SchliemanMG,VirudachalamS,etal.Effectsoftheproteasome
inhibitorbortezomibaloneandincombinationwithchemotherapyintheA549nonsmall-cell
lungcancercellline[J].CancerChemotherPharmacol,2004,54(4):
343.
[2]黄泰康,丁志尊,赵守训,等.现代本草纲目[M].北京:
中国医药科技出版社,
2001:
2715.
[3]AnWW,WangMW,TashirSI,etal.NorcantharidininduceshumanmelanomaA375-
S2cellapoptosisthroughmitochondrialandcaspasepathways[J].JKoreanMedSci,2004,19
(4):
560.
11
[键入文字]
[4]McCluskeyA,SimATR,SakoffJA.Serine-threonineproteinphosphataseinhibitors:
developmentofpotentialtherapeuticstrategies[J].JMedChem,2002,45(6):
1151.
[5]林晓燕,宋和平,胡赟宏,等.去甲斑蝥素对人乳腺癌血管生成的抑制作用[J].中
国癌症杂志,2007,17(11):
847.
[6]范跃祖,陈春球,赵泽明,等.去甲斑蝥素对胆囊癌肿瘤血管生成的抑制作用[J].
中华实验外科杂志,2006,23(8):
922.
[7]范跃祖,陈春球,赵泽明,等.去甲斑蝥素对胆囊癌肿瘤血管生成的作用及机制
研究[J].中华医学杂志,2006,28(10):
693.
医药卫生栏目
tips:
感谢大家的阅读,本文由我司收集整编。
仅供参阅!
12
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 推荐 下载 关于 中药 单体 抑制 细胞 肺癌 增殖 实验 研究