中国农业大学806生物化学考点分析总结.docx
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中国农业大学806生物化学考点分析总结
806生物化学考点分析(20XX年)
填空题:
共五题30空(30分)
选择题:
共60题(60分)包括英文选择20题
简答题:
共6题(60分)
中国农业大学806生物化学考点分析总结
考点一:
20种必需氨基酸
例1:
(1)把WYTSPNE用中文名表示,指出哪些是酸性氨基酸,哪些是碱性氨基酸。
(2007)
(2)蛋白质中氨基酸的共性;比较Val和Glu的电荷差异;由镰刀形红细胞贫血病说明蛋白质中的保守氨基酸的重要性。
(3)碱性氨基酸有_____________________。
(用单字母或三字母表示)
考点二:
蛋白质等电点
例2:
氨基酸的酸碱性,其原因是什么?
设计实验证明。
并讨论-氨基,-羧基,氨基酸的pK1(羧基)pK2(氨基)和PI的含义,三者的关系。
考点三:
氨基酸的反应
反应类型
Sanger反应
Edman反应
茚三酮反应
反应试剂
DNFB
PITC
水合茚三酮
反应基团
氨基
氨基
氨基,羧基
反应条件
弱碱性
弱碱性
弱酸性
反应本质
烃基化
烃基化
脱羧脱氨
例3:
(1)氨基酸降解的反应主要有三种方式_____________________
(2)蛋白质中二硫键的断裂有氧化法或还原法,氧化法试剂(),还原法试剂(),蛋白质二硫键还原后易回聚为防止发生用()。
(3)实验室常用的蛋白变性试剂()、()、()。
(4)Sanger反应所使用的重要试剂是();Edman降解所用重要试剂是()
考点四:
氨基酸的分离分析(p21)
分配柱层析纸层析离子交换层析薄层层析
例4:
(1997)1、在PH=3左右,氨基酸混合液(酸性、碱性、中性三类),经强酸型阳离子交换树脂被洗脱分离,指出这三类氨基酸被洗脱的先后顺序,并说明为什么。
2、用阳离子交换层析洗脱Asp、Ala、Lys、Ser最先洗脱下来的
考点五:
蛋白质的一级结构、二级结构及肽链测定
例5:
(1999)1、简述蛋白质一级结构与生物功能的关系。
2、蛋白质二级结构的类型有________________、________________和___________________。
3、测定多肽链N-末端的常用方法有__________________、__________________和__________________等。
4、x-射线衍射鉴定蛋白质___________,质谱鉴定蛋白质___________
5、最先被阐明一级结构的蛋白质___________
6、维持二级结构的作用力____________________________________________
7、胰蛋白酶专门水解_________________________,胰凝乳蛋白酶水解______________________________,CNBr专一水解_________
8、用胰蛋白酶处理Gly-Lys-Ala-Phe-Arg-Leu-Ile后,得到几个肽段
9、X射线衍射技术测定二级结构的要求_________;NMR的要求不同之处_________
10、α-螺旋:
螺旋每转一圈上升3.6个氨基酸残基,螺距约0.54nm;相邻的螺圈之间形成链内氢键,氢键的取向几乎与中心轴平行。
典型α-螺旋一对氢键O与N之间共有13个原子(3.613),前后间隔3个残基。
螺旋的走向绝大部分是右手螺旋,残基侧链伸向外侧。
R基团的大小、荷电状态及形状均对α-螺旋的形成及稳定有影响。
11、蛋白的变性与复性
12、肌、血红蛋白共同点及各自功能
13、结合肌红蛋白的功能,分子结构特点和氧合曲线特征,讨论肌红蛋白可逆结合氧的分子基础。
2010
14、简述H+、CO2和BPG对血红蛋白结合氧的影响
考点六:
蛋白质的分离与鉴定
A、蛋白质的分离
1、根据溶解度差异分离蛋白
1)等点沉淀
2)盐溶盐析
3)有机溶剂沉淀
4)蛋白变性沉淀
2、根据分子大小差异分离蛋白质
1)透析和超滤
2)密度梯度离心
3)凝胶过滤层析
3、根据所带电荷不同分离蛋白质
(一)电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳、等点聚焦电泳、双向电泳
SDS-PAGE凝胶电泳(2014简答)
(二)离子交换层析
4、根据蛋白质吸附性
1)羟基磷灰石层析
2)疏水作用层析
B、蛋白质鉴定
1、蛋白质分子量鉴定
1)SDS-PAGE电泳
2)凝胶过滤
3)沉降速度法
2、Western-Blotting(2014简答)
C、蛋白定量测定
1)双缩脲反应
2)Folin-酚反应
3)考马斯亮兰结法
例6
(1)变性电泳和非变性电泳都可用于蛋白质研究,但基本原理和应用目的不同,讨论其主要区别。
(8分)2000
(2)、一个蛋白质样品,经SDS-PAGE证明有两条链,从这个实验结果能不能说:
这个蛋白质样品是不纯的?
为什么?
(8分)1998
(3)有一个低浓度、大体积的含盐蛋白质样品,要求得到高浓度、不含盐的蛋白质样品,试设计一实验方案,并讨论其可行性。
(4)在产品中提取一种蛋白质,它有强的酶的活性。
请问用下列那种方法好。
为什么?
1)
先盐析,再用SDS-PAGE法提纯。
2)先盐析,再用凝胶过滤法提纯。
2005
(5)蛋白免疫印记法的的基本原理和重要操作
(6)某蛋白质样品经过PAGE,SDS-PAGE和凝胶过滤得到一个纯的样品,在进行PAGE在100KD处聚集,进行SDS-PAGE在50KD处聚集,经过桑格法分析,经层析后得到两种不同氨基酸,试分析试验结果,并推测蛋白质的天然结构。
2007
(7)有一个多亚基球状蛋白质,其肽链间有二硫键。
试问由一下那种方法,可以测得该蛋白质的分子量?
请说明理由。
(1)SDS-PAGE
(2)等密度沉降(3)凝胶过滤法2008
(8)举例3种测定蛋白质浓度的方法,说明其原理和作用特点。
9分2009
(9)从样品中提取天然蛋白质,为什么要加缓冲液且要有一定离子浓度?
为什么要在低温条件下进行而不是室温?
2010
稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。
提取的温度要视有效成份性质而定。
一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。
但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。
为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。
下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。
1、pH值
蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH范围内。
用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。
2、盐浓度
稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用。
同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔。
升浓度为宜。
缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。
(10)常用于蛋白质沉淀的方法有_____、_____、_____。
第一章蛋白质化学-练习题
一、单项选择题
1.测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40g,此样品约含蛋白质多少?
A.2.00g B.2.50g C.6.40g D.3.00g E.6.25g
2.下列含有两个羧基的氨基酸是:
A.精氨酸 B.赖氨酸 C.甘氨酸 D.色氨酸 E.谷氨酸
3.维持蛋白质二级结构的主要化学键是:
A.盐键 B.疏水键 C.肽键 D.氢键 E.二硫键
4.关于蛋白质分子三级结构的描述,其中错误的是:
A.天然蛋白质分子均有的这种结构
B.具有三级结构的多肽链都具有生物学活性
C.三级结构的稳定性主要是次级键维系
D.亲水基团聚集在三级结构的表面biooo
E.决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基
5.具有四级结构的蛋白质特征是:
A.分子中必定含有辅基
B.在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上,肽链进一步折叠,盘曲形成
C.每条多肽链都具有独立的生物学活性
D.依赖肽键维系四级结构的稳定性
E.由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成
6.蛋白质所形成的胶体颗粒,在下列哪种条件下不稳定:
A.溶液pH值大于pIB.溶液pH值小于pIC.溶液pH值等于pID.溶液pH值等于7.4E.在水溶液中
7.蛋白质变性是由于:
biooo
A.氨基酸排列顺序的改变 B.氨基酸组成的改变 C.肽键的断裂 D.蛋白质空间构象的破坏E.蛋白质的水解
8.变性蛋白质的主要特点是:
A.粘度下降 B.溶解度增加 C.不易被蛋白酶水解
D.生物学活性丧失 E.容易被盐析出现沉淀
9.若用重金属沉淀pI为8的蛋白质时,该溶液的pH值应为:
A.8 B.>8 C.<8 D.≤8 E.≥8
10.蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸?
A.半胱氨酸 B.蛋氨酸 C.胱氨酸 D.丝氨酸 E.瓜氨酸
二、多项选择题
(在备选答案中有二个或二个以上是正确的,错选或未选全的均不给分)
1.含硫氨基酸包括:
A.蛋氨酸 B.苏氨酸 C.组氨酸 D.半胖氨酸
2.下列哪些是碱性氨基酸:
A.组氨酸 B.蛋氨酸 C.精氨酸 D.赖氨酸
3.芳香族氨基酸是:
A.苯丙氨酸 B.酪氨酸 C.色氨酸 D.脯氨酸
4.关于α-螺旋正确的是:
A.螺旋中每3.6个氨基酸残基为一周
B.为右手螺旋结构
C.两螺旋之间借二硫键维持其稳定
D.氨基酸侧链R基团分布在螺旋外侧
5.蛋白质的二级结构包括:
A.α-螺旋 B.β-片层 C.β-转角 D.无规卷曲
6.下列关于β-片层结构的论述哪些是正确的:
A.是一种伸展的肽链结构
B.肽键平面折叠成锯齿状
C.也可由两条以上多肽链顺向或逆向平行排列而成
D.两链间形成离子键以使结构稳定
7.维持蛋白质三级结构的主要键是:
A.肽键 B.疏水键 C.离子键 D.范德华引力
8.下列哪种蛋白质在pH5的溶液中带正电荷?
A.pI为4.5的蛋白质 B.pI为7.4的蛋白质C.pI为7的蛋白质 D.pI为6.5的蛋白质
9.使蛋白质沉淀但不变性的方法有:
A.中性盐沉淀蛋白 B.鞣酸沉淀蛋白C.低温乙醇沉淀蛋白 D.重金属盐沉淀蛋白
10.变性蛋白质的特性有:
A.溶解度显著下降 B.生物学活性丧失C.易被蛋白酶水解 D.凝固或沉淀
三、填空题
1.组成蛋白质的主要元素有_________,________,_________,_________。
2.不同蛋白质的含________量颇为相近,平均含量为________%。
3.蛋白质具有两性电离性质,大多数在酸性溶液中带________电荷,在碱性溶液中带_______电荷。
当蛋白质处在某一pH值溶液中时,它所带的正负电荷数相待,此时的蛋白质成为_________,该溶液的pH值称为蛋白质的__________。
4.蛋白质的一级结构是指_________在蛋白质多肽链中的_________。
5.在蛋白质分子中,一个氨基酸的α碳原子上的________与另一个氨基酸α碳原子上的________脱去一分子水形成的键叫________,它是蛋白质分子中的基本结构键。
6.蛋白质颗粒表面的_________和_________是蛋白质亲水胶体稳定的两个因素。
7.蛋白质变性主要是因为破坏了维持和稳定其空间构象的各种_________键,使天然蛋白质原有的________与________性质改变。
8.按照分子形状分类,蛋白质分子形状的长短轴之比小于10的称为_______,蛋白质分子形状的长短轴之比大于10的称为_________。
按照组成分分类,分子组成中仅含氨基酸的称_______,分子组成中除了蛋白质部分还分非蛋白质部分的称_________,其中非蛋白质部分称_________。
参考答案
一、单项选择题
1.B2.E3.D4.B5.E6.C7.D8.D9.B10.E
二、多项选择题
1.AD2.ACD3.ABD4.ABD5.ABCD
6.ABC7.BCD8.BCD9.AC10.ABC
三、填空题
1.碳氢氧氮;2.氮16;3.正负两性离子(兼性离子)等电点;4.氨基酸排列顺序;5.氨基羧基肽键;6.电荷层水化膜;7.次级键物理化学生物学;8.球状蛋白质纤维状蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质辅基
考点七:
酶的分类
例7.
类别
作用
裂合酶
异构酶
连接酶
考点八:
酶活力测定(2014简答)
例8.1酶活力时应遵循哪些基本原则?
为什么?
2001
2、测定酶活力时,通过增加反应时间能否提高酶活力?
为什么?
(8分)1999
3、用生物化学方法提取酶要进行酶活力跟踪,说说你对这个研究方法的看法(2013)
4.取1mg酶在1分钟内催化生成1000μmol产物,那么,酶活力就相当于_____。
考点九:
酶促动力学(2014简答)
例9..1、明底物浓度,温度和PH对酶促反应的作用规律;
(2)新开发出一种新型酶,设计一实验说明ABC三种物质与酶亲和力大小。
16分2009
2、从酶的角度分析酒精过敏者的过敏症状原因
3、简述Km值得意义以及作用
4、关于温度对酶促反应速度的影响,下列叙述错误的是
A.升高温度可加快酶促反应速度,但也可使酶逐步变性
B.在最适温度时,酶反应速度最快
C.最适温度时没的特征常数
D.最适温度与酶的作用时间有关
5、当[S]< A.与[S]成正比B.与[S]无关 C.与Km成正比D.与[E]成正比 6、有机汞,有机砷毒性的抑制酶的();有机磷毒性的抑制酶的();烷化剂毒性的抑制酶的(); 7、米氏方程的表达式为__________________________,它表达了__________________关系,其中的________是酶的特征常数 8、以酶的1/V为纵坐标,以1/[s]为横坐标,所得直线在纵坐标上的截距为_____。 9、溶菌酶活性中心两个重要氨基酸残基是_________________和_________________可用单字母或三字母表示。 10、NAD+和NADP+分子结构的区别是后者有一个____________________基团。 11、维生素B2构成的辅基是____________,参加________反应。 12、画图简述酶的反应初速度,并结合图说明为何不能通过延长反应时间来加快酶的最大催化速度2006 13、 14、酶的抑制剂有哪些类型? 简述各类型的作用特点。 (8分)1998 考点十: 酶的催化机理 例10.1、什么是酶的活性中心? 有一个酶,含有一个半胱氨酸残基,设计一个实验,验证该氨基酸与酶的催化作用或专一性。 2010 2.酶活性中心的特点,测定酶活性中心的两种方法2011 3.什么是酶的专一性? 指出两种酶作用专一性的假说,并说明其中一种的重要观点。 4.酶的专一性是指 A.酶与辅酶的特异结合 B.酶对其所催化的底物或反应有选择性 C.酶在细胞中的定位是特异性的 D.酶催化反应的机制各不相同 考点十一: 酶的活性调节 例11.画出普通酶和别构酶初始速度和底物浓度间的动力学曲线,并分别加以说明。 2007 酶测试题 一、单项选择题(在备选答案中只有一个是正确的) 1.关于酶的叙述哪项是正确的? A.所有的酶都含有辅基或辅酶B.只能在体内起催化作用C.大多数酶的化学本质是蛋白质 D.能改变化学反应的平衡点加速反应的进行E.都具有立体异构专一性(特异性) 2.酶原所以没有活性是因为: A.酶蛋白肽链合成不完全B.活性中心未形成或未暴露C.酶原是普通的蛋白质 D.缺乏辅酶或辅基E.是已经变性的蛋白质 3.磺胺类药物的类似物是: A.四氢叶酸B.二氢叶酸C.对氨基苯甲酸D.叶酸E.嘧啶 4.关于酶活性中心的叙述,哪项不正确? A.酶与底物接触只限于酶分子上与酶活性密切有关的较小区域 B.必需基团可位于活性中心之内,也可位于活性中心之外 C.一般来说,总是多肽链的一级结构上相邻的几个氨基酸的残基相对集中,形成酶的活性中心 D.酶原激活实际上就是完整的活性中心形成的过程 E.当底物分子与酶分子相接触时,可引起酶活性中心的构象改变 5.辅酶NADP+分子中含有哪种B族维生素? A.磷酸吡哆醛B.核黄素C.叶酸D.尼克酰胺E.硫胺素 6.下列关于酶蛋白和辅助因子的叙述,哪一点不正确? A.酶蛋白或辅助因子单独存在时均无催化作用B.一种酶蛋白只与一种辅助因子结合成一种全酶 C.一种辅助因子只能与一种酶蛋白结合成一种全酶D.酶蛋白决定结合酶蛋白反应的专一性 E.辅助因子直接参加反应 7.如果有一酶促反应其〔8〕=1/2Km,则v值应等于多少Vmax? A.0.25B.0.33C.0.50D.0.67E.0.75 8.有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用属于: A.可逆性抑制作用B.竞争性抑制作用C.非竞争性抑制作用D.反竞争性抑制作用E.不可逆性抑制作用 9.关于pH对酶活性的影响,以下哪项不对? A.影响必需基团解离状态B.也能影响底物的解离状态C.酶在一定的pH范围内发挥最高活性 D.破坏酶蛋白的一级结构E.pH改变能影响酶的Km值 10.丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于: A.反馈抑制B.底物抑制C.竞争性抑制D.非竞争性抑制E.变构调节 11.Km值的概念是: A.与酶对底物的亲和力无关B.是达到Vm所必须的底物浓度C.同一种酶的各种同工酶的Km值相同 D.是达到1/2Vm的底物浓度E.与底物的性质无关 二、多项选择题 (在备选答案中有二个或二个以上是正确的,错选或未选全的均不给分) 1.关于酶的竞争性抑制作用的说法哪些是正确的? A.抑制剂结构一般与底物结构相似B.Vm不变C.增加底物浓度可减弱抑制剂的影响D.使Km值增大 2.关于酶的非竞争性抑制作用的说法哪些是正确的? A.增加底物浓度能减少抑制剂的影响B.Vm降低C.抑制剂结构与底物无相似之处D.Km值不变 3.酶与一般催化剂的不同点,在于酶具有: A.酶可改变反应平衡常数B.极高催化效率C.对反应环境的高度不稳定D.高度专一性 4.FAD分子组成是: A.含有维生素B2B.是一种二核苷酸C.含有GMP组分D.含有ADP组分 5.关于同工酶,哪些说明是正确的? A.是由不同的亚基组成的多聚复合物B.对同一底物具有不同的Km值 C.在电泳分离时它们的迁移率相同D.免疫学性质相同 6.常见的酶活性中心的必需基团有: A.半胱氨酸和胱氨酸的巯基B.组氨酸的咪唑基C.谷氨酸,天冬氨酸的侧链羧基D.丝氨酸的羟基 7.酶的专一性可分为: A.作用物基团专一性B.相对专一性C.立体异构专一性D.绝对专一性 8.有关变构酶的叙述是: A.大多数变构酶是多聚复合物B.是体内快速调节酶含量的重要方式 C.可有调节亚基和催化亚基D.酶从一种构象转变为另一种构象时,酶活性发生改变 9.影响酶促反应的因素有: A.温度,pH值B.作用物浓度C.激动剂D.酶本身的浓度 10.酶的活性中心是指: A.是由必需基团组成的具有一定空间构象的区域B.是指结合底物,并将其转变成产物的区域 C.是变构剂直接作用的区域D.是重金属盐沉淀酶的结合区域 三、填空题 1.结合蛋白酶类必需由__________和___________相结合后才具有活性,前者的作用是_________,后者的作用是__________。 2.酶促反应速度(v)达到最大速度(Vm)的80%时,底物浓度[S]是Km的___________倍;而v达到Vm90%时,[S]则是Km的__________倍。 3.不同酶的Km________,同一种酶有不同底物时,Km值________,其中Km值最小的底物是__________。 4.__________抑制剂不改变酶反应的Vm。 5.__________抑制剂不改变酶反应的Km值。 6.乳酸脱氢酶(LDH)是_______聚体,它由________和_________亚基组成,有________种同工酶,其中LDH1含量最丰富的是__________组织。 7.L-精氨酸只能催化L-精氨酸的水解反应,对D-精氨酸则无作用,这是因为该酶具有_________专一性。 8.酶所催化的反应称________,酶所具有的催化能力称_________。 参考答案 一、单项选择题 1.C2.B3.C4.C5.D6.C7.B8.E9.D10.C 二、多项选择题 1.ABCD2.BCD3.BCD4.ABD5.AB 6.BCD7.BCD8.ACD9.ABCD10.AB 三、填空题 1.酶蛋白辅酶(辅基)决定酶的促反应的专一性(特异性)传递电子、原子或基团即具体参加反应2.4倍9倍3.不同也不同酶的最适底物4.竞争性5.非竞争性6.四HM5种心肌7.立体异构8.酶的反应酶的活性 考点十二: 脂的分类 例12.根据功能对脂类进行分类(2013) 1.甘油磷脂的种类: ____________________________________ 考点十三: 生物膜结构及功能 例13.简述生物膜的流动性及影响因素,设计实验证明蛋白的流动性 2.简述LDL的受体介导的内吞作用 3.简述Na+,K+-ATP酶的构象变化以及作用变化 4.简述胞外信号的跨膜转导 5.简述G-蛋白的激活与抑制 6、简述腺苷酸环化酶信号途径(级联反应) 7.简述有机氟磷酸盐以及有机磷农药的作用机理 8.物质跨生物膜的主动运输和被动运输有什么主要区别? 9.生物膜脂构成__________结构,生物膜的基本特征是__________和___________。 10.体液中的主要阳离子是_________________,细胞内的主要阳离子是_________________。 考点十四: ATP是生物系统中自由能的“通用货币” 例14.什么是ATP? 简述其生物功能。 2005 考点十五: 线粒体电子传递链(2014简答) 例15.1、讨论呼吸链的组成及电子传递顺序。 2、属于高能磷酸化合物的是 A、ADP,磷酸肌醇,磷酸精氨酸? 烯醇式…B、烯醇式…,焦磷酸,肌
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