大学药理学实验附答案.docx

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大学药理学实验附答案

实验题目：

小鼠腹腔注射筒箭毒碱ED50的测定

DeterminationofCl-Tubocurarine'sMedian

EffectiveDose（ED50）

【实验目的】

认识ED50的测定方法、原理、计算过程与意义。

【有关理论】

1．对于量反响，质反响：

量反响是指个体上反响的强度并以数目的分级来表示；比如：

血压、尿量等。

质反响是指集体中所察看到的某一效应的出现；如：

存亡、有效或无效。

以阳性反响的出现频次或百分数来表示（全或无，阳性率）。

2．对于ED50，LD50，以及治疗指数:

能使集体中有多半个体出现某一效应的剂量，称为多半效应量，若此效应为有效，则为多半有效量ED50，ED50是质反响的参数。

若此效应为死亡时，则为多半致死量LD50。

治疗指数=LD50/ED50=TI，该值越大越好，说明药物越安全.

可用机率单位正规法或点斜法求出LD1，ED99；LD5，ED95。

3．肌松药分为去极化型和非去极化型两种。

去极化型肌松药的代表为琥珀酰胆碱，其肌松作用不可以被抗胆碱酯酶药新斯的明拮抗，反而会加重。

非去极化型肌松药的代表为筒箭毒碱，其肌松作用能被新斯的明挽救。

4．测定ED50，LD50的意义

可计算治疗指数TI（LD50/ED50），为临床安全用药供给指导。

【实验动物】

小鼠（昆明种KM），雌雄参半。

【实验器材】

铁丝网，铁架台，天平，注射器等。

【实验方法】

应用点斜法测定ED50。

应用该方法测定ED50时，实验设计一定切合以下5点要求：

1）动物以5~8组为宜；

2）每组动物数须一致；

3）各组给药剂量应体现等比数列；

4）各组给药剂量的公比；

5）最大剂量（Dmax）组的阳性反响率须≥80%，最小剂量（Dmin）组的阳性反响率须≤20%

【实验方法】

1．预实验：

目的是为了找出切合上述点斜法要求5）的Dmax和Dmin。

阳性反响判断标准：

20min内小鼠落下3次（注意清除因相互拥堵而落下所造成的假阳性）。

2．确立组数（n）后，依据Dmax和Dmin，计算各组应赐予的剂量，Dmax=rn·Dmin。

注意公比r应在上述要求的范围内，即=1.1~1.6。

分别计算出各组应注射的剂量，见下表：

Group

2

3

4

5

6

1

No.

DoseDmin

r·Dmin2·Dminr3·Dminr4·DminDmax=

r5·Dmin

GroupNo.123456...

DoseDminr·Dminr2·Dminr3·Dminr4·DminDmax=r5·Dmin

3．正式实验：

a．挑选小鼠：

将小鼠放在铁丝网上，察看10分钟，不掉下来为合格，能够参加实验。

此步的目的在于清除假阳性；

b．称重、标志；

c．给药察看：

腹腔注射ip筒箭毒碱。

每组分别赐予相应的剂量。

d．计算阳性率：

阳性反响标准：

给药后20分钟内自铁丝网上掉下来3次者为阳性。

【计算】

小鼠

ip

筒箭毒碱的

ED50是多少？

其

95%可信区间是多少？

1）

lgED50=Xm-i

（∑P

）

此中，Xm=lgDmax

，i=lgr

，∑P：

阳性

率之和

所以，ED50=lg-1[Xm-i

（∑P

）]

2）ED50的95%可信区间=lg-1[lgED50

的标准误：

Sx50=i（∑P-∑P2）1/2/（n

±1.96Sx50]，此中，Sx50为

-1），n为各组动物数。

ED50

【作图】

对阳性率-对数剂量作图。

【思虑题】

质反响的量效曲线与量反响的量效曲线有何不同？

答案：

如以药物的效应为纵坐标，药物的剂量或浓度为横坐标作图，则获得直方双曲线；如将药物浓度或剂量改用对数值作图，则呈典型的S形曲线，这就是往常所说的量效曲线（图-1）。

定量说明药物的剂量（浓度）与效应之间的关系，有助于认识药物作用的性质，为临床用药供给参照。

药理效应是连续增减的量变，可用详细数目或最大反响的百分数表示的，称为量反响，如血压、心率、血糖浓度

等，其研究对象为单调的生物单位。

假如药理效应表现为反响性质的变化，而不是跟着药物剂量或浓度的增减呈连续性量的变化，则称为质反响，其反响只好用全或无、阳性或阴性表示，如存活与死亡、惊厥与不惊厥等，其研究对象为一个

集体。

假如用累加阳性率与对数剂量（或浓度）作图，也呈典型的对称S形量效曲

线

（图-2）。

附：

1、记录表格示例1（每组用）

Weightof

Volumeof

Time:

Time:

endof

Timesof

No.

injection

injection

observation

+/-

body（g）

falling

（ml）

down

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

No.Weightofbody（g）

Volumeofinjection（ml）

Time:

injection

Time:

endofobservation

Timesoffallingdown+/-

2、记录表格示例2（共计）：

GroupsN

Dose

Volumeofinjection（ml/10g

No.of

（mg/kg）

体重）

P%

reaction

110

210

310

410

510

610

注：

N：

每组动物数；P%：

阳性反响率。

实验题目：

苯巴比妥钠和放线菌素D对小鼠肝脏细胞色素P450含量的影响

InfluenceofPhenobarbitalSodiumandActimycin

DontheHepaticCytochromeP-450Contentin

Mice

【有关理论】

P-450属于血红素蛋白，其复原型与CO联合后，在波长450nm处出现汲取峰。

所以，能够应用示差光谱法测定其含量。

肝匀浆样品中通以CO后，加复原剂连二亚硫酸钠（Na2S2O4），而后在450nm和490nm处测定吸光度，其差值代入公式，即可计算出细胞色素P450的含量。

【实验目的】

肝匀浆中细胞色素P-450含量的简略测定；肝药酶的引诱剂、克制剂的作用。

【实验动物】

小鼠（昆明种）

【实验药品】

生理盐水NS；苯巴比妥钠0.75%；放线菌素D（A.D.）0.002%；蔗糖溶液0.25M；Tris-HCl缓冲液。

【实验器材】

玻璃匀浆器，漏斗，试管（10ml）数只，滤纸，移液管（10ml）数只，冰盒，扭力天平，分光光度计，制冰机等。

【实验方法】

1．动物分3组：

生理盐水组，苯巴比妥钠组，以及放线菌素D组。

2．苯巴比妥钠和放线菌素Di.p.两天，引诱或克制肝药酶。

3．断头放血：

于第三天（实验当天）将小鼠断头放血（须放净，因血红素会影响实验结果）；

4．制备肝匀浆：

将0.25M的蔗糖溶液和0.05MTris-HCl缓冲液置于冰块中预冷；剪下肝脏（不得少于400mg；勿损坏胆囊；以滤纸吸去血迹）；扭力天平称重（垫锡纸；每次加样或加减法码时一定关上关平）；将肝组织置于匀浆器中，加入预冷后的0.25M蔗糖，肝组织；冰浴下研磨，直至组织变为淡粉色匀浆；取此匀浆液1ml，加入预冷后的0.05MTris-HCl缓冲液9ml，充足混匀；218室冰浴下充以CO，1~2气泡/秒，通气2分钟。

5．通气完成的溶液，倾入2个比色杯中，一个作为参照杯，另一个作为样品杯。

向样品杯中加入连二亚硫酸钠5mg，充足混匀。

参照杯调零后，在450nm和490nm处测定样品杯的吸光度。

【结果办理】

1、依据所测得的OD值计算P-450的含量*。

将结果填入下表，并计算均数。

2、计算P-450高升百分率：

（Pheno-N.S.）/N.S.；或P-450降低百分率：

（N.S.-A.D.）/N.S.

【剖析议论】

1、P-450在药物转变中的作用原理；

答案：

细胞色素（P-450cytochromeP-450,CYP450或P-450）酶系由一群基因超

家族（superfamily）编码的酶蛋白所构成。

细胞色素P-450参加有毒物质以及类固醇和脂肪酸的羟基化。

羟基化波及四个基本反响∶被氧化的物质同细胞色素P-450联合→细胞色素P-450中的铁原子被NADPH复原→氧同细胞色素P-450联合→底物联合一个氧原子被氧化,另一个氧原子用于形成水。

细胞中，细胞色素P450主要散布在内质网和线粒体内膜上，作为一种尾端加氧酶，参加了生物体

内的甾醇类激素合成等过程。

最近几年来，对细胞色素P450的构造、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。

2、不同的实验组P-450含量不同的原由；

答案：

苯巴比妥属于酶的引诱剂，肝药酶引诱剂是指有些药物长久使用后能加快肝药酶的合成并增强其活性，这种药物就称为肝药酶引诱剂。

药酶活性增添是机体对药物产生耐受性的主要原由，因药酶活性增添，促进药物代谢加快，而使机体对药物的反响性减弱。

如连续服用苯巴比妥后，不单使机体对苯巴比妥产生耐受性，又可使同时服用的其余药物药效减低，常需增添剂量才能保持疗效。

3、引诱剂增添P-450含量、克制剂减少P-450含量的意义；

答案：

肝药酶引诱剂是指有些药物长久使用后能加快肝药酶的合成并增强其活

性，这种药物就称为肝药酶引诱剂。

药酶活性增添是机体对药物产生耐受性的主要原由，因药酶活性增添，促进药物代谢加快，而使机体对药物的反响性减弱。

如连续服用苯巴比妥后，不单使机体对苯巴比妥产生耐受性，又可使同时服用的其余药物药效减低，常需增添剂量才能保持疗效。

使肝药酶活性减弱的药物称肝药酶克制剂。

药酶活性降低促进药物代谢减慢，而使机体对药物发生中毒的可能性。

4、肝药酶的临床意义、耐受与交错耐受、及结适用药应注意的问题。

答案：

某些化学物质能提升肝微粒体药物代谢酶的活性，进而提升代谢的速率，此现象称酶的引诱。

拥有肝药酶引诱作用的化学物质称酶的引诱剂。

酶的引诱剂能促进自己代谢，连续用药可因自己引诱而使药效降低。

药酶活性增添是机体对药物产生耐受性的主要原由，因药酶活性增添，促进药物代谢加快，而使机体对药物的反响性减弱。

常有的引诱剂有苯巴比妥和其余巴比妥类药物、苯妥英钠、卡马西平、利福平、水合氯醛等。

酶的引诱作用可产

生两种临床结果。

①使治疗成效减弱：

因为药酶引诱后辈谢加快、增强，导

致血浆药物浓度降低，进而使治疗成效减弱。

比如苯巴比妥是典型的酶引诱

剂，它能加快华法林的代谢，使其抗凝成效降低。

②使治疗成效增强：

甚至

产生毒性反响，这主假如指那些在体内活化或产生毒性代谢物的药物。

比如

乙醇是肝CYP2E1的酶引诱剂，长久喝酒可增添对乙酰氨基酚的肝毒性。

交

叉耐受—crosstolerance作为个人使用某物质的结果，而对从未接触过的

另一物质产生了耐受性。

这两种物质往常拥有近似的药理学效应。

结适用药

时注意认识所服药物是肝药酶克制剂仍是引诱剂，假如所服药物是克制剂，

那么此外的药物要适合减量，假如所服药物是引诱剂，此外所服药物应加量。

【注意事项】

1、操作要快（为了保护酶的活性）；

2、冰浴（为了保护酶的活性）；

3、血要放尽（P-450为血红素蛋白；血红素影响P-450）；

4、胆红素会影响P-450的测定；

5、通CO的速度不可以过快或过慢；

6、肝组织研磨到由血红色变为粉白色为止；

7、分光光度计上比色时，先测；再测；最后测Pheno。

【剖析议论】

1、不同的实验组P-450含量不同的原由；

2、肝药酶引诱剂增添P-450含量、克制剂减少P-450含量的意义；

附：

*按下式计算P-450含量：

P-450（nmol/g肝脏）=[（A450-A490）/E·L]*50000上式中，A=E·C·L

此中：

E：

P-450从490nm到450nm波长的示差光谱消光系数，本实验中E=104/cm·mmol·L；L：

比色杯厚度（光路长度）"1cm。

C：

溶液浓度A：

吸光度

【思虑题】

1、P-450在药物代谢转变中的作用是什么？

2、肝药酶引诱剂与克制剂的临床意义是什么？

3、药物的耐受与交错耐受与肝药酶有何关系？

4、结适用药应注意哪些问题？

实验题目：

磺胺药的药代动力学参数测算

DeterminationofthePharmacokineticParameters

forSulfonamides

【实验目的】

认识磺胺类药物在动物体内随时间变化的代谢规律，并掌握药代动力学参数的计算方法。

【有关理论】

磺胺类药物能与某些试剂发生反响生成有色物质，经过比色能够对其血浓度进行定量检测。

酸性环境下，磺胺类药物的苯环上的氨基（-NH2）离子化生成铵类（-NH3+）化合物，与亚硝酸钠发生重氮化反响，生成重氮盐（-N=N+-）。

对这种化合物在525nm波长下测定其吸光度（OD），其OD值与磺胺类药物的浓度呈正比。

【实验动物】

家兔，3kg左右。

【药品】

7.5%三氯醋酸，0.5%亚硝酸钠，0.5%麝香草酚，0.1%磺胺嘧啶，肝素等。

【实验器材】

兔台，手术器材一套，动脉插管，动脉夹，离心管10只，试管10只，小烧杯（10ml）10只，移液管（0.2ml，1ml，5ml，10ml）等，离心计，振荡器，分光光度计等。

【实验方法】

1．家兔麻醉后，分别颈动脉。

耳缘静脉注射肝素抗凝后，颈动脉插管，备取动脉血用。

2．取血：

取空白血样。

而后对家兔耳缘静脉注射磺胺嘧啶（SD，），分别于注射后0、3、5

15、30、45、60、90min时取动脉血。

3．测定血药浓度：

严格依据下表中的次序加药：

注意事项：

A．加取血样的吸量管为同一只，所以应先取空白血样，分别加到比较管和标准管中后，再从注射后90min时的血样开始取起，而后是注射后60、45、30、15、5、3、0min的血样。

B．每只试管内，先加三氯醋酸，再向此三氯醋酸内加入血样，加完血样后立刻振荡，不然会很快发生凝结，影响结果的正确性。

C．显色剂的次序必定不可以错，应在加完亚硝酸钠后再加入麝香草酚。

D．SD的血药浓度单位为mg/ml。

【计算】

依据标准管的药物浓度及其光密度值，可计算出样品管内的药物浓度。

公式以下：

OD样品/OD标准=C样品/C标准

【曲线拟合】

将所测得的血药浓度值与时间经过计算机进行曲线拟合，式以下：

获得药时曲线，表达公

Ct=Ae-at+Be-bt

此中，

Ct：

时间t后的血药浓度

A：

散布开始时的血药浓度；

a：

散布速率常数；

B：

除去开始时的血药浓度；

b：

除去速率常数。

【作图】

在半对数坐标纸上以时间（t）为横坐标，实测的光密度值换算而得的血药浓度的对数为纵坐标，绘出时量曲线图。

【剖析议论】

依据所获得的药时曲线议论SD的药代动力学特色。

【思虑题】

1、一级代谢动力学与零级代谢动力学各有什么特色/

答：

一级除去动力学（first-ordereliminationkinetics）是体内药物在单位时间内除去的药物百分率不变，也就是单位时间内除去的药物量与血浆药物浓度成正比，血浆药物浓度高，单位时间内除去的药物多；血浆药物浓度低时，单位时间内除去的药物也相应降低。

（一）一级动力学除去药物有以下特色：

体内药物按刹时血药浓度（或体内药量）以恒定的百分比除去，但单位时间内实质除去的药量随时间递减。

药物除去半衰期恒定，，与剂量或药物浓度没关。

绝大部分药物都按一级动力学除去，这些药物在体内经过4~5个t1/2后，体内药物可基本除去洁净。

每隔一个t1/2（药物半衰期）给药一次，则体内药

量（或血药浓度）可渐渐积累，经过4~5个t1/2后，除去速度与给药速度相等，达到稳态。

零级除去动力学（）是药物在体内以恒定的速率除去，即无论血浆药物浓度高低，单位时间内除去的药物量不变。

零级动力学药物除去过程特色：

单位时间里按恒

定的量衰减，又称恒量除去。

血浆药时曲线浓度取算术刻度时是一条直线。

血浆除去半衰期不是一常数。

频频给药，理论上无稳态浓度，易积蓄中毒。

2、什么是房室模型？

依据本实验的结果，判断磺胺嘧啶在家兔体内的房室模型

属于哪一类。

答案：

药动学往常用房室模拟人体，只需体内某些部位接受或除去药物的速率相像，即可纳入一个房室。

房室模型仅是进行药动学剖析的一种抽象观点，其实不必定代表某一特定解剖部位。

把机体区分为一个或多个独立单元，可对药物在体内汲取、散布、除去的特征作出模式图，以成立数学模型，揭露其动向变化规律。

假定机体给药后，药物立刻在浑身各部位达到动向均衡，这时把整个机体视为一个房室，称为一室模型或单室模型（one-compartmentmodel）。

假定药物进入机体后，刹时便可在血液供给丰富的组织（如血液、肝、肾等）散布达到动向均衡，而后再在血液供给较少或血流较慢的组织（如脂肪、皮肤、骨骼等）散布达到动向均衡，此时可把这些组织分别称为中央室和周边室，即二室模型

（two-compartmentmodel）。

注：

多半状况下二室模型能够正确地反应药物的体内过程特色，但一房室模型固然正确性稍差，却比较简单，便于理解、推行、应用，且有些药物用单室模型办理已能知足要求，所以其重要性其实不亚于二室模型。

实验题目：

传入迷经系统药物对血压和血液动力学的影响

EffectofDrugsAffectingtheAutonomicNervous

SystemonBloodPressureandHemodynamics

【实验目的】

察看传入迷经系统药物对血压及血液动力学的影响和这些药物之间的相互作用。

掌握麻醉动物急性血压的记录方法及动物的心导管技术。

【有关理论】

1、传入迷经系统药物经过作用于心脏和血管光滑肌上相应的受体产生心血管效

应，使血压，心率和心肌缩短性发生相应变化。

血流动力学方法是研究药物对心

血管功能的影响时较常用的一种手段。

本实验经过察看动物血压和血液动力学的变化，剖析肾上腺素受体激动剂与拮抗剂以及胆碱受体激动剂与拮抗剂之间的相互作用。

2、左室内压（LVP）：

目前、后负荷增高时，正常心脏的心肌缩短力增强，LVP即增高。

LVP可插入心导管，由压力感觉器测得。

心导管插入方法有逆行插入法

（临床多用）：

逆血流方向，由一侧颈总动脉插入；还有室壁直接插管（危险大，操作复杂，目前少用）。

3、血压（BP）：

包含缩短压SAP，舒张压DAP。

4、左室压力变化速率（dp/dt）：

是评论心肌缩短性能的常用指标；必定程度上反应室壁张力的变化速率；当心率、前后负荷不变时，dP/dt增添表示心肌缩短性能增强。

【实验动物】

家兔。

【实验药品】

3%戊巴比妥钠，0.5%肝素,0.002%肾上腺素，0.003%去甲肾上腺素，0.001%异丙基肾上腺素，0.5%酚妥拉明，0.1%普萘洛尔，生理盐水N.S.。

【实验器材】

兔台，手术器材，气管插管，动脉插管，动脉夹，静脉插管，压力换能器，Powerlab仪器，心导管，注射器，丝线，纱布等。

【实验方法】

1．称重，麻醉：

3%戊巴比妥钠（可略加热溶解），30mg/kg（1ml/kg），耳缘静脉注射。

注射不宜过快，不然易致呼吸肌麻木。

将动物背位固定于手术台上。

2．手术：

（1）剪去双侧腹股沟处的毛，在股动脉搏动显然处，沿股动静脉走向纵行剪开皮肤约3~4cm，分别右边股A，下穿线备用（观察BP用）；并分别左边股静脉，下穿线备用（静脉给药用）。

（2）剪去颈部的毛，正中切开颈部皮肤，分别右边颈总A，下穿线备用（尽量分别出较长的一段，逆行插管后观察LVP用）；

3．翻开Powerlab，换能器内预充注肝素（注意排尽气泡；熟习三通管的方向）。

4．肝素化：

股静脉插管，0.5%肝素静注1ml/kg。

5．动脉插管：

（1）股A插管，观察并记录BP；

（2）颈总动脉逆行插管，观察并记录LVP，LVP/dt。

当导管插入必定长度后（可在插管从前，于体外估测一下导管大体的进入长度），当心操作，有一种打破感

和落空感，同时血压波形变为室内压波形（舒张压降为0mmHg或更低，缩短压更

高，整个脉压差增高，波型幅值显然高于动脉血压波形的幅值。

拜见下边的表示图）。

注意：

插得稍浅时易于被血流冲出心脏，则波形又答复为动脉血压波形；插得过深时堵在心室壁上则记录不到波形，甚至刺破心脏。

所以在操作时应联合体外估测长度、手感以及血压波形的变化进行判断。

6．观察并记录一段正常图形；

7．给药并进行察看、记录：

（1）肾上腺素（Adr）→去甲肾上腺素（NA）→异丙基肾上腺素（Iso）→酚妥拉明，5分钟后→再次赐予去甲肾