形态学技术 复习答案最终权威版doc.docx

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形态学技术复习答案最终权威版doc

名词解释：

取材：

从动物体或人体体内取下所需观察的组织材料的过程。

用，将组织或细胞结构保存起来，不使其改变形态的一种手段。

脱水；利用某种化学试剂逐步地将组织内部的水分置换出来，以使组织内部处于无水的状态过程。

透明；利用化学试剂既能与脱水剂混合又能与石蜡液相融合的特性，置换标本内脱水剂成分，为浸蜡做准备。

媒染剂；凡是能与组织及染料结合生产色淀（Lake）且可促进染色反应的一类金属离了盐。

促染剂；凡能增强染料的染色能力而其本身不参与染色反应的一类化合物。

单一染色；用一种染料对组织细胞中的某一种结构（成分）进行染色的方法对比染色；用两种不同性质的染料进行染色的方法。

复合染色；用二种以上的染料对多种结构（成分）染色的方法。

异染性：

异染性原译名为因光而产生的异色现象，是某些碱性染料在一定条件下对酸性糖共辄物染色时，其染料呈现的颜色与被染对象的染色结果不同，这种现象在形态学技术上称为异染性。

这种碱性染料称为异染性染料。

酸性染料；含有酸性助色团可与碱（如钠、钾、钙）作用生成盐，其水溶液电离产生有色阴离了的染料。

多作为细胞质染色剂伊红

碱'性染料；含有碱性助色团能与酸（硫酸、盐酸）结合形成盐类，电离后产生有色阳离了的染料O多作为细胞核染色剂苏木精

中性染料。

由酸性染料和碱性染料混合后中和而成的一种复合染料。

由于其分子很大，水溶解度较低，常用醇类作为染液溶剂。

Wright染料、Giemsa染料。

简答题

1石蜡切片HE染色的制作步骤。

取材固定脱水透明浸蜡包埋切片染色固封

（十八个字就够了，下面帮助理解）

1）取材：

从动物体或人体内取下所需观察的组织材料的过程，要求组织要新鲜

2）固定：

从动物体或人体上取下的组织材料立即放入化学试剂中，利用化学试剂的作用，将组织和细胞结构保存，且不使之改变形态的一种手段。

这种化学试剂成为固定剂。

3）脱水：

利用某种化学试剂，将组织内的水分逐渐置换出来，使组织内部处于无水状态的过程。

4）透明：

利用化学试剂既能与脱水剂相溶乂能与石蜡相溶的特性，将脱水机从标本组织中置换出来，并为浸腊做准备。

5）浸腊：

透明后的标本投入到温度适宜的石蜡中置换出透明剂的过程

6）包埋：

与浸腊一起目的在于将透明剂从组织中置换出来，使石蜡渗入组织内部，再利用石蜡冷却的过程进一步增强组织硬度而成为适宜的固体，便于组织切片。

7）切片

8）染色：

通过染料的作用，不同组织或组织内不同成分对染料的亲和力不同，在光的作用下显示出不同的折射率，增强组织的分辨率，使组织各种结构更好的显示出来,便于显微镜观察。

9）封固2动物处死的方法。

主要依据动物的种类、动物的大小、取材的手段以及观察的组织结构特点，选用动物处死的方法。

（1）麻醉的方法1）吸入麻醉法乙酰、三觥甲烷（氯彷）

2）注射麻醉法4%戊巳比妥、20%氛基甲酸乙酯、1%水合氯醛按照动物的每公斤体重给予药量

（2）空气栓塞方法通过|何动物静脉内注射一定量的空气，使其心脏在暂短的时间内发生急性空气栓塞，从而造成机体血液循环障碍，导致动物痉挛而死亡

（3）断头法动物在极短的时间内死亡，避免处于濒临死亡的痛苦，有利于组织或细胞结构的保存，其次放掉动物的血液可减少了取材过程中不必要的过多出血现象。

（4）其它方法脱臼（断髓）法小鼠股动脉放血法

3取材的注意事项。

1）处死动物要迅速。

2）组织细胞材料要新鲜，动物处死后应立即取材。

3）取材时所使用的解剖器械要锋利严禁组织受到器械性或人为的损伤

4）组织块大小要适宜，既要保证组织结构的完整性，乂要力求组织小而薄（＜3〜4mm）

5）组织材料的清洁性

6）取材部位准确

4影响固定作用的因素。

1）温度提高固定剂的温度，可增加固定剂对组织细胞的渗透率，同时也增大了组织细胞的白溶性和弥散性。

2）标本大小标本厚度将直接影响固定剂对标本的渗透速度。

3）容积率指固定剂体积与标本体积的比率最佳的固定标本的容积率为20〜30:

1

4）固定时间通常情况下，固定时间是指将标本材料投入到固定剂中开始到标本完全

被固定为止的这段时间。

5）pH光镜研究中，固定剂的pH对标本固定的作用并不是一个非常重要的因素。

许多固定剂的pH属于偏酸性的，通常很少对组织细胞结构产生细微的差异，但有时会给染色带来影响。

6）固定剂的穿透率穿透率实际上是指固定剂穿透标本的力景。

穿透力强而迅速，才能在较短的时间内将标木内外的结构得到充分地固定。

另外通过穿透率也可以预知不同大小的标木需要多少时间被完全固定。

7）渗克分子浓度（渗透压）光镜研究对固定剂的渗透压要求不严格，甚至可以忽略它对组织细胞的影响，但是由于渗透压的高低而对组织细胞造成的损伤并不能在后期的标本处理过程中得到改善和修复，反而会更加严重。

8）振荡与否组织固定中，通常是将标木材料静置浸泡于固定剂中，固定剂中的化学成分向标本内浸透，而标本内的液体成分向固定剂扩散，慢慢地就会在标木表面形成一个层流层（层流区域），在这个区域里固定剂中的有效化学浓度逐步降低，而真正在标本表面开始浸透的有效化学浓度就可能更低，也就是使得固定剂对标本内部的渗透性大大地减弱，从而直接影响着标木固定的效果。

5单一固定剂和混合固定剂的概念和特点。

1）单一固定剂：

选用一种化学试剂作为组织的固定剂

甲醛、冰醋酸、氯化汞、乙醇等

只对某种或某一类成分固定较好

2）混合固定剂二种或二种以上的化学试剂按照一定的比例混合而成的溶液

6福尔马林的

定特点。

福尔马林不能沉淀蛋白质和核蛋白，属于非沉淀性固定剂。

它对于脂肪、神经、类脂质等成分有较好的固定效果。

可以固定高尔基体、线粒体等胞内成分。

福尔马林既可以作为单一固定剂也可以作为混合固定剂的组份。

7福尔马林固定剂的特性。

福尔马林作为固定剂，渗透标木能力强，固定均匀且产生的收缩小，能使标木硬化并增强标木的弹性。

福尔马林是强还原剂，不可与重倍酸钾、四氧化饿等氧化剂长时间混合使用，会导致固定剂产生沉淀而混浊，使固定剂实效。

福尔马林固定剂要求pH=7.0.7.2的中性环境，在此种甲醛以单质形式存在。

甲醛易于氧化成甲酸，使福尔马林呈酸性。

酸性环境中，甲醛单体聚合，形成白色物质或絮状物（多聚甲醛）沉淀于瓶底。

酸性的福尔马林会使细胞嗜酸性染色，甚至影响细胞核的染色。

一般在福尔马林中加少量碳酸钙或碳酸镁作为中和剂，缓冲pH值。

810%福尔马林配制方法。

10%中性福尔马林水溶液：

37%-40%甲醛福尔马林100ml+蒸馅水900ml

9酒精脱水剂的特点。

对标木具有很强的脱水力，其穿透标木的速度很快，可产生明显的标木收缩。

高浓度的酒精又可增大标木的硬化和脆性。

1）能与水按任意比例混合

2）具有高浓度，也就是具有无水的特性

3）高浓度的脱水剂能与透明剂任意混合

10标本脱水不净的弊端。

1）阻碍标本的透明和浸蜡

2）影响高质景石蜡切片的获取

3）标木蜡块的保存会出现其表面凹陷的现象

11影响标本脱水的因素。

1）标木材料的种类

结构疏松的标木脱水时间相对短一些，如肺、胚胎。

结构致密的标本则要长一些，如肝脏、大脑等。

2）标本大小及厚度标本应小而薄（＜3〜4mm）,主要是有利于脱水剂对标本的渗透。

3）脱水剂的选择通常使用酒精作为脱水剂

4）脱水过程的外界因素主要是指温度、振荡与否。

12二甲苯透明剂的特点。

二甲苯为无色透明的有机溶剂，易挥发，易溶于酒精和石蜡，能与封固剂（树胶）混合，但不能与水混合，若遇到水则溶液为乳浊液。

透明能力很强，脱脂能力也很强，常规标本透明为2〜3h。

最大缺陷：

停留时间过长，易使标本变硬、变脆。

13标本石蜡包埋的注意事项。

1）标本的切面向下。

2）标本摆放要有一定的行距和间距。

3）包埋时动作迅速，不要使蜡液凝固。

4）包埋后应快速冷却，包埋器入水冷却时不要造成“出塔”的现象。

14石蜡切片制作的质量保证与哪三方面有关。

1:

1

1）切片机和切片刀的质量

2）标木材料的处理过程

3）实验者的切片技术

15石蜡切片展片的标准。

组织变白且周围石蜡成透明，组织完整、无裂口或撕裂，无皱褶、无气泡。

16石蜡切片操作所遇到的常见问题。

（问题、原因、纠正方法一详见纸版总结）

1）石蜡块切斜了

2）蜡片黏附在石蜡块表面

3）蜡片有碎的现象

4）蜡片有刀口或刀痕

17亲银性反应和嗜银性反应的概念、区别及各自的代表方法。

1）亲银性反应银离了与组织结构或细胞反应且直接转化并沉积为金属银的反应。

Fontana—Masson法。

2）嗜银性反应银离了与组织结构或细胞反应且通过外源性还原剂或阳光作用，银离了才能还原为金属银的反应。

Grimlieur法。

18渐近性染色和退行性染色的概念及染色特点。

1）渐近性染色

特点

2）退行性染色

特点

将组织细胞染色到一定时间后，使组织细胞颜色对所要观察的结构能分别显示出来，并达到鉴别要求的程度的染色。

被染结构或细胞由浅渐步加深，逐渐着色而其它组织的结构均不被染上颜色。

多用于特殊染色方法后的细胞核染色组织细胞过度着色，即全部被着上颜色，再经褪色（分色）方法处理，除去多余的组织细胞结构的颜色，保留需察的结构颜色并使其显示出来的染色过程。

多染色多褪色，分去不需要的颜色，便于控制染色的程度，有利于多种染色的进行

19苏木精氧化方式及特点。

1）自然氧化（自然成熟）空气和口光下，需要3〜6个月。

特点能较长时间的保留苏木精的染色能力配制时间愈久，染色力愈强。

2）化学氧化（快速成熟）氧化剂使氧化过程在瞬间完成。

特点不能较长时间维持苏木精的染色能力使用周期缩短很多。

20伊红的染色特点。

伊红是一种很好的细胞质染料，常与苏木精配伍进行对比染色，应用极为广泛。

其特别的价值在于可准确地分辨出不同类型细胞的胞质及不同类型的结缔组织纤维，通过染色所呈现的不同程度的红色来表现的。

常规使用的伊红水溶液的浓度为0.5〜1%,其最佳的染色pH范围在4.6-5.0之间，伊红的染色力是随着染液配制时间的延长而增强的，主要是其中的酸性程度提高所致。

=1

21苏木精•伊红染色步骤的作用及注意事项。

（详见纸版总结）

1）组织切片二甲苯脱蜡下行至蒸俺水。

二甲苯：

脱蜡酒精：

逐步除去二甲苯，使水溶入切片内

2）苏木精（Ehrlich's）染液，10〜15min

3）分色：

0.5〜1%的盐酸酒精（70%酒精），数秒

4）蓝化：

0.5〜1%氛水，1〜2min,显微镜下观察细胞核，流水冲洗，3min

5）1%伊红水溶液，5〜10min

6）蒸僵水快洗

7）常规酒精依次脱水上行，二甲苯透明，树胶封固。

作用及注意事项：

1.二甲苯：

第一次为脱蜡，使石蜡溶解在二甲苯中；第二次为透明，二甲苯与组织的折射率相近，二甲苯处理后增强了组织折光率，达到清晰观察的目的。

2.酒精：

逐级下行为水化，逐渐褪去二甲苯，使水进入组织内，便于染色；逐级上行为伊红分色（70-90）并脱水，将组织中的水置换出来，为透明做准备。

3.碘酒：

脱去氯化汞颗粒

*如果在90%和80%酒精中加入1%氨水，则可脱去福尔马林色素

*碘酒后在如70%酒精，则可脱去Bouin液的黄色

4.蒸俺水：

蒸俺水浸洗除去切片上多余酒精，为染色做准备，

*蒸偏水不能换成自来水

苏木精染色后日来水冲洗为洗去浮色

酸酒精分色后快洗为停止分色

蓝化后水洗为洗去疑水

伊红染色后蒸馅水快洗为洗去浮色，避免过多染液进入酒精

5.分色：

退行性染色染液过量，组织细胞全部着色，用分色液洗去除欲染色结构以外的染料，保证被染结构能够被清楚的分辨。

（苏木精染色后的分色为了褪去除细胞核和嗜碱性颗粒以外的颜色，伊红染色后分色为洗去过多的红色，保证对比分明）

每次分色不可时间过长，分色后立即蒸饱水快洗，要少分、多次，避免分色过度

6.蓝化：

苏木精染料呈弱酸性，棕红色，但在弱碱性环境下呈蓝紫色。

这种弱碱性处理即为蓝化。

目的是使细胞核与细胞质（红）有良好的对比。

7.两次镜检：

蓝化后镜检，细胞核应和嗜碱性颗粒为蓝紫色，细胞质着色浅，背景浅灰蓝色；伊红分色后镜检红色、蓝色应均衡，以对比鲜明为标准。

特殊染色方法的染液配制方法、染色步骤的作用及注意事项。

1.胶原纤维的Masson染色。

1）染液配制

Weigert铁苏木精：

Biebrich猩红•酸性复红染液:

90ml

10ml

1ml

2.5g

2.5g

100ml

l%Biebrich猩红水溶液

冰醋峻

磷鸨酸•磷钥酸水溶液:

1%酸性复红水溶

磷钙酸

磷钥酸

蒸儒水

苯胺蓝溶液：

将2.5克苯胺蓝溶于100ml的沸水中，溶解后加入2ml冰醋酸，冷却并过滤。

亮绿溶液:

将0.2克亮绿溶于100ml的沸水中，溶解后加入0.2ml冰醋酸,冷却并过滤。

1%醋酸水溶液：

冰醋酸1ml,蒸馄水99mlo

2）步骤方法

1）组织切片二甲苯脱蜡下行至蒸饲水。

注意：

若用含有钗化未成分固定的组织，切片下行过程中要脱去组织内汞的沉淀颗粒。

2）入Weigert*s铁苏木精染细胞核10T5分钟。

3）流水冲洗，10分钟，光锐下镜检。

也可用1%盐酸乙醇分色，光镜下镜检控制，流水冲洗5分钟，蒸俾水浸洗。

4）Biebrich猩红-酸性复红染液15分钟，蒸饲水洗。

5）磷钙酸-磷钳酸水溶液分色（通常情况下室温10T5分钟）,镜下控制。

6）速洗入苯胺蓝或亮绿溶液复染10-20分钟，蒸馅水洗。

7）1%醋酸水溶液分色3-5分钟，镜下控制。

8）95%酒精脱水上行，透明，封固。

2.弹性纤维的Gomori醛品红染色、地衣红染色。

1）染液配制：

碱性品（复）红0.5g

100ml

1ml

1ml

70%酒精

三聚乙醛

浓HCL

2）操作步骤：

1）常规石靖切片脱蜡下行至蒸馄水。

注意若用含有氯化汞成分的固定液固定的组织,切片下行时要脱去组织内汞的沉淀颗粒。

2）0.125%酸性高猛酸钾溶液染色3-5分钟，蒸馅水速洗。

3）5%草酸漂白至组织变为白色止，流水冲洗草酸3分钟。

4）经70%酒精浸泡后，切片入醛品红染液15-30分钟。

5）70%酒精〜95%酒精分色、脱水。

6）显微镜镜检：

主要看弹性纤维的清晰程度，背景无色。

7）常规酒精依次脱水上行，二甲苯透明，树胶封固。

地衣红：

1.组织切片二甲苯脱蜡下行至70%酒精。

注意：

若用含有氯化汞成分的固定液固定的组织，切片下行过程中要脱去组织内汞的沉淀颗粒。

2.切片入地衣红染液染色，室温染色17小时以上。

3.70%酒精分色，必要时可使用酸酒精（0.5-1%）分色。

4.显微镜镜检，主要看弹性纤维的清晰程度，背景着色浅。

5.常规酒精依次脱水上行，二甲苯透明，树胶封固。

3.网状纤维的Foot镀银染色。

1）染液的配制：

10%AgN03水溶液+LiCo3饱和水溶液

淡黄色沉淀一静置片刻，倾去上清液一一加蒸馅水到25匝，静置（主要目的是洗沉淀），倾去上清液，反复洗三次后，再加蒸偏水到25印1后滴加浓氨水，边滴加边搅拌，直到沉淀恰好刚刚溶解为止.，液体有淡淡的缄水味一-后加蒸偏水到100ml0

2）步骤方法：

1）常规石蜡切片脱蜡下行至蒸馆水。

2）切片入0.25%KMn04氧化2-5分钟，蒸饱水洗。

3）入5%草酸1・2分钟或到组织变白为止。

4）流水冲洗2・3分钟，D.W反复浸洗2-3次。

5）入氨银液56°C15-30分钟。

6）D.W速洗。

7）20%福尔马林还原5分钟。

8）流水洗2-5分钟。

蒸馅水反复洗2-3次，显微镜检查。

9）入0.2%氯化金调色5分钟，切片变为灰黑色。

10）蒸僧水洗，入5%海波（硫代硫酸钠）定影1-2分钟。

11）流水冲洗2分钟。

12）常规酒精脱水上行，二甲苯透明，树胶封固。

注意：

1）切片的要求：

%1除石蜡切片外，冰冻切片与火棉胶切片均可，只是效果差于石蜡片。

%1固定剂：

莒种固定剂均可，以10%福尔马林为最好。

%1切片厚度：

10微米（8-12微米）。

%1烤片的要求：

充分烤片，也可选用APES切片。

2）铉银液的配制与操作中的注意：

%1氨银液配置好后应呈极轻度的混浊状态，若清澈透明则说氛液加过量了，为避免过量，应保留极少量沉淀颗粒存在；

%1配制所使用的各试剂应纯度较高及新鲜，LiCo3需使用饱和水溶液，滴加氛水时需边滴加边搅动，避免过量，溶液现配现用，保存时间不宜过长。

%1实验操作中避免任何金属器械接触铉银液或氯化金，防止污染。

3）对玻璃器川L的要求：

配制所用的玻璃器仙.都需经清洁液处理，保持化学纯净，无汕渍,操作中应避免金属器械、手与液体直接接触。

4.肥大细胞的甲苯胺蓝染色。

1）步骤方法：

1）切片脱蜡下行至蒸馅水。

2）入0.2%甲苯胺蓝酒精溶液20-30分钟。

3）如需复染，蒸馄水速洗后入0.1%核固红水溶液30秒.1分钟。

4）蒸馅水速洗后甩干或吸干，镜检。

5）100%酒精快速脱水2分钟?

2次。

6）二甲苯透明，树胶封固。

5.尼氏体（神经元）的焦油紫染色。

1）染液配制：

0.5%焦油紫水溶液：

焦油紫0.5g,蒸御水100ml

混合后静置48小时以上，促其成熟。

0.25%冰醋酸（95%）乙醇溶液：

2）步骤方法：

1）切片脱蜡下行至蒸馅水。

2）0.5%焦汕紫水溶液染色，10-20分钟。

30蒸儒水快洗。

4）0.25%冰醋酸（95%）乙醇溶液分色2-3秒，水洗后镜检。

5）擦干载物片表面水后入100%酒精快速脱水2次，2・3分钟/次。

6）二甲苯透明，树胶封固。

6.PAS染色

1）染液配制：

高碘酸水溶液：

高碘酸0.5g

蒸馅水100ml

1NHC1配制（按1000ml用量）：

HC1（浓度36%）85.6ml

蒸馄水914.4ml

亚硫酸氢钠溶液：

10%亚硫酸氢钠5g

IN盐酸5ml

蒸馄水90ml

Schiff试剂配制：

1.将0.25g碱性品红加入到50ml煮沸的蒸偏水中，边放入边搅拌，至完全溶解。

2.待温度降至60-70°C时过滤至锥形瓶中。

加5mllNHC1于瓶中，搅匀。

3.加入NaHS030.5g于瓶中，塞紧瓶口,摇荡，至NaHS03完全溶解，用黑纸将瓶包严至阴暗处过夜。

4.次II,加0.5g活性炭于瓶中，摇匀后迅速过滤于棕色瓶内。

若滤液带黄色，可再加些活性炭吸附至滤液无色。

保存于4C冰箱中备用。

2）步骤方法：

1）切片脱蜡到水。

2）入0.5%高碘酸水溶液，2-5分钟。

3）蒸馆水充分洗涤。

4）入Schiff试剂，10-20分钟（暗处）o

5）入新配制的亚硫酸氢钠溶液中，换洗2次，每次2分钟。

6）自来水冲洗5-15分钟。

蒸僵水浸洗

7）入Mayer's苏木精中复染核30秒T分钟。

8）白来水蓝化5分钟后脱水上行，透明封固

3）注意事项：

1.对照实验：

切片不经高碘酸氧化直接入Schiff试剂，若反应呈现阳性结果，则说明为假阳性，可能是组织中内源性的醛基、酮基等所致。

2.由于糖原会很快分解，因此糖原标木的取材与固定应及时。

固定可以选用选用Carnoy液、纯酒精和甲醛固定液等。

3.Schiff试剂使用的亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠质量要优良，尽量选用优级醇。

4.Schiff试剂应保存于洁净，密封好的有色瓶中，选用黑纸或黑色塑料袋包裹，放于4°C冰箱保存，一旦由无色变红色，就失去其染色作用。

免疫组织化学

1单克隆抗体与多克隆抗体

1）单克隆抗体（Monoclonalantibody）

只针对抗原中某一抗原决定簇,与抗原上的一个结合点反应

特异性强，敏感性高，但亲和力和染色反应上不如多克隆抗体

2）多克隆抗体（Polyclonalantibody）

针对抗原表面多个决定族的，与抗原上的多个结合点反应

特异性和敏感性不如单克隆抗体，但亲和力和染色反应上较强

2免疫组织化学与普通组织学在标本固定上的异同

相同点：

固定目的——保持标本良好的形态结构。

固定剂——10%中性福尔马林溶液，4%多聚甲醛，Bouin固定剂。

固定作用——使组织或细胞内的蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性酶活性。

固定方式灌注固定，组织固定，微波固定。

固定时间——与标本本身的物理属性，化学属性，固定剂的种类，性质及固定温度有关。

不同点：

固定目的——免疫组化还需保存标本内组织细胞的抗原性。

固定剂一一普通组织学的固定剂种类繁多，除以上三种外还有甲醛，冰醋酸，混合固定液等，而目前尚无一种固定剂可以用于各类不同性质的抗原的固定，免疫组化较为公认的应用广泛的固定剂只有10%福马缓冲和4%多聚，Bouin仅适用于某些抗原的保存。

固定作用——免疫组化还要求最大限度地保存组织或细胞的抗原，使水溶性抗原转变为不溶于水和有机溶剂的非水溶性抗原，防止抗原发生弥散，保持组织或细胞的完整性和所要检测物质的抗原活性，以避免标本的假阳性或假阴性结果的出现。

固定方式——普通组织学还有蒸汽固定，涂片固定和散在的细胞固定儿种固定方式。

固定温度——普通组织学固定最适温度为20°C-25°C，而免疫组化有时需根据抗原抗体性质来改变固定温度，有些抗原固定过程需要低温4°Co

3石蜡切片制备（操作）中免疫组织化学技术与普通组织学技术的区别。

免疫组织化学的石蜡切片技术过程与常规石蜡切片即染色过程基本上是一•样的，基本过程也要经过9个步骤：

取材固定脱水透明浸蜡包埋切片染色固封，只是在某些步骤的具体操作上略有差别，但整体上的实验操作要求则更加严谨、准确。

1）取材:

免疫组织化学技术对组.织标木取材操作要求比普通标本取材更高、更严格,其最终目的就是最大限度地保证标本抗原的活性和数量。

应尽量保证所取材料标本形态的完整性和新鲜性。

取材要求准确、迅速和完整，以免因操作不当造成抗原破坏或丢失，影响实验结果的正确性。

2）固定:

要求略有不同，除了两者均要保持标木良好的形态结构外，免疫组织化学技术更加要求保存标木内部或细胞抗原的免疫活性，这就使得标木固定具有更深一层意义。

这就要求不仅是组织或细胞内的蛋白质凝固，直至或抑制外源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度地保存组织或细胞内的抗原性，使水溶性抗原转变为不溶于水和有机溶剂的非水溶性抗原，防止抗原发生弥散，保持组织或细胞的完整性和索要检测物质的抗原活性，以避免标木的假阳性或假阴性结果的出现。

选择适宜固定剂的标准主要有两个：

A：

最完整地保存组织或细胞的形态结构，使其更接近生活状态。

B：

最大限度地保存组织或细胞内的抗原免疫活性。

目前公认的：

10%福尔马林缓冲液（pH7.4）；4%多聚甲醛（pH7.4）是免疫组织或学技术中应用最为广泛的固定剂。

3）脱水，透明，浸蜡，包埋

用于免疫组织化学研究的标木处理过程，除了具有普通石蜡标本制备过程的特点外,还应具有以下的要求：

A：

标本的脱水、透明过程以适度为好。

标本在各级乙醇中停留时间不宜过长，同时还要考虑抗原对温度（4°C或室温或370的敏感性，尽量减少标木内抗原的损失。

B：

固定后的标本修整，应在组织