八仙花茎段组织培养技术研究图文精.docx
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八仙花茎段组织培养技术研究图文精
西北林学院学报2008,23(4)。
101~103JoumalofNorthwestForestryUIliversity
八仙花茎段组织培养技术研究
雷亚灵,
李周岐。
(西北农林科技大学林学院,陕西杨陵712100)
摘
要:
以八仙花带腋芽茎段为外植体,研究了其组织培养技术。
结果表明:
以70%酒精处理30
s
+o.1%升汞处理10min,成活率可达96%;以MS+6一BAO.5mg/L+IBA0.5mg/L为启动培养基,诱导率可达100%;以Ms+6一BAo.5mg/L+IBAo.3mg/L为增殖培养基,培养25d,增殖系数可达9.2;以1/2MS+IBA0.3mg/L进行生根培养,生根率loo%,根长势良好且根毛区长达1.1cm;移栽到以珍珠岩:
腐殖土=1;2的基质中,覆盖地膜保湿7d,成活率可迭80%以上。
关键词:
八仙花;茎段;组织培养中图分类号:
S723.132
文献标识码:
A
文章编号:
1001—7461(2008)04一0101—03
TissueCultureofStemSegmentofHydr口”gP口优口cr0户^yZ如
LEIYa一¨ng。
LIZhOl卜qi。
(cDzzP耵o,Fo坩5t删。
ND一^讹“A&F哳i御"岫-y口玎譬lf行g。
S^口4刀矗712100.c^f触)
Abstract:
StemswithaxillariesbudofH3,d,u凡g眦,n口fro夕^yZZ口wereusedasexplants
to
conduceinvitro
culture.Theresultsshowedthattheoptimumdisinfectorwas70%alcoholfor30secondsandHgCl2for10
minutes.TheinductionculturemediumwasMS+BAO.5mg/L+IBAO.5mg/L
andtheratioofinduction
was
100%.TheoptimummultiplicationculturemediumwasMS+BA0.5mg/L+IBAO.3
mg/L
andafter
25daysmultiplicationcoefficientwas9.2.Therootingculturemediumwas1/2MS+IBAO.3mg/Land
theratioofrootingwaslOO%.and
the
root’s
growthwasbetterandthelengthofdistrict
root
hairswas
1.1cm.
When
transplantedinpotswiththemediumsof1perIite:
2humus.mostoftheseedingscould
growweU.
Keywords:
Hyd,’口,29P口m口c,_0户^yZZ口;stemswithaxillariesbud;tissueculture
八仙花(Hydr口nge口m口cro加yZ肠)别名粉团
讨,但对其中的一些问题,如不同激素浓度对增殖培花、紫阳花、草绣球、阴绣球等,为虎耳草科植物,落养的影响等未作具体研究,且其诱导培养基导致外叶灌木。
我国各地园林与民间常有栽培,变种很多。
植体愈伤化,有待进一步研究。
本研究在前人研究八仙花花期夏季,花洁白丰满,大而美丽,其花色能的基础上,以八仙花茎段为外植体,对其组织培养技红能蓝,令人悦目怡神,是常见的盆栽观赏花术进行更全面、系统的研究,以及为我国八仙花的大木[1、5],开发利用价值较高。
目前我国八仙花繁殖主要以扦插为主,这种方规模生产和新优品种的快速繁殖奠定基础。
式繁殖系数低,扩繁速度慢,不能满足园林绿地大面1
材料与方法
积种植的需要,对新优品种进行快速繁殖和八仙花的大规模工厂化生产产生了很大的阻碍[6J]。
利用1.1
材料
现代生物技术进行快速繁殖在国外未见报道,国内试验所用材料为蓝边八仙花,取自西北农林科
任叔辉等[8’。
]对八仙花的组织培养技术进行过探
技大学校园。
收稿日期:
2008—01—18修回日期:
2008一05—15
基金项目:
西安市科技计划项目“秦巴山区重要野生观赏树木引种驯化与快速繁殖技术研究”(FY07107).作者简介:
雷亚灵,女,西北农林科技大学林木遗传育种专业硕士研究生。
*通讯作者:
李周岐,男,西北农林科技大学林木遗传育种学教授,博士生导师.Bmile—L小ouqi@yahoo.com.cn
102
西北林学院学报
1.2
方法将材料在自来水下冲洗干净(用毛刷刷干净叶柄下的尘土),待用。
1.2.1
消毒用70%酒精10~30s不同梯度和
o.1%升汞4~14min不同梯度搭配,每个处理接种50瓶,每瓶接1个外植体,5d以后统计污染率,死亡率及成活率,研究其最佳消毒方法。
1.2.2启动和增殖培养以MS基本培养基,添加不同浓度的BA和IBA,组成9种培养基,每种培养基接种50瓶,每瓶接1个外植体,统计腋芽萌发的比例及萌发芽的生长状况;同样以MS为基本培养基,添加不同浓度的BA和IBA,组成11种培养基,每个组合接种50瓶,每瓶接3个带一个芽的无菌材料,25d统计增殖系数,观察材料状态。
1.2.3生根培养
以MS、1/2MS为基本培养基,
分别添加o.1、o.2、o.3、o.4、o.5mg/L的IBA,选取壮实的无菌苗,每种培养基接50瓶,每瓶1个材料,25d统计生根率、平均生根数及根毛区长度,研究适合生根的培养基及IBA的浓度。
1.2.4移栽以珍珠岩:
腐殖土一1:
2为基质,
用多菌灵灭菌,移栽后用地膜保湿7d以上,观察其
移栽效果。
2
结果与分析
2.1
消毒
八仙花茎段表面光滑,结构精密,消毒物质不易
渗入内部,故在消毒液中可以浸泡较长时间。
由表1中数据可以看出,在70%酒精中浸泡时间的长短对消毒效果影响很大。
根据表中数据,最好的消毒方式为70%酒精浸泡30s+O.1%升汞消毒10
min。
表l茎段消毒处理结果
Table
1
Theeffect3ofstem3disinfection
编号接种数7溜箩0‘聪磬赣裂裂愀
2.2启动及增殖培养
通过调整BA和IBA的浓度可以得到不同的诱导效果,但较高的IBA将会导致材料脱分化形成愈伤组织,较高的BA则会抑制分化芽的正常生长。
试验结果表明,在MS十BA0.5mg/L+IBAO.5mg/L的培养基中可以得到理想的培养效果,在接种后5d腋芽即开始萌发,10d左右即能伸出叶片,且无愈伤及其他异常情况出现(如图1)。
方差分析表明,IBA对八仙花不定芽的启动培养呈极显著影响(p=O.01)。
图l腋芽萌发
Fig.1
Sproutingofa】【i1Iarybud
图2
(6)号培养基增殖效果
Fig.2
ProliferativeeffectNO.6culturemedium
表2不同浓度BA、IBA对八仙花茎段启动培养的影响
Table
2
Effectofdifferent
concentrationsofBA,IBAon
stern-8egmentcultureofH.m吐frop^yf妇
编号。
。
群∽。
毒鬯,,萎蔷器
错
(1)O.10.18
芽生长缓慢.长势弱(2)O.5
0.15
芽生长较缓慢,倔芽超过顶芽
(3)1.O
O.1
6芽生长缓慢.成丛生状(4)o.10.5
5芽生长较迅速,无愈伤(5)O.5
0.55
芽生长迅速,无愈伤(6)1.O
0.56
芽生长较迅速,无愈伤
(7)0.11.05芽生长迅速,叶柄基本出现愈伤(8)O.51.05芽生长迅速,叶柄基本出现愈伤(8)
1.O
1.O
5芽生长迅速,叶柄基本出现愈伤
第4期
雷亚灵等八仙花茎段组织培养技术研究
103
表3不同激素浓度配比对增殖的影响
Table
3
2.3生根培养
由表3可以看出,利用1/2MS培养基能成功诱导八仙花生根,在一定激素浓度下虽然MS培养基也能诱导根原基的形成,并有部分根的出现,但达不到移栽的要求(如图3一a),不适宜八仙花的生根培养。
在1/2MS培养基中,随着IBA浓度的增大,诱导率有所升高,且诱导根数也有所增多。
根毛区作为根的生理功能的一个重要指标,当IBA浓度达到
O.4
Theeffectsofdiffercnt
ph”ohomon∞on
pr01iferation
编号。
。
}簟。
,。
。
群,,票蒙
蓑墓
mg/L时,大大的减少,增大到O.5mg/L时则
完全没有根毛区。
综合比较各项参数,以(8)号为最佳生根培养基(如图3七)。
方差分析表明:
IBA对
同样通过调整BA和IBA的浓度和比例来协调顶芽和腋芽的生长,使其处于一个对整体较有利的水平。
由表l可以看出,并非BA与IBA比值越高增殖系数越大。
在试验中观察到,顶芽的快速生长为增殖系数的提高提供了基础,而若顶芽不能快速生长,而材料整体将长期处于较弱小的体积,很难有高的增殖系数。
添加O.5mg/LIBA的培养基中材料普遍愈伤化,可见高生长素的培养基不适于八仙花茎段的培养,任叔辉等[8]的研究也表明了这一点。
通过表中数据比较,可以明显看出,(6)号为最佳的增殖培养基(如图2)。
方差分析表明:
BA对八仙花芽的诱导呈极显著差异(户=o.01),IBA对愈伤组织的诱导呈显著差异(p=o.014o)。
对诱导起主要作用的为BA,其次为NAA与IBA存在交互作用并且对愈伤组织诱导有显著差异(p=
O.0317)。
Fig.3
圈3The
于八仙花不定芽的生根有重要的影响。
MSand1/2MS
root
ofMSand1/2MS
2.4炼苗及移栽
待根长到2cm时打开瓶口炼苗3d,移栽基质参考黄作喜等m3扦插苗移栽的基质(珍珠岩。
腐殖土一1:
2),用多菌灵灭菌,移栽后用地膜保湿7以上,移栽到温室大棚中,成活率达80%以上。
d
表4不同培养基及IBA浓度对生根的影响
Table
4
Theeffect8ofd.fferentculturemediaanddensityof
IBA
onrooting
编号培养基
MS
IBA/(mg・L一1)
O00OO
l
诱导率/诱导根数
043718
根毛区长/cm
O0OOOL3
根的状态
只形成根原基,但没有长长只形成根原基,无根的伸出有根原基的出现,但无根伸出长到0.2~0.3cm左右即停止生长
长到o.2~o.3cIll左右即停止生长,有愈伤形成
生长速度快,形态正常生长速度快,形态正常生长速度快,形态正常
生长速度偏慢生长速度慢.有愈伤形成
2
34
51
2345
,
1/2MS0OO0
0
L
3
L仉
2
O
1
13
叭妣虮舭叭邮蝴州蝴
3
结论与讨论
消毒时先用70%酒精浸泡30s,利用酒精的强
养基效果较佳,激素的浓度配比对八仙花的培养效果有着显著的影响;在启动培养时添加o.5mg/
LBA和O.5mg/LIBA能取得较好效果;添加O.5
渗透力,再用o.1%升汞浸泡10min,可取得理想的消毒效果。
八仙花的诱导和增殖均以MS为基本培
mg/LBA和O.3mg/LIBA可达到最快的增殖速
(下转第108页)
108
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(上接第103页)
度。
生根时用1/2MS+IBAo.3mg/L可得到最好效果。
苗子的质量和移栽后的保湿是确保移栽成活的两大关键因素,健壮的苗子移栽后用地膜保湿7以上一般都可以成活。
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八仙花茎段组织培养技术研究
作者:
作者单位:
刊名:
英文刊名:
年,卷(期:
被引用次数:
雷亚灵,李周岐
西北农林科技大学,林学院,陕西,杨陵,712100西北林学院学报
JOURNALOFNORTHWESTFORESTRYUNIVERSITY2008,23(44次
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