HPLCESIMS法测定槟榔中的槟榔碱精.docx
- 文档编号:17403046
- 上传时间:2023-07-25
- 格式:DOCX
- 页数:10
- 大小:21.39KB
HPLCESIMS法测定槟榔中的槟榔碱精.docx
《HPLCESIMS法测定槟榔中的槟榔碱精.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《HPLCESIMS法测定槟榔中的槟榔碱精.docx(10页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
HPLCESIMS法测定槟榔中的槟榔碱精
农产品加工・学刊
2008年第4期
槟榔(arecanut,AN是棕榈科(palmae植物槟榔(arecacatechulinn.的干燥成熟种子,在我国主产于海南岛、台湾省、云南省河口及西双版纳热带雨林间。
槟榔作为一种常用中药,是54种棕榈科植物中惟一一种含有生物碱的植物,其生物碱含量为0.3% ̄0.7%,其中主要为槟榔碱(arecoline、槟榔次碱(arecaidine、去甲基槟榔次碱(guvacine等[1],均以与鞣酸结合的形式存在。
槟榔生物碱具有泻气攻积和杀虫行水的功效,可作强壮剂、消化剂、收敛剂、抗疟剂、消肿剂、镇咳剂和通经剂,也可与其他药物配制成利尿和治疗腹泻、食滞、水肿、腰痛、高山热、支气管的药丸,还是防治绦虫、蛔虫、姜片虫及家畜胃寄生虫的特效药[2]。
槟榔碱的测定方法主要有酸碱滴定法[3]、吸光光度法[4]和高效液相色谱法[5]等。
采用高效液相色谱—电喷雾质谱(HPLC/ESI—MS技术联用法测定槟榔
碱目前还未见报道。
HPLC/ESI—MS技术是样品经色
谱柱后流出液分微量进入质谱仪,质谱仪记录每个峰的质谱数据,根据每个峰的质谱数据特征,就可以确定每个峰的归属,从而不需用多种标准样品来确定每个峰的归属,使定性定量分析变得方便快捷。
因此HPLC/ESI—MS技术可以提供丰富的结构信息,显著提高了结果的灵敏度和准确性,操作简单[6]。
本文利用液相的分离和质谱的定性定量能力,建立了用HPLC/ESI—MS测定槟榔提取物中槟榔碱的方法。
1
仪器与试剂
1.1仪器
液相色谱—质谱联用仪:
Waters2695—Micro-massZQ2000型质谱检测器(含四元低压泵、自动进样器、单级四极杆质谱检测器、Masslynx工作站、
电喷雾电离源ESI
。
收稿日期:
2008-03-10
作者简介:
丁芳林(1965-,男,湖南人,副教授,研究方向:
分析化学教学与科研。
E-mail:
dfl1815@。
第4期(总第133期农产品加工・学刊
No.42008年4月
AcademicPeriodicalofFarmProductsProcessing
Apr.
文章编号:
1671-9646(200804-0076-04
HPLC/ESI—MS法测定槟榔中的槟榔碱
丁芳林1,彭书练2
(1.湖南生物机电职业技术学院,湖南长沙410127;2.湖南省农产品加工研究所,湖南长沙410125摘要:
建立槟榔中槟榔碱的高效液相色谱—电喷雾质谱(HPLC—ESI—MS检测方法。
通过优化色谱和质谱条件,以β-蒎烯为内标物,利用质谱定性和色谱定量测定槟榔碱的含量。
槟榔碱在质量浓度为10.8 ̄86.4μg/mL时的线
性关系良好,R=0.9985;最低检测限为0.4μg/mL(S/N=3
;最低定量限为0.9μg/mL(S/N=10;平均回收率为98.32%,RSD为3.44%(n=5。
该方法具有流动相简单、分析时间短,以及不需对样品进行衍生,操作简便、定量准确和抗干扰能力强等优点。
关键词:
槟榔;槟榔碱;高效液相色谱—电喷雾质谱
中图分类号:
TS201.2
文献标志码:
ADeterminationofArecolinefromArecaNutbyHighPerformanceLiquidChromatography/massSpectrometry
DingFanglin1,PengShulian2
(1.Hu'nanBiologicalandElectromechanicalPolytechnic,Changsha,Hu'nan410127,China;2.Hu'nanAgriculturalProductProcessingInstitute,Changsha,Hu'nan410125,China
Abstract:
Objective:
Todevelopahighperformanceliquidchromatography-electrospraymassspectrometry(HPLC-ES-MSmethodtodeterminearecoline.Methods:
TheinternalstandardwasC10H16.Arecolinewasidentifiedbyelectrosprayioniza-tionmassspectrometryandquantifiedbyhighperformanceliquidchromatography.Results:
Thecalibrationcurveswerelinearintheranges10.8 ̄86.4μg/mLforArecoline(R=0.9985,Theaveragerecoverieswas98.32%,RSD=3.44%(n=5.Determinationminimumwas0.4μg/mL(S/N=3.Quantifitionminimumwas0.9μg/mL(S/N=10
.Theaveragerecoveryofthemethodwas98.32%,RSD=3.44%(n=5
.Condusion:
Theproposedmethodhadtheadvantagesofeasyoperation,withoutderivation,lessanalysistime,goodprecisionandaccuracy.
Keyword:
arecanut;arecoline;highperformanceliquidchromatography/massspectrometry
2008年第4期
1.2试药剂
槟榔药材,购自长沙市老百姓大药房,经鉴定为棕榈科植物槟榔的干燥成熟种子;对照品氢溴酸槟榔碱,湖南省药检所提供;水为超纯水,其他试剂均为分析纯试剂。
2实验方法
2.1槟榔中槟榔碱的提取
将槟榔样品剪碎,置于温度60℃的烘箱中烘干,用粉碎机粉碎成粉末,过20目筛,备用。
精密称取槟榔粉末8g,置于100mL具塞锥形瓶中,加水4mL,振摇使粉末润透,加入浓度为0.2mol/L的Na2CO3—NaHCO3溶液(取Na2CO3・10H2O5.72g及NaHCO31.68g溶于配成100mL的水溶液4mL,摇匀,加入乙醚80mL,超声处理20min,用脱脂棉过滤,残渣分别用50mL水—饱和乙醚超声提取2次,每次20min,合并乙醚液,置于温度40℃的水浴锅中挥发去乙醚至约10mL,定量转移至25mL容量瓶中,用乙醚定容至刻度,此为供试品溶液[7]。
2.2内标物的制备
用移液管精密吸取1mLβ-蒎烯,置于50mL容量瓶中,用无水乙醚定容,再精密吸取5mL到100mL容量瓶中,用无水乙醚溶液定容,作为内标物。
2.3色谱条件
液相色谱分离条件:
色谱柱为SpherigelC-18,(250mm×4.6mm,5μm,大连江申牌,柱温30℃,UV波长215nm,流动相(A为体积分数0.5%的甲酸溶液和(B乙腈。
流速为1.0mL/min,进样量为10μL。
梯度洗脱时间程序见表1。
2.4质谱条件
用电喷雾离子化正离子采集模式(ESI+;质谱扫描范围(m/z0 ̄300amu;毛细管电压为3.2kV;锥孔电压为20V;源温度为110℃;洗脱溶剂温度为250℃;洗脱溶剂气流速为300L/h;锥孔反吹气流速为50L/h;由DAD流出的溶液经过三通阀分流,以0.2mL/min进入到MS电离源。
2.5槟榔碱标准溶液的配制
称取5.4mg氢溴酸槟榔碱标准品,用乙醇配成对照溶液10mL,置于容量瓶中定容,作为母液。
分别吸取母液0.2,0.4,0.8,1.2,1.6mL于10mL容量瓶中,各加入配好的内标液0.5mL,用无水乙醇定容后作为槟榔碱的标准溶液,用内标法进行选择性离子检测,对提取得到的槟榔碱在LC/MS条件下进行定量测定。
3结果与讨论
3.1内标物的选择
用质谱定量时,多采用内标法进行定量测定,本实验选用β-蒎烯作为定量内标。
槟榔碱标准色谱图见图1,β-蒎烯作内标的液相色谱图见图2。
从图1,图2可以看出,在选用的液相条件下,β-蒎烯保留时间为6.75min,槟榔碱保留时间为10.68min,β-蒎烯能与槟榔碱完全分离,可作为本试验的内标。
3.2槟榔碱的质谱解析
结合计算机检索系统,在该保留时间下解析质谱图,并对槟榔碱进行定性。
槟榔碱标准质谱见图3,槟榔碱样品质谱见图4。
(1根据标准质谱图3和实验槟榔的质谱图4的信息,可以确定标准质谱和实验槟榔的质谱图的荷质比对于主要的峰是一致的。
(2根据“氮规律”质量数奇数可以得到该化合物含有奇数个N原子。
图1槟榔碱标准色谱图
图2β-蒎烯作内标的液相色谱图
表1梯度洗脱时间程序
时间t/min
流动相
A体积分数0.5%的甲酸B乙腈
051015201.00
0.88
0.79
0.75
0.00
0.00
0.12
0.21
0.25
1.00
丁芳林,等:
HPLC/ESI—MS法测定槟榔中的槟榔碱・77・
农产品加工・学刊2008年第4期
图5槟榔碱质谱的主要解析过程
图3槟榔碱标准质谱图
图4槟榔碱样品质谱图
(3结合计算机检索系统,根据同位素丰度,对于荷质比155的分子离子峰,可以得到1个环加2个双键的数值。
(
4由于是正离子电离方式,中性离子丢失不多,且分子离子在首先消去1个中性分子甲,最后得到最稳定的140质量数的最高峰。
同时根据Beynon表及其最小碎片质量数42的所有可能性,可以得到该化合物只能含有不超过2个N原子。
(5对于含有双键和杂环的化合物,它们的分子离子比较稳定,这从谱图和检索系统的碎片质量数上可以得到它们的一些稳定的碎片峰。
槟榔碱质谱的主要解析过程见图5。
・78・
2008年第4期
sitionofindoleglucosinolatesduringtheproeessingofCanolaseed[J].J.Am,OilChem.Soc.,1990,67(2:
73-75.
黄凤洪.油菜籽生化品质及其在加工过程中变化的研究[D].无锡:
无锡轻工业学院,1991.
李文林,黄凤洪.双低菜籽脱皮冷榨膨化新工艺及其物化特性的研究[D].武汉:
中国农业科学院,2004.
严奉良.科技推广双低油菜籽深加工关键技术研究与开发取得的重大进展[J].中国农业科技,2006(10:
57.王承明,陈建峰,任初杰,等.菜籽饼粕中菜籽多酚的提取新工艺研究[J].食品与发酵工业,2007,33(5:
143-147.
金青哲,姜秋水.双低菜籽营养调和油的研制[J].中国油脂,2005,30(12:
7-9.
李起潮,曾益坤.双低菜籽营养保健油的生产及开发[J].粮油食品科技,2005,13(4:
37-39.
郭庆元,李云昌.中国种植业优质高产技术丛书——
—油菜[M].武汉:
湖北科学技术出版社,2003.
王月星,张冬青.油菜节本增效途径研究[J].安徽农学通报,2007,13(10:
173-174.
曾益冲.双低油菜籽加工及综合利用探讨[J].湖州职业技术学院学报,2004(2:
81-85.
徐洪志,曾川,张大琼,等.菜籽饼的利用与研究进展
[J].耕作与栽培,2007(1:
37-39.
王立峰,袁建,鞠兴荣,等.双低油菜籽油脂加工副产
品的研究现状与发展趋势[J].中国油脂,2005,30
(9:
11-14.
徐洪志,曾川,张大琼,等.菜籽饼的利用与研究进展
[J].耕作与栽培,2007(1:
37-39.
易中华,吴兴利.双低菜籽粕的饲用价值及其在畜禽饲
料中的应用[J].新饲料,2007(8:
29-34.
刘晓军.油菜籽加工副产品的开发利用[J].农产品加
工,2007(9:
14-15.
张璞,李殿荣.油菜饼粕中蛋白质的综合利用[J].陕西
粮油科技,1996,21(1:
62-65.
郑宗林,黄朝芳.双低菜籽粕在饲料中的应用[J].广东
饲料,2001,10(5:
7-8.
刘大川,张寒俊,张麟.双低油菜籽资源综合开发产业
化[J].中国油脂,2003,28(8:
8-11.
吴谋成,袁俊华.加快我国油菜籽加工及综合利用的研
究与产业化[J].粮食与油脂,2001(1:
11-13.
阮征,胡筱波,赖富饶,等.油菜花粉中黄酮类物质提
取工艺的优化研究[J].食品科学,2007,28(7:
133-137.
[13]
[14]
[15]
[16]
[17]
[18]
[19]
[20]
[21]
[22]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
[10]
[11]
[12](上接第50页
3.3线性范围、检测限和定量限
按照本文2.6配制的溶液进样检测,将每个浓度的试样平行分析3次,用所得峰面积的平均值对浓度作线性回归,回归方程为:
Y=642187X-39548,R=0.9985.
线性范围为10.8 ̄86.4μg/mL。
将槟榔碱标准溶液逐级稀释后,测得最低检测限为0.4μg/mL(S/N=3;最低定量限为0.9μg/mL(S/N=10。
3.4方法的精密度与回收率
以槟榔制备品作为试样,用自动进样器连续6次进样,测定峰面积,得到槟榔碱的RSD为2.13%,表明槟榔碱用此法测定的精密度良好。
取本文2.1供试品溶液1mL,用甲醇稀释到10mL(含槟榔碱约1.5mg,分别加入质量浓度为54μg/mL的槟榔碱对照品5,10,15mL,配成3种不同浓度的样品,在LC/MS条件下进行测定,每个样品平行处理5份,得平均回收率为98.32%,RSD为3.44%。
3.5样品测定
量取本文2.1供试品溶液1mL,用甲醇稀释到10mL,过0.54μm微孔膜,滤液按照本文2.4和2.5条件直接进高效液相色谱—质谱仪检测,测得峰面积按回归方程计算槟榔碱的含量为0.156%(n=5。
4结论
采用高效液相色谱—质谱联用的方法测定槟榔提取物中的槟榔碱含量,具有流动相简单、分析时间短,以及无需对样品进行衍生,操作简便,定量准确,抗干扰能力强等优点。
参考文献:
曾琪,李忠海,袁列江,等.槟榔生物碱的研究现状及
展望[J].2006,22(6:
159-161.
梁宁霞.槟榔药理作用研究进展[J].江苏中医药,2004,25(8:
55-57.
国家药典委员会.中华人民共和国药典(2005年一部
[M].北京:
化学工业出版社,2005,254.
高敏.光度法测定槟榔中槟榔碱的含量[J].化学分析计
量,2003,12(1:
28-30.
CoxS,lrinaPiatkovI,ViekersER,eta1.High-perfor-
manceliquidchromatographicdeterminationofarecolinein
humansaliva[J].JounlalofChromatographyA,2004
(1032:
93-95.
张郁葱,张毕奎,程泽能,等.高效液相色谱—电喷雾
质谱法同时测定人血浆中咖啡因、咪哒唑仑和代谢产物
及其在药物代谢研究中的应用[J].药物分析杂志,2004,24(1:
63-67.
方馥蕊,李灼全,梁华伦.微波提取法对槟榔中槟榔碱
的提取率的影响[J].中外健康文摘:
医药月刊,2007,4(6:
19-21.
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
丁芳林,等:
HPLC/ESI—MS法测定槟榔中的槟榔碱・79・
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- HPLCESIMS 测定 槟榔 中的