临床检验主管技师 临床检验基础 第二章 红细胞检查.docx
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临床检验主管技师临床检验基础第二章红细胞检查
第二章 红细胞检查
概要
红细胞生理 RBC生成
衰老红细胞主要在脾破坏,分解为铁、珠蛋白和胆红素。
血红蛋白(hemoglobin,Hb)
1.Hb分子结构和特点
(1)结构:
由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成。
①珠蛋白:
4条肽链(α、β链)
②亚铁血红素:
原卟啉、铁
(2)特点
①正常情况下,99%血红蛋白为还原血红蛋白,1%为高铁血红蛋白。
②只有Fe2+状态的血红蛋白才能与氧结合,称为氧合血红蛋白。
③出生后3个月,HbA占95%以上,而HbF<1%。
④血红蛋白合成受红细胞生成素、雄激素调节。
⑤血红蛋白相对分子质量为64458。
⑥血红蛋白降解产物为珠蛋白、血红素。
红细胞计数
【检测原理】
1.手工显微镜法:
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数,充入血细胞计数池,在显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经换算求出每升血液中红细胞数量。
稀释→充池→计数→计算
2.血液分析仪法:
用电阻抗和(或)光散射原理。
【稀释液】
1.Hayem液
氯调渗,硫防聚,高汞防腐且有毒。
2.枸橼酸钠稀释液:
枸橼酸钠 ---抗凝和维持渗透压
甲醛 ---防腐和固定红细胞
氯化钠 ---调节渗透压
蒸馏水
3.普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水。
改良牛鲍计数板(血细胞计数板)
【血细胞计数板口诀】
改良牛鲍H型,上下两池容点1,
四角中央五大格,四角单线白细胞,
单线分成16中,中央双线红与血,
双线分成25中,每中单线16小。
【操作方法】
稀释液2ml+血10μl→混匀→充池→静止3~5min→镜检
【计算】
白细胞影响:
通常白细胞总数较少,仅相当于红细胞的1/500~1/1000,对结果影响很小,可以忽略不计。
但白细胞过高者(WBC>100×109/L),红细胞计数结果应进行校正。
校正方法有两种:
一:
直接将患者红细胞数减去白细胞数。
二:
在高倍镜下勿将白细胞计入,白细胞体积常比红细胞略大,中央无凹陷,细胞核隐约可见,无黄绿色折光。
【方法学评价】
1.手工显微镜法
是传统方法,不需要特殊设备,但操作复杂、费时。
2.血液分析仪法
是常用方法,比手工法精确(如电阻抗计数法的变异系数为2%,手工法则大于11%),且操作简便、快速。
当白细胞数量明显增高时,会干扰红细胞计数和体积测定而产生误差。
成本高,环境条件要求高。
【质量控制】
1.手工法:
误差原因
①样本:
血液发生凝固,使细胞计数减少或分布不均。
②操作:
稀释、充池、计数不规范。
③器材:
微量吸管、计数板不标准。
④固有误差(计数域误差)
2.仪器法:
应严格按规程操作,并定期进行室内质控和室间质评。
【参考值】
成年男性:
(4.0~5.5)×1012/L
成年女性:
(3.5~5.0)×1012/L
新生儿:
(6.0~7.0)×1012/L
医学决定水平:
高于6.8×1012/L,应采取治疗措施。
低于参考值低限,为诊断贫血界限。
低于1.5×1012/L,应考虑输血。
【临床意义】
1.生理性变化
●增多
年龄、性别、精神因素、剧烈体力劳动或运动、新生儿、高原居民等。
●减少
老年人、妊娠中后期等。
2.病理性变化
(1)RBC和Hb减少
贫血:
单位容积血液中RBC数量、Hb量或HCT低于参考值的下限。
1)急、慢性红细胞丢失过多:
各种原因出血,如消化性溃疡、痔疮、十二指肠钩虫病等。
2)红细胞寿命缩短:
各种原因溶血,如输血溶血反应、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症等。
3)造血原料不足:
如慢性失血者、先天性或后天性红细胞酶缺陷者、铁粒幼细胞贫血;某些药物,如异烟肼、硫唑嘌呤等;继发于某些疾病,如类风湿性关节炎、白血病、甲状腺功能亢进、慢性肾功能不全、铅中毒等。
4)骨髓造血功能减退:
某些药物,如抗肿瘤药物、磺胺类药物、保泰松、有机砷等可抑制骨髓造血功能;物理因素,如X线、60钴、镭照射等可抑制骨髓造血功能。
继发于其他疾病,如慢性肾功能衰竭;原发性再生障碍性贫血。
(2)RBC增多
1)相对增多:
呕吐、严重腹泻、多汗、多尿、大面积烧伤、晚期消化道肿瘤而长期不能进食等引起血液浓缩、血液中有形成分相对增多,多为暂时性增多。
继发性:
①心血管病:
各种先天性心血管疾病,如房室间隔缺损。
②肺部疾病:
肺气肿、肺源性心脏病、肺纤维化、矽肺和各种引起肺气体交换面积减少。
③异常血红蛋白病。
④肾上腺皮质功能亢进(库欣病):
可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高有关。
⑤某些药物,如肾上腺素、糖皮质激素、雄激素等。
原发性:
如真性红细胞增多症(PV)、良性家族性红细胞增多症。
血红蛋白测定
【检测原理】
1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法:
除SHb外
ICSH推荐参考方法,具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。
致命的弱点是氰化钾(KCN)试剂有剧毒,使用管理不当可造成公害。
氰化高铁血红蛋白测定法操作
(1)直接测定法
①加转化液:
试管内加5ml HiCN转化液
②采血与转化:
取全血20μl,加到盛有转化液的试管底部,用上清液反复冲洗吸管3次,充分混合,静置5min。
③测定:
以符合WH0标准的分光光度计,波长540nm处,光径(比色杯内径)1.000cm,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。
④计算:
根据样本的吸光度(A)直接计算出血红蛋白浓度(g/L)
(A为测定管吸光度,44为毫摩尔消光系数,64458/1000为1mol/LHb溶液中所含Hb克数,251为稀释倍数。
)
(2)HiCN标准液比色法测定
HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),分别测得540nm处的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或求出K值。
①标准曲线绘制和K值计算
②样本吸光度(A)
③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度,或用K值计算,血红蛋白浓度Hb(g/L)=K×A。
注意事项
(1)标本:
异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度,干扰Hb测定。
(2)HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液(7.2±0.2)。
样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时,HiCN比色液会出现浑浊。
(3)HiCN贮存:
转化液贮存在棕色有塞玻璃瓶中,不能贮存在塑料瓶中,否则会使CN-丢失,测定结果偏低。
HiCN转化液在4℃保存一般可数月,不能在0℃以下保存,因为结冰可使高铁氰化钾还原,试剂失效。
(4)氰化钾试剂是剧毒品,测定后的废液应收集于广口容器中,首先以水稀释废液(1:
1),再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml,充分混匀,敞开容器,放置15h以上,使CN-氧化成C02和N2挥发,或水解成C032-和NH4+,再排入下水道。
废液不能直接与酸性溶液混合,因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。
2.十二烷基硫酸钠血红蛋白SDS测定法:
具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。
但由于摩尔消光系数尚未最后确认,不能直接用吸光度计算Hb浓度,而且SDS试剂本身质量差异较大,会影响检测结果。
3.HiN3最大吸收峰542nm,显色快,结果稳定。
【参考值】
成年男性:
120~160g/L(士/师:
120~170g/L)
成年女性:
110~150g/L
新生儿:
170~200g/L
【临床意义】
Hb的临床意义与红细胞计数相似,但判断贫血程度优于红细胞计数。
根据Hb浓度可将贫血分为4度。
(1)某些疾病,血红蛋白和红细胞浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量。
如大量失血时,在补充液体前,虽循环血容量缩小,但血液浓度很少变化,从血红蛋白浓度来看,很难反映出存在贫血。
如水潴留时,血浆容量增大,即使红细胞容量正常,但血液浓度减低,从血红蛋白浓度来看,已存在贫血。
失水时,血浆容量缩小,即使血液浓度增高,但红细胞容量减少,从血红蛋白浓度来看,贫血不明显。
(2)发生大细胞性贫血或小细胞低色素性贫血时,红细胞计数与血红蛋白浓度不成比例。
大细胞性贫血的血红蛋白浓度相对偏高,小细胞低色素贫血的血红蛋白减低,但红细胞计数可正常。
关于HiCN法的叙述,错误的是
A.操作简单
B.反应速度快
C.产物稳定
D.能测定所有血红蛋白
E.KCN有剧毒
『正确答案』D
『答案解析』氰化高铁血红蛋白HiCN测定法不适用于SHb。
Hayem红细胞稀释液中硫酸钠的主要作用是
A.固定细胞形态
B.防腐作用
C.防止细胞黏附
D.调节细胞渗透压
E.抗凝
『正确答案』C
『答案解析』Hayem红细胞稀释液中硫酸钠的主要作用是防止细胞黏附。
氯调渗,硫防聚,高汞防腐且有毒。
采用Hb诊断贫血的标准,成年女性应低于
A.100g/L
B.110g/L
C.120g/L
D.150g/L
E.160g/L
『正确答案』B
『答案解析』采用Hb诊断贫血的标准,成年女性应低于110g/L。
血细胞计数池4角的大方格中每一方格的体积为
A.0.00625μl
B.0.0625μl
C.0.004μl
D.0.04μl
E.0.1μl
『正确答案』E
『答案解析』血细胞计数池4角的大方格中每一方格的体积为0.1μl。
患者,女性,50岁,用改良牛鲍计数板计数其红细胞,中央大方格内4角及中央5个中方格内红细胞总数为300,则其红细胞计数为
A.3×1012/L
B.4×1012/L
C.5×1012/L
D.6×1012/L
E.2×1012/L
『正确答案』A
『答案解析』红细胞/L=N×
×10×106×200=N×1010=
×1012(N:
5个中方格内的红细胞数)。
患者红细胞计数为2.4×1012/L,白细胞计数为180×109/L,则其红细胞计数结果报告为
A.2.01×1012/L
B.2.11×1012/L
C.2.12×1012/L
D.2.32×1012/L
E.2.22×1012/L
『正确答案』E
『答案解析』(2.4-0.18)×1012=2.22×1012/L。
关于HiCN法测定废液处理步骤的叙述,哪项是不必要的
A.首先以水稀释
B.再加入次氯酸钠溶液
C.充分混匀
D.密封容器
E.放置15h以上才能倾入下水道
『正确答案』D
『答案解析』应敞开容器放置。
考纲
●概要
●红细胞计数和血红蛋白测定
●红细胞形态检查
●血细胞比容测定
●红细胞平均指数
●红细胞体积分布宽度
●网织红细胞计数
●点彩红细胞计数
●红细胞沉降率
红细胞形态检查
【检测原理】
将细胞分布均匀的血涂片进行染色(如瑞氏染色)后,根据各种细胞和成分各自的呈色特点,在显微镜下进行观察和识别。
【质量控制】
1.选择细胞分布均匀的区域
2.注意检查顺序的完整性
先在低倍镜下估计细胞分布和染色情况,再用油镜观察血膜体尾交界处细胞形态,同时浏览是否存在其他异常细胞,如幼稚或有核红细胞等,有时异常成分常集中分布在血片边缘。
【参考值】
瑞氏染色血涂片成熟红细胞形态为双凹圆盘形,细胞大小一致、平均直径7.2μm,淡粉红色,中央1/3为生理性淡染区,胞质内无异常结构。
*RBC大小改变
*Hb含量改变
*RBC形态改变
*RBC结构改变
【临床意义】
1.RBC大小改变
(1)小红细胞
直径<6μm的红细胞,见于IDA、
珠蛋白生成障碍性贫血。
(2)大红细胞
直径>10μm的红细胞,见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血等。
(3)巨红细胞
直径>15μm的红细胞。
见于叶酸、维生素B12缺乏所致巨幼细胞性贫血。
(4)红细胞大小不均
红细胞间直径相差一倍以上。
见于严重的增生性贫血(如MA)。
2.Hb含量(染色异常)
(1)正常色素性
红细胞呈淡红色,中央有生理性浅染区。
见于正常人、急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。
(2)高色素性
红细胞中央浅染区消失,整个红细胞染成红色,胞体增大,平均红细胞Hb含量增高,平均Hb浓度正常。
见于MA。
(3)低色素性
红细胞中央生理性浅染区扩大,成为环形红细胞。
见于IDA、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血等。
(4)多色性
是尚未完全成熟的红细胞,胞体较大,胞质内尚存少量嗜碱性物质(RNA),红细胞染成灰红色或淡灰蓝色。
见于正常人(占1%左右)、骨髓造红细胞功能活跃(如溶血性或急性失血性贫血)。
(5)细胞着色不一:
同一血涂片同时出现低色素、正常色素性两种细胞,又称双形性贫血,见于铁粒幼红细胞性贫血。
啊红大小染色常,小红低色缺铁珠,大红不均高巨贫,多色骨髓功能跃。
3.红细胞形状改变
(1)球形红细胞
细胞中央着色深,体积小。
见于遗传性和获得性球形细胞增多症(如自身免疫溶血性贫血、直接理化损伤如烧伤等)。
(2)椭圆形红细胞
细胞呈椭圆形、杆形,两端钝圆,长轴增大,短轴缩短,长是宽的3~4倍。
见于遗传性椭圆形细胞增多症(可达25%~75%)、大细胞性贫血(可达25%)、缺铁性贫血、正常人(约占1%,不超过15%)。
(3)靶形红细胞
细胞中央染色较深,外围为苍白区域,而边缘又深染,形如射击之靶。
见于各种低色素性贫血(如珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病)、阻塞性黄疸、脾切除后。
(4)口形红细胞
细胞中央有裂缝,中央淡染区呈扁平状,似张开的口形或鱼口。
见于口形红细胞增多症、小儿消化系统疾患引起的贫血、酒精中毒、某些溶血性贫血、肝病和正常人(<4%)。
(5)镰形红细胞
细胞呈镰刀状、线条状或L、S、V形等,是含有异常血红蛋白S(HbS)的红细胞。
见于镰状细胞贫血。
(6)棘红细胞:
细胞表面有针状突起,间距不规则,长和宽不一。
见于遗传性或获得性β-脂蛋白缺乏症(高达70%~80%)、脾切除后、酒精中毒性肝病、尿毒症。
需与皱缩红细胞(锯齿状红细胞)鉴别,皱缩红细胞边缘呈锯齿形,排列紧密,大小相等,外端较尖。
(7)裂红细胞
为红细胞碎片或不完整红细胞,大小不一、外形不规则,呈刺形、盔形、三角形、扭转形等。
见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤和正常人(<2%)。
(8)缗钱状红细胞
红细胞互相连接如缗钱状,是因为血浆中某些蛋白(纤维蛋白原、球蛋白)增高,使红细胞正负电荷发生改变所致。
(9)有核红细胞(幼稚红细胞)
除1周内婴幼儿血涂片中可见少量有核红细胞外,其他则为病理现象,包括:
①溶血性贫血:
HDN、AIHA、MA;②造血系统恶性疾患或骨髓转移性肿瘤:
如各种急慢性白血病;③慢性骨髓增生性疾病:
如骨髓纤维化、脾切除后。
(10)其他
泪滴形红细胞:
红细胞形如泪滴样或梨状,见于贫血、骨髓纤维化和正常人。
球椭口、见遗传,镰形HbS病,靶形可见珠蛋白,裂D泪纤有核病,缗钱纤原球蛋白。
4.RBC异常结构
(1)嗜碱性点彩红细胞
瑞氏染色后,胞质内出现形态不一的蓝色颗粒(变性RNA),属于未完全成熟红细胞,颗粒大小不一、多少不等。
见于铅中毒、正常人(约占1/10000)。
(2)豪焦小体(Howell-Jolly小体,染色质小体)
成熟红细胞或幼红细胞胞质内含有一个或多个直径为1~2μm暗紫红色圆形小体,为核碎裂、溶解后的残余部分。
见于脾切除后、无脾症、脾萎缩、脾功能低下、红白血病、某些贫血(如巨幼细胞性贫血)。
(3)卡波环
在嗜多色性、碱性点彩红细胞胞质中出现紫红色细线圈状结构,呈环形、“8”字形,为核膜残余物、纺锤体残余物、脂蛋白变性物。
见于白血病、巨细胞性贫血、增生性贫血、铅中毒、脾切除后。
(4)寄生虫
疟原虫、微丝蚴、杜氏利什曼原虫等病原体。
异常结构有点彩,点彩常见铅中毒,豪焦卡波和虫子,经常愿与小白混。
血细胞比容测定(Hct,Ht,HCT或PCV)
【检测原理】
是指在一定条件下,经离心沉淀压紧的红细胞在全血样本中所占比值。
1.温氏法(Wintrobe法)、微量法:
属于离心法。
是将抗凝血置于孔径统一的温氏管或毛细玻管中,以一定转速离心一定时间后,计算红细胞层占全血的体积比。
2.血液分析仪法
【质量控制】
1.手工法
抗凝剂量不准确、混匀不充分、离心速度不够会产生误差。
红细胞形态异常(如小红细胞、大红细胞、椭圆形红细胞、镰形红细胞)或红细胞增多症可使血浆残留量增加6%。
2.血液分析仪法要注意Hct是否与RBC、MCV相关。
【参考值】
温氏法:
男性0.40~0.50;女性0.37~0.48。
微量法:
男性0.47±0.04;女性0.42±0.05。
【临床意义】
1.增高见于各种原因所致血液浓缩,如大量呕吐、大手术后、腹泻、失血、大面积烧伤、真性红细胞增多症、继发性红细胞增多症等。
2.减低见于各种贫血。
3.是临床输血、输液疗效观察的指标。
4.作为红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白浓度计算的基础数据。
5.还可作为真红诊断指标之一。
【操作方法】
温氏法:
取EDTA-K2或肝素钠抗凝静脉血2ml,加入温氏管中,用水平离心机以2264g,离心30分钟。
离心后血液分为5层,自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层(紫黑红色)、带氧红细胞层(鲜红色)。
读取还原红细胞层柱高的毫米数,乘以0.01,即为每升血液中红细胞体积的升数。
离心后分5层,自上而下分别为:
浆板白核还原又带氧。
读取还原乘以0.01。
红细胞平均指数
【检测原理】手工法
【方法学评价】
1.MCV红细胞凝集(如冷凝集综合征)、严重高血糖症可使MCV假性增高。
2.MCH高脂血症、白细胞增多症可使MCH假性增高。
3.MCHC受Hct(血浆残留或出现异常红细胞)和Hb(高脂血症、白细胞增多症)的影响。
【参考值】
如表不同人群红细胞指数的参考范围
MCV(fl)
MCH(pg)
MCHC(g/L)
新生儿
86~120
27~36
250~370
成人
80~100
26~34
320~360
【临床意义】
红细胞平均指数可作为贫血形态学分类依据
贫血分类
MCV
MCH
MCHC
贫血
正细胞贫血
正常
正常
正常
再生障碍性贫血、急性失血性贫血、某些溶血性贫血
大细胞贫血
增高
增高
正常
各种造血物质缺乏或利用不良的贫血
单纯小细胞贫血
减低
减低
正常
慢性感染、慢性肝肾疾病性贫血
小细胞低色素贫血
减低
减低
减低
缺铁性贫血及铁利用不良贫血,慢性失血性贫血
习题
不属于红细胞异常结构的是
A.染色质小体
B.杜勒小体
C.卡波环
D.嗜碱性点彩
E.寄生虫
『正确答案』B
『答案解析』杜勒小体属于白细胞异常结构。
红细胞异常结构有点彩,点彩常见铅中毒,豪焦卡波和虫子,经常愿与小白混。
铅中毒时,血涂片中易见是
A.有核红细胞
B.球形红细胞
C.点彩细胞
D.大红细胞
E.小红细胞
『正确答案』C
『答案解析』铅中毒时,血涂片中易见是点彩细胞,异常结构有点彩,点彩常见铅中毒,豪焦卡波和虫子,经常愿与小白混。
下列关于血细胞比容的说法中,不正确的是
A.与红细胞数量有关
B.与红细胞大小有关
C.是抗凝血自然沉降后所测得的红细胞在全血中所占体积的百分比
D.在各种贫血时血细胞比容会降低
E.大面积烧伤病人的血细胞比容常增高
『正确答案』C
『答案解析』血细胞比容是抗凝血离心后所测得的红细胞在全血中所占体积的百分比。
患者,男性,30岁,贫血外貌。
实验室检查结果如下:
MCV78fl,MCH24pg,MCHC280g/L,可见于下列哪种贫血
A.巨幼细胞贫血
B.再生障碍性贫血
C.溶血性贫血
D.缺铁性贫血
E.慢性感染所致贫血
『正确答案』D
『答案解析』MCV,MCH,MCHC均低于正常,为小细胞低色素性贫血,缺铁性贫血。
考纲
●概要
●红细胞计数和血红蛋白测定
●红细胞形态检查
●血细胞比容测定
●红细胞平均指数
●红细胞体积分布宽度
●网织红细胞计数
●点彩红细胞计数
●红细胞沉降率
红细胞体积分布宽度(RDW)
【检测原理】
反映样本中红细胞体积大小的异质程度,常用变异系数(CV)表示,由血液分析仪的红细胞体积直方图导出。
【参考值】
RDW参考值
作者
例数
RDW
时间(年)
Bessman
229
<13.9
1983
丛玉隆等*
2013
<14.9
1996
*北京市协作组6家医院使用5种型号全自动血液分析仪调查2013例成人(男1013例,女1000例)的结果
【临床意义】
1.贫血形态学分类贫血的MCV/RDW分类法
MCV
RDW
贫血类型
常见疾病
减少
正常
小细胞均一性
单纯杂合子珠蛋白生成障碍性贫血(轻型)
减少
增高
小细胞不均一性
IDA、β-珠蛋白生成障碍性贫血(非轻型)、HbH病
正常
正常
正细胞均一性
白血病、某些慢性肝病等
正常
增高
正细胞不均一性
IDA早期(尚无贫血)
增高
正常
大细胞均一性
MDS
增高
增高
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