海洋基因工程复习题1.docx
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海洋基因工程复习题1.docx
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海洋基因工程复习题1
2011《海洋基因工程》复习题
1.名词解释:
1.基因工程:
通过基因操作来定向改变或修饰生物体或人类自身,并具有明确应用目的的活动称为基因工程。
广义基因工程:
DNA重组技术的产业化开发与应用(一般分为上游和下游技术)。
上游技术(狭义基因工程):
外源基因重组、克隆和表达方式的设计与构建。
下游技术:
含有外源基因的生物细胞(基因工程菌或工程细胞)的大规模培养以及外源基因的表达、分离、纯化过程。
2.基因操作:
基因操作是对基因进行分离、分析、改造、转移、重组、表达和检测等操作的总称。
3.内含子(intron):
指真核生物基因中不能翻译成蛋白质的DNA片段,但可被转录,当两侧序列的mRNA被剪接在一起时,就将内含子转录的mRNA从整个转录物中除去。
4.外显子:
是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段,一个基因可有多个外显子。
内含子并不是一成不变的,具有相对性,对一个DNA片段来说,在某个基因中是内含子,但在另一个基因中却可作为外显子。
5.粘性末端:
识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后,产生的末端为互补的粘性末端
6.平末端(Bluntend):
在回文对称轴上同时切割DNA的两条链,则产生平末端,产生平末端的DNA可任意连接,但连接效率较粘性末端低。
7.TaqDNA聚合酶:
耐热DNA聚合酶在高温下有DNA聚合活性,来自噬高温的细菌,分离自水生栖热菌,最适反应温度75℃,对95℃高温具良好稳定性,该酶不存在3’→5’外切酶活性。
8.质粒(plasmid):
是独立于染色体外、具有自主复制能力的遗传单位,其本质是双链环状DNA,大小范围在1kb-200kb以上不等。
9.质粒的不相容性:
两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性,它是指在第二个质粒导入后,在限制性酶不参与时出现的无法共存的现象。
10.转化(transformation):
是借助于人工方法如热激法、电击法等人为的、有目的将异源DNA分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新遗传性状的一种手段。
是基因操作中很常用的策略。
11.克隆载体:
克隆载体主要用于扩增或保存DNA片段,是最简单的载体。
12.细菌的溶源化:
温和型噬菌体感染野生型大肠杆菌后,只有一部分细胞进入裂解循环。
相反,在大多数感染的细菌群体中不进行裂解循环,存活的细菌细胞进入溶源状态。
即:
促使噬菌体DNA整合到细菌的染色体中去。
溶源化原理:
温和型噬菌体DNA通过其上唯一整合位点attP与宿主染色体DNA上的唯一整合位点attB发生重组,从而整合到染色体中。
13.柯斯质粒载体(cosmidvectors):
由人工构建的含有λ噬菌体DNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体,称为柯斯质粒载体,它们既可以用作基因克隆的载体,也可以用于体外包装系统。
14.插入型载体:
通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体
15.置换型载体:
允许外源DNA片段替换非必须DNA片段的载体,称为置换型载体
16.人工染色体载体:
基于ARS、CEN、TEL是线性染色体保持稳定的功能序列,人们利用这些序列构建载体,重组后的DNA可以线性状态存在,这样不仅稳定,而且大大提高了插入外源基因的能力,并且可以像天然染色体一样在寄主细胞中稳定复制和遗传,称为人工染色体载体。
目前,正在研究或应用的有:
酵母人工染色体(YAC)细菌人工染色体(BAC)哺乳动物人工染色体(MAC)
17.包涵体(inclusionbodies):
在一定条件下,外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密地集中在一起形成无膜的裸露结构,这种结构称为包涵体。
包涵体存在部位:
细胞质、细胞周质
18.穿梭载体:
能够在两种(例如原核细胞与真核细胞间)或多种宿主之间进行复制或表达的载体。
19.整合载体:
在生物学研究和基因工程应用中,会涉及将某个基因或某些基因插入到染色体中去的工作,承担这部分工作的载体,可称为整合载体。
根据整合方式的不同可分为定点整合和随机整合,按其作用来分可归为目标基因的插入或敲除以及随机突变体库的构建。
20.分子杂交:
具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下,按碱基配对原则形成双链的过程。
21.DNA复性(annealing):
指变性DNA在适当条件下,二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为“退火”。
22.Northern印迹杂交:
通过RNA/DNA杂交检测RNA(主要是mRNA)的方法。
RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交
23.Western杂交印迹法:
与Southern原理相似的蛋白质印迹技术,即将电泳分离的非标记蛋白质转移到固相载体上,用特异的抗血清对蛋白质进行鉴定及定量的方法
24.Ct值(cyclethreshold):
PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数
25.基因组文库(genomiclibrary):
是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上而形成的集合。
26.cDNA文库(cDNAlibrary):
是指某生物某一发育时期所转录的mRNA全部经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
27.基因组学(genomics):
对物种的所有基因进行定位、作图、测序和功能分析以获得生物体全部的基因组序列。
其含义为:
鉴定所有基因的功能明确基因之间的相互作用关系阐明基因组的进化规律
生物信息学意义上的基因组学定义:
发展和应用DNA制图、测序新技术以及计算机程序,分析生命体(包括人类)全部基因组结构及功能的科学。
28.序列标签位点(STS):
STS是一段已知核苷酸序列的DNA片段,是基因组中任何单拷贝的短DNA序列,长度在100~500bp之间,易于识别,仅存在于待研究的染色体或基因组中。
只要知道它在基因组中的位置,在染色体上也就有一定的位置。
29.表达序列标签(EST):
EST是一个cDNA克隆快速大规模测序后所获得的3’端和5’端部分cDNA随机片段,每个EST长度约200~600bp,代表了一个单拷贝基因的部分cDNA表达序列。
30.基因组工程:
以基因组为基础对物种进行大范围修饰和改造,用以产生新的生命力、改造物种和实现人类其他目的的工程.
31.脂质体(liposomes):
利用脂类化学物质包裹外源DNA成球体,通过植物原生质体的吞噬或融合作用把包含外源DNA的脂质体转入受体细胞。
32.诱导型启动子Plac:
乳糖启动子Plac,
(1)缺少乳糖时,结构基因lacZ不表达
(2)乳糖存在时,破坏阻遏蛋白与操纵基因的结合,同时cAMP与降解物基因活化蛋白(CRP)形成复合物结合到启动子上,促使RNA聚合酶结合启动子,诱导结构基因lacZ转录表达。
(3)当乳糖和葡萄糖都存在时,葡萄糖降解产物可降低cAMP浓度,使cAMP不能与降解物基因活化蛋白(CRP)结合,后者不能结合在启动子上,即使有乳糖存在,RNA聚合酶不能与启动子结合,虽已解除了对操纵基因的阻遏,也不能进行转录,所以仍不能利用乳糖。
33.藻类基因工程:
亦称藻类遗传工程或藻类重组DNA技术,是以海藻为研究对象将某种生物基因通过基因载体或其他手段运送到海藻活细胞中,并使之增殖(克隆)和行使正常功能(表达),从而创造出藻类新品种的遗传学技术。
34.宏基因组(metagenome):
泛指某一自然环境中全部微生物的基因组群
35.基因漂流(geneflow):
转基因作物中含有从不相关的物种转入的外源基因,这些外源基因有可能通过花粉风扬或虫媒传授等途径扩散到其他物种
2.基因操作的主要内容有哪些?
1)从生物有机体中分离或从其他载体上切下带有目的基因的DNA分子;
2)基因重组:
在体外将带有目的基因的外源DNA片段与能够自我复制并带有选择性标记的载体分子连接;
3)将重组DNA分子导入(转化)受体细胞或直接用PCR扩增;
4)从大量增殖的细胞群体中筛选出获得重组DNA分子的受体细胞;
5)克隆这些细胞以扩增目的基因,供进一步分析使用;
6)将目的基因克隆到表达载体上,并转化到宿主细胞,实现功能性表达,生产人类所需要的物质或目的产物。
可进一步可概括为:
切、接、转、增、检
3.基因操作的目的是力争外源基因的高效表达,可从哪几方面实现该目的?
1、利用载体DNA在受体细胞中独立于染色体DNA而自主复制的特性与载体分子重组,通过载体分子的扩增提高外源基因在受体细胞中的含量,借此提高宏观表达水平。
2、筛选、修饰重组基因表达的转录调控元件:
启动子、增强子、转录调控序列、操作子、终止子。
3、修饰和构建蛋白质生物合成的翻译调控元件:
翻译调控序列、密码子。
4、外源基因在工程菌中的稳定生产及增殖。
4.限制酶识别的序列特征是什么?
1.限制酶识别序列的长度限制酶识别序列的长度一般为4-8bp,最常见的为6个bp(教材p20表2-3)。
当识别序列为4个和6个碱基时,它们可识别的序列在完全随机的情况下,平均每256个和4096个碱基中会出现一个识别位点(44=256,46=4096)
2.限制酶识别序列的结构
限制酶识别的序列大多数为回文对称结构,切割位点在DNA两条链相对称的位置。
EcoRⅠ和HindⅢ的识别序列和切割位置如下。
EcoRⅠG↓AATTCHindⅢA↓AGCTTCTTAA↑GTTCGA↑A
有一些限制酶的识别序列不是对称的,如AccBSⅠ和BssSⅠ:
AccBSⅠCCG↓CTCBssSⅠC↓TCGTGGGC↑GAGGAGCA↑C
许多限制酶可识别多种序列,如AccⅠ识别的序列是GT↓MKAC,也就是说可识别4种序列,其中两种是对称的,另两种是非对称的。
5、原核细胞DNA聚合酶的种类及主要功能。
原核细胞有3种DNA聚合酶,都与DNA链的延长有关。
聚合酶Ⅰ是单链多肽,可催化单链或双链DNA的延长;聚合酶Ⅱ则与低分子DNA链的延长有关;聚合酶Ⅲ在细胞中存在的数目不多,是促进DNA链延长的主要酶。
6、一个理想的载体应具备哪些条件?
作为一个理想的载体,应具备以下条件:
(1)能够在宿主细胞中存在并繁殖,有功能良好的复制子和启动子,使插入基因复制和表达;
(2)具有多个限制性内切酶的切点,且切点是单一的,这样可将多个外源DNA片段插入其中;(3)具有容易检测的筛选标记(某一类抗性基因)用于后期筛选;(4)载体DNA的分子量适当,可容纳较大的外源DNA片段,又可在受体细胞内扩增较多的拷贝;(5)在细胞内稳定性高,这样可以使重组体可以稳定传代而不易丢失。
7.选择标记与筛选标记各指什么?
按其用途可将标记基因分为选择标记和筛选标记。
选择标记用于鉴别载体的存在,将成功转化了载体的细菌菌落挑选出来。
筛选标记可用于从含有载体的细菌菌落中进一步挑选携带外源DNA的重组载体。
筛选标记主要用来区别重组质粒与非重组质粒,当一个外源DNA片段插入到一个质粒载体上时,可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒,即重组质粒。
8、α-互补(α-complementation)原理以及在载体构建中的应用。
大肠杆菌的lac乳糖操纵子中的lacZ基因编码β-半乳糖苷酶,如果lacZ基因发生突变,则不能合成有活性的β-半乳糖苷酶。
缺失了编码β-半乳糖苷酶的lacZ基因,无酶学活性;对于只编码N-端氨基酸的lacZ基因(称为lacZ’),其产物也没有酶学活性。
但这两个无酶学活性的产物混合在一起时,可恢复β-半乳糖苷酶的活性,实现基因内α-互补。
α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。
X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)也是β-半乳糖苷酶的一种底物,经降解后可生成溴氯吲哚,使大肠杆菌菌落呈蓝色。
当无β-半乳糖苷酶时,X-gal不被分解,菌落呈白色。
当外源基因插入到LacZ′基因内部,则LacZ′基因受到破坏,便不能再和缺陷型受体菌中生成有活性的β-半乳糖苷酶,因此,菌落呈白色。
反之,非重组体为蓝色菌落。
这种颜色标志的变化就很容易区分和挑选含有和不含有插入序列或基因的转化菌落,称为“蓝白斑筛选法”。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)是乳糖的衍生物,可作为lac操纵子的诱导物。
9、大肠杆菌表达载体的基本表达元件有哪些?
⑴启动子(promotor):
是一段能被宿主RNA聚合酶特异性识别和结合并指导目的基因转录的DNA序列,是基因表达调控的重要元件。
要求是:
①应为强启动子;②最好是诱导性的,如热诱导或化学诱导。
⑵转录终止子(terminator):
是一段终止RNA聚合酶转录的DNA序列。
可使转录终止,增强mRNA的稳定性,提高蛋白质产物的表达水平。
尤其是将两个终止子串联转录终止功能更强。
⑶核糖体结合位点(RBS)
是指基因转录起始位点下游的一段DNA序列,即Shine-Dalgarno序列(简称SD序列)。
所谓SD序列就是由Shine-Dalgarno首先提出的位于位于起始密码子上游的一段保守序列,为细菌核糖体有效结合和翻译起始所必需。
SD序列与核糖体16SrRNA特异配对从而与宿主核糖体结合,它对mRNA的翻译起着决定性的作用。
核糖体与mRNA的结合程度越强,翻译的起始效率越高,因此,在构建表达载体时,要尽可能使SD序列与16SrRNA序列互补配对。
大肠杆菌SD序列的碱基组成为5′AGGAGG3′,其中以GGAG四个碱基最为重要,这四个碱基中的任何一个发生突变都会引起翻译效率的大幅度下降。
(4)筛选标记基因
微生物表型选择标记显性标记营养缺陷型标记在基因克隆中采用的质粒载体的选择标记,包括有新陈代谢特性、对大肠杆菌素E1的免疫性,以及抗菌素抗性等多种。
而绝大多数的质粒载体都是使用抗菌素抗性标记,并且主要集中在氨苄青霉素抗性、四环素抗性、链霉素抗性、氯霉素抗性以及卡那霉素抗性等少数几种抗菌素上。
其原因一方面是由于许多质粒本身就是带有抗菌素抗性基因的抗药性R因子;另一方面则是因为抗菌素抗性标记具有便于操作、易于选择等优点。
(5)密码子的选择
翻译起始密码子:
起始密码子是翻译的起始位点,通常为AUG(ATG),编码甲硫氨酸(MET),是首选的起始密码子。
也有极少数生物利用其它密码子作为翻译的起始位点,如GUG、UUG等。
翻译终止密码子:
翻译终止密码子与核糖体相遇时,能使核糖体从mRNA模板上脱落下来,终止蛋白质的翻译过程。
在大肠杆菌中,合成多肽链的释放由RF1和RF2两个释放因子所调控,RF1识别终止密码UAA和UAG,而RF2识别终止密码UAA和UGA,由于UAA同时为两个释放因子所识别,一般被选作翻译的终止密码。
10、核酸分离纯化的一般程序。
11、影响线状双链DNA分子的电泳迁移距离的因素。
i.分子量的大小:
迁移距离与分子量的常用对数成反比ii.凝胶浓度:
浓度越高,移动距离越短,适合分离低分子量DNA;浓度越低,移动距离越长,适合分离高分子量DNA。
iii.电压:
低电压时,迁移率与电压成正比;电压增高时,不同大小DNA片段迁移率增大是不同的。
iv.碱基组成与温度:
不受影响,温度高可导致DNA带变形或解链。
12、影响染色体DNA电泳的主要因素。
1、DNA的分子大小及构型:
不同构型DNA的移动速度次序为:
共价闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,因而迁移得越慢。
当琼脂糖浓度太高时,环状DNA(一般为球形)不能进入胶中,而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进,由此可见,这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度。
2、琼脂糖浓度:
一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
3、DNA分子的构象:
当DNA分子处于不同构象时,在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。
4、嵌入染料的存在:
荧光染料溴化乙啶(EB)用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强。
还会使线状DNA迁移率降低15%。
5、电源电压:
琼脂糖凝胶分离染色体DNA在低浓度、低电压下,分离效果较好在低电压条件下,线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。
在电场强度增加时,DNA片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大。
因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使染色体DNA段的分辨率达到最大,电场强度不宜高于5V/cm。
6、离子强度影响:
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
13.什么是生物芯片?
生物芯片有哪些类型?
生物芯片有何特点?
指通过机器人自动印迹或光引导化学合成技术在硅片、玻璃、凝胶或尼龙膜上制造的生物分子微阵列,根据分子间的特异性相互作用的原理,将生命科学领域中不连续的分析过程集成于芯片表面,以实现对细胞、蛋白质、基因及其他生物组分的准确、快速、大信息量的检测。
生物芯片主要特点是高通量、微型化和自动化。
生物芯片的分类
按载体材料分类:
玻璃芯片、硅芯片、陶瓷芯片。
按点样方式分类:
原位合成(InSitu)芯片、微阵列(Microarray)芯片、电定位芯片。
按芯片固定的生物分子类型分类:
基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室
按芯片的使用功能分类:
测序芯片、表达谱芯片、基因差异表达分析芯片
14、PCR的基本原理。
类似于DNA的体内复制。
首先待扩增DNA模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。
这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环,PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。
①模板DNA的变性:
模板DNA经加热至95℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:
DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条与模板DNA互补的新链。
15、PCR反应体系有哪些成分?
1)PCR反应成分
(1)模板单、双链DNA均可。
不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。
一般:
100ngDNA模板/100μL反应量。
模板浓度过高会导致反应的非特异性增加
引物浓度0.1-0.5μmol/L浓度过高易导致模板与引物错配,反应特异性下降。
(3)TaqDNA聚合酶(来自Thermusaquaticus)0.5-2.5U/50μl酶量增加使反应特异性下降;酶量过少影响反应产量。
dNTPdNTP浓度取决于扩增片段的长度四种dNTP浓度应相等浓度过高易产生错误碱基的掺入,浓度过低则降低反应产量dNTP可与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度下降,影响DNA聚合酶的活性。
Mg2+Mg2+是DNA聚合酶的激活剂。
0.5mmol/L-2.5mmol/L反应体系。
Mg2+浓度过低会使Taq酶活性丧失、PCR产量下降;Mg2+过高影响反应特异性。
Mg2+可与阴离子结合,所以反应体系中dNTP、EDTA等的浓度会影响反应中的Mg2+浓度。
2)循环参数
(1)变性使双链DNA解链为单链95℃30秒-1分钟
(2)退火温度由引物长度和GC含量决定。
增加温度能减少引物与模板的非特异性结合;降低温度可增加反应的灵敏性,但会增加非特异性结合。
(3)延伸70-75℃延伸时间由扩增片段长度决定(4)循环次数主要取决于模版DNA的浓度一般为25-35次次数过多:
扩增效率降低,错误掺入率增加
16.大规模DNA测序中的随机测序策略指的是什么?
随机测序战略又称鸟枪法策略(shotgunstrategy),此策略是在一定作图信息基础上,绕过大片段连续克隆系的构建而直接将基因组分解成小片段随机测序,利用超级计算机进行组装。
即将人类基因组DNA用机械方法随机切割成2Kb左右的小片段,把这些DNA片段装入适当载体,建立亚克隆文库,从中随机挑取克隆片段测序,最后根据测序片段的重叠区域组装大片段DNA序列。
17.什么是易错PCR法(Error-pronePCR)?
易错PCR是在采用DNA聚合酶进行目的基因扩增时,通过调整反应条件,如提高镁离子浓度、加入锰离子、改变体系中四种的dNTPs浓度或运用低保真度DNA聚合酶等,来改变扩增过程中的突变频率,从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变,获得蛋白质分子的随机突变体。
其关键在于对合适突变频率的选择,突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变,无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。
理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖于突变的DNA片段的长度。
18.DNA诱变技术中的定点突变有哪些类型?
①寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物,在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。
②盒式突变是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段,取代野生型基因中的相应序列。
③PCR介导的基因突变
19、基因文库的质量标准有哪些?
除了尽可能高的完备性外,一个理想的基因文库应具备下列条件:
①重组克隆的总数不宜过大,以减轻筛选工作的压力;②载体的装载量最好大于基因的长度避免基因被分隔克隆③克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域以利克隆排序
④克隆片段易于从载体分子上完整卸下⑤重组克隆能稳定保存、扩增、筛选
20.cDNA文库有哪些主要特点?
1.基因特异性:
常来自结构基因,因此仅代表某种生物的一小部分遗传信息,且只代表那些正在表达的基因的遗传信息:
1—5%mRNA,80—85%rRNA,10—15%tRNA
2.器官特异性:
不同器官或组织的功能不一样,因而有的结构基因的表达就具有器官特异性,故由不同器官提取的mRNA所组建的cDNA文库也就不同
3.代谢或发育特异性处于不同代谢阶段(或发育阶段)的结构基因表达亦不相同
4.不均匀性:
在同一个cDNA文库中,不同类型的cDNA分子的数目是很不相同的,尽管它们都是由单拷贝基因转录而来的。
这与基因组文库中的单拷贝基因均具有相同的克隆数相较,这是两种文库的另一差别。
5.各cDNA均可获得表达(一般选用的载体都是表达型的)
6.cDNA文库质量的评价:
评价一个文库是否有实用价值主要在于文库的含量和插入片段的大小两个方面。
所构建的文库中必须有足够多的克隆数,这样才能确保基因组cDNA中的每一个序列至少有一个拷贝存在于重组文库中,为达到这一要求,文库的容量应不小于1.7×105,同时为保证cDNA片段的完整性,插入片段的平均大小应不小于1kb。
21.从文库中筛选目的基因的主要方法。
一般来说,筛选过程难易程度主要取决于所采用的基因的克隆方法和目的基因的性质与来源。
从文库中筛选目的
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