试验诊断学实习手册.docx
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试验诊断学实习手册
实验诊断学实验指导
兰州大学第一医院实验诊断教研室
实习的目的与要求:
一、实习目的通过实习学习有关检验的操作方法,熟悉和了解其基本技术,以便进一步理解课堂讲授的内容,达到理论联系实际的目的。
二、实验室守则
1、准时参加实习,进实验室时必须穿好白大衣,遵守课堂纪律注意保持实验室的整齐与安静。
2、实验前,将学习手册加以预习。
实习开始,仔细听取讲解,认真观察示范操作及示教标本,先明了实验原理和操作步骤后再操作。
3、实验过程中要认真操作,仔细观察并联系有关理论进行思考,注意检验数据的准确性和严谨性。
4、爱护仪器,节约试剂,用前检查,用后清点,损坏时要登记赔偿。
5、注意安全,凡病人标本均应视为有传染性,应防止污染自己及他人每次实习课后认真洗刷实验用具,并轮流搞好实验室的清洁卫生。
6、认真作好实验记录,正确地书写实验报告并于每次实习后交给辅导教师。
实验成绩共20分(每次实验3分,提问2分),直接加到期末考试成绩中(卷面成绩满分80分)。
目录
第一单元血液一般检查………………………………………
第二单元尿及粪便常规检查……………………………………
第三单元浆膜腔穿刺液与脊髓液检查………………………….
第四单元检验报告单的阅读及分析…………………………….
第一单元血液一般检查
一、红细胞计数(redbloodcellcount)
[要求]掌握末梢采血技术,熟悉细胞计数板的结构及用法,进行红细胞计数,并记住参考值、临床意义。
[原理]一定量的血液,经一定量的等渗性溶液稀释后,充入血细胞计数室中,于显微镜下计数一定体积内的红细胞,并求得每升血液内的红细胞数。
.
[仪器试剂]
1、血细胞计数板,为一特制的长方形硬质玻璃板,中间l/3部分具有“H”形槽沟,横槽沟上下的平台部分各深0.1mm,成为二个计数台(池),每台有一个计数区域,分为9个大方格,每一个大方格的面积为lmm2,四角的每个大方格又划分为16个中方格,供白细胞计数用。
中央的一个大方格用双线划分为25个中方格,每中方格又划分为16个小方格,共为400个小方格,供红细胞计数用。
计数台之上覆以特制的盖片(厚度0.4mm、表面平直、质地较硬)后构成计数室。
每个大方格的体格是0.1mm3(1mm×lmm×0.1mm),参阅图1,2及3。
2、容量准确的微量吸管(具有10ul及20ul刻度)
3、红细胞稀释液(Hayem稀释液)
氯化钠1.0ɡ
硫酸钠(Na2S04·10H20)5.0ɡ
氯化高汞5.0ɡ
蒸馏水加至200ml过滤后备用
此稀释液为等渗性溶液,比重较大,使红细胞易于悬浮,并有防腐作用。
4、光学显微微
5、消毒、穿刺用具为75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血针。
[方法]
1、准确加红细胞稀释2m1于一中号试管中,塞紧管口,并拭净血细胞计数板及盖玻片。
2、用75%酒精棉球消毒被检人左手无名指尖侧腹部。
3、待酒精挥发后.由左手捏紧取血部位,以右手持消毒穿刺针快速速人约2~3mm深。
拭去第一滴血后,用微量吸管准确吸血到l0ul处,拭去管尖外余血,将吸管插到稀释液中迅速地把血液放出,并用上清液洗净吸管内残存血液,立即轻轻振荡混匀,用消毒干棉球按压穿刺伤口。
4、进一步混匀红细胞悬液,然后用尖吸管吸取数滴(或用细玻璃棒醮取一滴,充入计数室内准备计数。
充细胞悬液时应防止产生气泡,要一次充好,液量多少适宜。
水平位静置2~3min待细胞沉下。
5、用低倍镜找出红细胞计数区域。
计数中央大方格中的四个角和中心的五个中方格内的红细胞。
凡在中方格双线上的红细胞按压左侧及上侧线者计入。
6、将5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方内红细胞数×1010=红细胞数/L,报告方式:
Δ、ΔΔ×1012/L上式中
×5表示把5个中方格内红细胞数折算为1个大方格的红细胞。
×10表示把1个大方格容积(0.1u1)折算为lul。
×200表血液稀释倍数。
×106表示将ul换算为L。
Δ、ΔΔ×1012表示将红细胞数以小数点前保留1位数字乘以1012
形式报告。
如数得红细胞为450个则报告为4.5×1012/L。
[注意事项]
1、取血部位的皮肤必须正常,
2、一人一针,防止交叉感染。
3、微量吸管的容量必须准确,内腔一定要干燥,
4、取血动作必须迅速。
若作血红蛋白和红细胞计数两项时,应先取红细胞计数的标本,后取血红蛋白测定的标本。
5、充液之前务必充分混匀,否则因久置而红细胞下沉,导致计数值错误地偏低。
6、一般于低倍镜下计数即可。
为区别异物或残渣,将可疑目标置低倍镜视野中心,然后转高倍镜观察。
7、白血病患者,其白细胞明显增多时,则应进行校正,
8、高球蛋白血症病人,其血液加稀释液后,迅速出现颗粒状浑浊,高汞将球。
此时可换用生理盐水作稀释液,及时计数。
9、含高效价冷凝集素的病人,当血加入稀释液之后,应事先将红细胞稀释液管加温后再放入血液或将红细胞悬液管置温箱内待冷凝现象消失后再迅速混匀计数。
[参考值]
成年男性(4.0~5.5)×1012/L
成年女性(3.5~5.0)×1012/L
初生儿(6.0~7.0)×1012/L
二、血红蛋白测定(hemoglobindetermination)
[要求]熟练掌握采血技术,能进行血红蛋白测定。
并记住参考值和临床意义。
[原理]血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白(Hi),再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCH)。
在特定波长和光径(比色杯内径)条件下具有一定的吸光度,仪器据此即可求得血红蛋白浓度(g/L)。
[仪器、试剂]
仪器微量吸管
粗口径清洁试管
消毒采血用具
血红蛋白仪
试剂VanKampen—Zijlstra(文齐氏)液(HiCH转化液)
氰化钾(KCN)0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]0.20g
无水磷酸二氢钾(KH,PO。
)0.14g
TritonX–100(或其它非离子表面活性剂)1.0ml
蒸馏水加到1000ml
上述试剂为淡黄色溶液贮存棕色瓶中室温妥善保存,其中非离子表面活性剂可加速溶血。
缩短转化时间,防止因血浆蛋白改变引起的浑浊。
[方法]
1、取血红蛋白转化液2.5ml于粗口径试管中加血10ul混匀,室温(20℃-25℃)静置5min。
2、以校正过的(用蒸馏水调零和血红蛋白标准液校准)
由于血红蛋白不是单一品种,各种血红蛋白分子量不完全一致,所以不用IS制mmol/L表示,而报告质量浓度g/L。
[注意事项]
(1)血红蛋白仪必须经过校准。
(2)若转化浓度浑、变绿即不可再用。
(3)转化液不能偏酸,也不宜用聚乙烯瓶装,否则KCN易分解失效。
(4)丙种球蛋白或白细胞数值明显增高的血液,可出现浑浊,可按15g/L甚至50g/L加入氯化钠以防止。
(5)关于转化液中KCN毒性问题由于浓度很低仅50mg/L,故只要分散处理随时流水冲稀弃去危害性不大,但不可积存处理。
(6)若用叠氮钠、溴代十六烷三甲氨法测定血红蛋白时,均需依本法进行校准。
[参考值]
成年男性120—160g/l
成年女性110—150g/L
初生儿170—200g/L
三、白细胞分类计数(Whitccelldifferentimcount,DC)
[要求]
1、掌握血涂片制作及染色技术。
2、学会辩认外周血中各种白细胞的形态特点及其分类计数的方法。
3、记住参考值和临床意义。
[原理]
Wright—Giemsa(瑞—姬氏)伊红的钠盐有色部分为阴离子,可与带正电荷的物质结合;氯化美兰有色部分为阳离子,可与带负电荷的物质结合。
瑞氏染料对胞质及中性颗粒的着色性极佳,而姬坶萨染粉对细胞核着色较好。
采用瑞—姬氏复合染液取得更好的染色效果。
为使血片每次染色效果好且趋于一致,需配制PH6.4-6.8的缓冲液,使细胞蛋白质在此恒定的环境中着色。
[仪器、试剂]
1、光学显微镜
2、瑞、姬氏复合染液瑞氏染粉0.5g,姬姆萨染粉2g,碱性美兰5g,混匀后加10ml甘油在乳钵内研磨,再用甲醇500ml稀释后,室温放置一周备用。
3、磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)磷酸二氢钾0.3g,磷酸氢二钠0.2g蒸馏水加于1000ml,备用。
4、香柏油、二甲苯及擦镜头用棉纸。
5、光洁中性无油垢的载玻片及一端平齐稍窄于载玻片的推片,玻璃蜡笔。
[方法]
1、常规消毒皮肤,穿刺后拭去第一滴血,,
2、用载玻片的一端刮驭血液一小滴。
3、将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方,将推片略向后移使与血液相接触,血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。
4、以约30度的夹角向前均匀地推动即可制成血涂片,其薄厚度要适中,衬以白纸时应呈淡的红黄色,且有头体尾之分。
(图5)
图5血片的制备
5、血涂片干后,于血膜两端用玻璃蜡笔各划一线,以防染液流失,滴力口瑞—姬氏复合染液数滴于血涂片上(以盖住血膜为度),静置约1min,目的在于用染液的甲醇成分固定血细胞。
6、加相当于染液1.5—2倍量的缓冲液充分混匀。
7,染色约5—10min,届时将载有染液的涂片置低倍镜下观察,若见白细胞的核着色清晰、核浆分明即可用水冲去染液,干燥后镜检。
8。
镜检时先用低倍镜选好薄厚适宜、染色良好、细胞分布均匀处,滴加香柏油一滴,用油浸镜观察。
通常计100个白细胞(必要时可增到200或更多),按图9所示方向移动血涂片,同时将所遇到的各类白细胞分别记录,直到计数100个白细胞为止,计算每类白细胞的数目,即其百分数值。
分类计数时以画“正”字作如下记录:
中性杆状核下
中性分叶核正正正正正正正正正正正正正
嗜酸粒细胞一
嗜碱粒细胞
淋巴细胞正正正正正
单核细胞正一
[注意事项]
1、作血涂片时勿用伤口第一滴血,以免混有来自受损微血管的内皮细胞。
2、血涂片薄厚适度,过厚时细胞簇集影响形态观察,过薄则白细胞太少不易分类。
影响血涂片薄厚的因素为:
①血滴过大、夹角过大、推片速度过快则厚;②血滴过小、夹角过小、、推片过慢则薄。
3、加瑞-姬氏染液或加缓冲液之后,切勿干枯,否则血涂片中每有残渣,将干扰镜检。
4、染色时间的长短,视染液性能而定,应以低倍镜观察其染色良好为度。
5、要以流水冲去染液,而不可先弃去染液再冲水,以免留有残渣。
6、分类时一定要用油浸镜观察,以便同时观察白细胞有无质变及红细胞的形态学。
7、因胞体较大的白细胞如嗜酸性粒细胞,单核细胞、中性粒细胞于涂片的上下边缘处多见,而胞体较小的白细胞如淋巴细胞则以涂片中心地带为多,分类计数时切不可只在某一局部,而应按规定方向推动血涂片来进行观察。
8、分类报告时如红、白细胞有大、小、形态、染色等质的改变应同时描述。
9、白血病病人血涂片因细胞常不易着色,应酌情延长其染色时间。
10、凡白细胞总数低的病人作分类计数时,切不可以加厚血涂片的方式来解决,因涂片过厚时,细胞簇集,着色常不理想而影响分类辩认。
应多推若干张薄厚适宜的血涂片来进行分类。
[参考值]
中性杆状核粒细胞1-5%0.01-0.05
中性分叶核粒细胞50-70%0.50-0.70
嗜酸性粒细胞0.5-5%0.005-0.05
嗜碱性粒细胞0-1%0-0.01
淋巴细胞20-40%0.20-0.40
单核细胞3-8%0.03-0.08
四、红细胞沉降率(erythrocytesedimentationrate.ESR)
[要求]
l、了解血沉的操作技术及读取方法。
2、每组选一位同学在无菌操作下采取静脉血作Westergren法血沉。
3、记住参考值及临床意义。
[原理]血液经枸橼酸钠抗凝后,吸于特制的血沉管中,垂直竖立一小时,观察其红细胞下沉的速度,以所暴露出的血浆段的高度(mm)表示。
[仪器、试剂]
1、静脉穿刺用器材,包括压脉带、垫枕、无菌注射器(2ml)、2.5%碘酒,75%酒精及消毒棉签等。
2、特制的Westergren血沉管(全长300mm,内径2.5mm,具有0—200mm刻度)。
3、Westergren血沉架(图6)
4、106mmol/L枸橼酸钠溶液
[方法]
1、向有2ml刻度的中号试管中准确地加入106mmol/L枸橼酸钠0.4ml。
2、作静脉穿刺后,取血约2ml,拔去针头注入上述试管内,使血量恰达2ml的划线处,轻轻混匀。
3、用Westergren血沉管准确地吸此抗凝血至“0”刻度处,擦净管尖,垂直坚立于血沉架上.记时。
Ih后读取血浆段的高度,以mm表示。
[注意事项]
1、注射器内腔、血沉吸管内腔均须干燥,以防溶血。
2、血量与抗凝剂比例应严格遵守4:
l,并充分混匀,如有小凝块则因消耗了纤维蛋白原而使血沉减慢。
3、血沉吸管必须垂直竖立,如有倾斜可致血沉增快。
4、血沉试验应及时进行,抗凝血于室温中最长不得超过2h,否则水份蒸发,可使结果减慢。
5、严重贫血病人红细胞大小不均时,于1h后血浆与沉积的红细胞之间未能形成整齐的界面,此时要读取靠近较紧密沉积的红细胞层的刻度作为血沉数值。
6、中等度以上贫血的病人做血沉测定时,可做贫血校正试验,
即将病人血用枸橼酸钠溶液按9:
1比例抗凝,以3000r/min速度离心30min之后,将上层血浆完全吸出,然后按正常人红细胞比积情况,人为地将血浆与压积红细胞按各0.50L/L的比例(男性病人)或按压积红细胞为0.40L/L,血浆为0.60L/L的比例(女性病人)混合后再作血沉测定,报告时注明系贫血校正后血沉数值。
7、血沉测定时室温以18—25℃为宜,温度越高血沉越快,反之减慢,但有高效价冷凝集素时则相反。
必要时需校正温度。
[参考值]
男性0-15mm/h末
女性0-20mm/h末
第二单元尿及粪便常规检查
一、尿液检查
(一)标本的采集
1、标本的种类
(1)随机尿门诊病人常用,但易受各种因素的影响,致使低浓度或临界浓度的病理性物质和有形成分易被漏检。
(2)晨尿早晨起床后的第一次尿标本。
最适于肾病患者尿液的一般检查。
(3)餐后尿通常在餐后2h收集尿标本,此标本对病理性蛋白尿和糖尿的检出更为敏感
(4)定时尿应从排空尿液开始计算时间,将全时间内各次尿液和到时间后排空膀胱中的尿液全部送检。
定时尿最常应用的是4h,12h,24h尿。
主要用于尿中有形成份和一些化学成份的定量。
2、采集方法将尿标本随时留取于清洁容器内即可。
女性应避免月经及阴道分泌物混入,必要时冲洗外阴后,留中段尿检查。
留12h或24h尿时应适当放防腐剂(如甲苯2ml/lOOml尿液、40%甲醛液0.2—0.5m1/lOOml尿液、10%盐酸10ml/24h尿液)。
若作细菌培养,则必须用无菌瓶按无菌操作留取中段尿,必要时用无菌手术导尿送检。
(二)、尿液物理学与化学检查
1、尿量正常成人每昼夜尿量常在1000—2000ml之间,平均为1500ml。
尿量增多见于糖尿病、尿崩症、慢性肾炎(尿液缩功能障碍)等。
尿量减少见于急性肾炎、高热、水肿、休克及各种原因所致的急性肾功能不全。
无尿见于严重急性肾功能不全。
2、颜色正常为淡黄色。
病理性可见乳糜尿、血尿、血红蛋白尿及胆红素尿等。
3、透明度正常新鲜尿液多透明,放置后可出现微量絮状沉淀。
若新鲜尿明显混浊可见以下情况:
①尿酸盐沉淀,以粉红色结晶析出多见于酸性尿液冷却后。
加热或加碱后混浊消失;②磷酸盐和碳酸盐沉淀,淡灰白色结晶析出,多见于碱性或中性尿液。
加酸后混浊消失若为碳酸盐可产生气泡磷酸盐则无气泡产生;③脓尿和菌尿呈云絮状沉淀,加热加酸其混浊均不消失。
4、比密测定
(1)将尿混匀后沿管壁慢慢倒入尿量筒内,避免发生气泡,如有气泡可用毛细吸管或吸水纸吸去。
(2)将比密计(上有1.000—1.060刻度)轻轻放于尿液内,使其悬浮于中央,勿触及筒壁或筒底。
(3)等比密计停稳后,读取与尿液凹面相切的刻度,即为被测尿液的比密。
(4)结果判断:
正常人比密为1.015—1.025之间。
急性肾炎尿量少比密高;而慢性肾炎尿量多,比密低;糖尿病病人,尿量虽多,但尿内含有糖,故比密高。
尿崩症、慢性肾功能不全,尿比密常在1.010左右形成低比密尿。
(5)注意事项:
①尿量太少,不足以浮起比密计划时,可用蒸馏水将尿液稀释一倍后,再行测定。
其结果应将读数末尾两位数字乘2,即得原尿液比密。
②尿比密计应保持清洁,特别是比密计的球部不能附着蛋白质,不用时放置在干净水中泡洗后保存。
③测比密时若尿液的温度(室温)与比密计上所注明温度不一致时,每高3℃测得结果则应增加0.001;每低3℃时则应减去0.001。
④蛋白尿和糖尿按每增加10g/L,从尿比密中分别减去0.005(对蛋白质而言)或0.004(对糖而言)。
5、酸碱反应(pH试纸法):
用广范围pH试纸(pHl—14)中立即取出观察颜色变化。
与标准色板比色,读取PH值。
6、尿蛋白测定——尿蛋白定性试验
(1)加热乙酸法
[原理]加热煮沸使蛋白质变性凝固,加酸使pH下降,约达到蛋白质的等点(pH5左右),可促进蛋白质的沉淀,并可使加热析出的磷酸盐、碳酸盐溶解。
[方法]取15X150mm试管1只,加入清晰尿液至管的2/3高度。
用试管夹持试管下端,将试管上部斜置在火焰上加热,煮沸即止。
轻轻直立试管,在黑色背景下观察煮沸部分有无混浊。
滴入5%乙酸溶液3—4滴,再煮沸后立即观察,如无混浊出现即为阴性,如有混浊即为阳性,按下表判断结果。
加热醋酸法结果判断表
结果符号约含蛋白质(g/L)
仍清晰—0
黑色背景下轻微混浊+-<0.1
白色混浊,无颗粒及絮片沉淀+0.1-0.5
明显白色颗粒状混蚀,但无絮片沉淀++0.5-2.0
大量絮片状混浊,无凝固块+++2.0-5.0
出现凝固块并有大量絮片状沉淀++++>5.0
[注意事项]①尿液标本要新鲜,陈旧尿液因大量细菌生长可引起假阳性。
标本内含有其它分泌物(如女性生殖及泌尿道分泌物)也能出现假阳性。
②尿蛋白含量很少量,加酸后始出现混浊。
因此,操作时必须遵照加热、加酸、再加热的程序。
加入乙酸量也要适当。
过多或过少均可使阳性反应程度减弱。
③限盐病人因尿液电解质含量减少,可致假阴性。
因此,试验时先滴加饱和氧化钠1—2滴于尿液中,再进行操作。
(1)磺基水杨酸法
[原理]磺基水杨酸亦称磺柳酸,为生物碱试剂,在略低于等电点的酸性环境下,其阴离子(酸根)与蛋白质的氨基端阳离子结合,成为不溶的蛋白盐而沉淀。
[方法]取试管2只,各加入弱酸性清新尿1ml,于一管中加20g/L磺基水杨酸溶液2滴,轻轻混匀,另一管不加试剂做空白对照,1分钟内立即观察结果,结果判断如下表:
磺基水杨酸法结果判断
符号结果
(—):
尿液外观仍清晰透明
极微量:
仅在黑色背景前可见极轻微混浊
微量:
不需要黑色背影即可见到轻度混浊
(+):
明显的白色混浊但无颗粒出现
(++):
明显混浊并出现颗粒
(+++):
严重混浊并有大凝块下沉
(++++):
更明显混浊并有絮状沉淀。
[注意事项]①混浊尿应离心后取上清液做试验;②本法非常敏感,判断结果时间应严格控制在15秒内;③尿液碱性较强时,滴加试剂后局部出现白色混浊,但轻摇即消失,应于尿液内加入冰乙酸数滴,酸化尿液到pH5再作试验;④尿中含高浓度尿酸或尿酸盐时可呈假阳性反应,特点为滴加试剂15秒后,尿液逐渐呈蛛丝状混浊,其后慢慢扩散,薄薄覆盖于尿液表面,加热或加碱可迅速消失。
(3)试带法
[原理]试带上的酸硷指示剂溴酚蓝的pH范围是3.0~4.6,在pH3.0的拘椽酸缓冲系统中溴酚蓝指示剂的阴离子,与尿液中的蛋白质(白蛋白)作用,产生黄绿色颜色变化再与标准色板比色,测得蛋白质含量。
呈色深浅与蛋白质含量成正比。
[方法]将试带浸于尿液中,立即取出,在溶器边缘除去多余尿液,15秒后与标准色板比色。
结果判断如下表。
溴酚蓝试带法结果判断表
反应颜色符号约蛋白质量g/L
淡黄色—<0.1
淡黄绿色+-0.1-0.3
黄绿色+0.3-1.0
绿色++1.0-3.0
绿灰色+++3.0-8.0
蓝灰色++++>8.0
[注意事项]①尿标本要新鲜;②试带应存放于阴凉干燥处,避免沾污酸碱及与手接触,有效期一般为一年;③此试带检测的主要是白蛋白,对球蛋白几乎不反应故不适用于非选择性蛋白尿标本(肾炎患者)此时应改用200g/L磺基水杨酸法测定。
④尿液pH{3或)8时,超过了试带的缓冲能力,可出现假阴性或假阳性结果,故可用氢氧化钠或稀乙酸校正尿液pH至5—7再作测定;⑤尿液中盐类较多,特别是磷酸盐较多时,可出现假阳性,加稀乙酸调节pH后可以纠正。
康液中如含有大量红、白细胞,应离心后取上清尿液测定蛋白。
⑥黄疸尿、血尿、浓缩的深色尿都影响结果判断,应加以纠正。
7、尿糖测定
(1)葡萄糖氧化酶试带法
[原理]见血糖测定
[方法]将试带浸入尿中,1秒钟后取出与标准比色板比较并报告。
[参考值]空腹尿糖
(一)
2、尿葡萄糖定量测定(葡萄糖氧化酶法)
[原理]见血糖测定
[方法]先做尿糖定性试验,大概可估计出尿糖量,然后用蒸馏水稀释尿液在含糖量约“+”范围。
其余操作同血糖,结果乘以稀释倍数。
[参考值]0.5—1.0mmol/L
当血糖>8.88retool/L,超过肾阈时可出现尿糖。
[注意事项]
葡萄糖氧化酶法只对尿中葡萄糖产生特异性反应,而与尿中其他糖类和还原性物质不起反应,故特异性较高。
如尿中含有比受体对氧亲和力更强的物质时,则可产生假阴性。
如维生素C、左旋多巴代谢物等。
试验前患者应停用维生素C24h以上。
(三)尿液自动化分析仪检查
[原理]尿液自动化分析仪是用球面积分仪和双波长法测定试剂带上各种试剂垫和尿液接触后出现的不同颜色变化,并分别在数码管上显示,并打印出报告。
试带上另有一个试剂垫补偿区,作为尿液本底颜色,以对有色尿液及仪器变化等因素产生的误差进行补偿。
目前试带最多可测十一项,均系一般化学反应。
原理如下:
1、白细胞(LEU)中性粒细胞中存在特异性酯醇,可分解吲哚酚酯,释放出吲哚酚,吲哚酚与重氮盐发生反应而呈紫色,依其显色之深浅而换算为白细胞数。
此法只能测中性粒细胞而不与单核,淋巴细胞起反应。
2、亚硝酸盐(NIT)引起泌尿道感染的某些细菌可使硝酸盐还原为亚硝酸盐,将膜块中对氨基苯砷酸重氮化生成重氮盐,再与N—1—萘乙二胺二盐酸化物偶联使膜块产生粉红色。
3、pH试剂垫上含有甲基红(pH阈值4.6—6.2)和溴麝香草酚兰,(pH阈值6.7—7.5),二者适量配合可反映尿液pH5—9的变异范围。
在酸性尿中为橙红色到黄色,碱性尿中为绿色到蓝色o
4、蛋白质(PRO)采用指示剂蛋白质误差的原量,对尿中的白蛋白特别敏感,球蛋白的敏感性仅是白蛋白的1/100—1/50,原理见尿蛋白试带法。
5、葡萄糖(GLU)葡萄糖氧化酶催化葡萄糖形成葡萄糖酸和过氧化氢过氧化物酶再催化过氧化氢和碘化钾色原反应呈现黄绿色至棕色o
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