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微生物遗传学,湖北大学生命科学学院蒋思婧,主要内容,微生物的遗传物质基因突变和DNA的损伤DNA的修复病毒的遗传分析细菌基因转移质粒遗传重组微生物育种,主要参考书:
现代微生物遗传学化工出版社陈三凤、刘德虎遗传学高等教育出版社王亚馥、戴灼华DNA科学导论(第二版)科学出版社D.A.米克勒斯等分子生物学(第二版)科学出版社RobertF.Weaver,考试方式:
闭卷,howthehereditaryinformationoflivingorganismsis,遗传学(Genetics),organized,expressed,andinherited,微生物遗传学与经典遗传学的主要区别是什么?
对象,所有生物,微生物遗传学,微生物,普通遗传学,方法,杂交、统计学,?
微生物遗传学的发展简史微生物作为遗传学研究材料的优越性微生物遗传学在遗传育种中的应用微生物遗传学与现代生物技术,微生物遗传学的发展简史,微生物学的发展微生物遗传学的创立微生物遗传学的发展分子遗传学的发展,微生物学的发展,19世纪L.Pastear研究炭疽杆菌(Bacillasarthrasis)时发现:
高温条件下,其毒性大减而抗原性不变,发明接种减毒菌苗预防炭疽病。
R.Koch建立了研究微生物一系列方法(分离纯种),分离得到病原菌,确立了种的概念。
1907年,抗药性变异的发现。
但人们普遍认为抗药性是药物引起而不是基因突变的结果,1928年,转化现象的发现,酵母菌、草履虫、链孢霉的遗传学研究,微生物遗传学的创立,以微生物为对象,研究遗传和变异规律的主要障碍是什么?
无直观的、区分个体的标记,促使微生物遗传学成为独立学科的研究,链孢霉中营养缺陷型的发现细菌抗性突变的研究细菌基因重组的发现转化因子的化学本质的鉴定噬菌体遗传学研究的开展,此项工作的意义:
营养缺陷型的获得,G.W.Beadle和E.L.Tatum用X射线处理链孢霉的分生孢子,得到链孢霉的营养缺陷型。
开辟了生化遗传学研究的广阔天地,它一方面为研究基因作用机制确立了基础,另一方面为阐明代谢途径提供了有效的方法。
5.营养缺陷型的发现,使细菌的基因重组得以发现。
2.在基因作用机制的研究中提出了“一基因一酶”的假设,这是分子遗传学的前奏。
3.利用营养缺陷型探索代谢途径这一思路在微生物遗传学中得到广泛应用,包括基因重组、发育、分化、形态建成等方面的研究。
4.营养缺陷型也是研究基因结构,基因突变的良好材料,同时也应用到人类遗传学、植物、动物等各种研究中。
遗传学的研究普及到任何一种生物,细菌抗性突变的研究,
(1)使人们认识到所有生物都有基本相同的遗传变异规律。
(2)严密的实验方法被开始应用到微生物遗传学领域。
抗药性突变的实质:
药物或突变?
1943年,医生S.E.Luria和物理学家M.Delbriick用严密的实验证实:
抗性是基因突变的结果。
三个经典实验:
波动实验、影印实验、涂布实验,此研究的意义:
细菌基因重组的发现,
(1)人们更为明确地认识到微生物和高等动、植物在遗传规律上的一致性。
(2)用基本相同的方法,发现了霉菌、放线菌的基因重组,使遗传学研究遍及任何一种微生物。
(3)导致了转导的发现。
大肠杆菌的基因重组的研究,19461947,J.Lederberg和E.L.Tatum研究大肠杆菌的有性生殖,发现了基因重组。
意义,转化因子的化学本质的鉴定,1944年,O.T.Avery等证实转化因子化学本质是DNA,1928年,F.Griffith发现转化现象,转化因子的证实,噬菌体遗传学研究的开展,温和型噬菌体成为微生物遗传学、分子遗传学、遗传工程的有效手段,转导现象的发现,微生物遗传学的发展,基因调控、操纵子的理论,染色体基因图的制作,突变机制的的研究,可跳跃的遗传组分,基因功能的研究,1961年,Jacob、Monod提出了有关乳糖代谢操纵子(operon)基因调控与噬菌体cI基因调控的模式理论,负调控由阻遏蛋白(repressor)担任。
一连串基因调控机制被发现:
包括转录衰减(transcriptionalattenuation)、翻译控制(translationalcontrol)及合成替代的s蛋白(synthesisofalternatesproteins)等。
1966年,Gilbert、Muller-Hill与Ptashne成功地分离了乳糖代谢操纵子的阻遏蛋白。
Engelsberg发现的激活蛋白(activator)担任操纵子的正调控。
基因调控的理论,1950年代早期,Demerec等人对依赖链霉素的大肠杆菌突变株深入研究,找出不同化合物致突变的机制。
1970年代中期,Witkin及Radman分别找到了大肠杆菌的SOS系统,此系统对突变的诱导极重要。
1970年代,Ames及其同事从沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)his操纵子的研究发展出一套测试菌株,可以检验绝大多数突变剂的致突变性,明确建立了突变剂与癌症的关系,也大大促进了突变剂与突变生成的研究,Benzer、Freese及其他噬菌体T4研究者通过噬菌体研究突变机制,突变机制,跳跃因子作为各种载体的开发1970年代中至晚期,Kleckner、Botstein、Cohen及Berg研究如何利用带有抗生素抗性基因的跳跃因子,而Toussaint及Casadaban开发转座噬菌体Mu作为各种载体。
这些均成为目前微生物遗传研究者不可或缺的工具。
跳跃基因的研究因为基因操作技术的成熟得以快速发展Starlinger、Saedler及Shapiro于1960年代中至晚期追随麦克林托克(BarbaraMcClintock)研究玉米跳跃因子的脚步而在细菌系统钻研跳跃基因。
跳跃的遗传组分,诱变,筛选突变体,解析基因功能1972年,Shimada、Weisberg及Gottesman发展出检测噬菌体插入染色体不同位置的技术,因而有更多的基因被克隆成功。
Beckwith与Sanger研究不同基因与操纵子间的融合,比如,trp-lac操纵子间的融合、lacZ基因及其他许多报告基因(reportergene)与各种不同的基因产生融合以研究各类基因调控。
基因功能的研究,从1960年代初开始,大肠杆菌的染色体基因图就由Hfr接合(Hfrcrosses)与噬菌体P1共转导(P1cotransduction)的实验数据中逐步累积形成,1996年,第九版的大肠杆菌的染色体基因图基因数是1958个,1963年染色体基因图上有约100个基因,,1987年,Kohara完成了全部的限制性酶切图及以噬菌体P1为载体所制备的基因库。
1997年,大肠杆菌全部基因体序列完成定序,共有4,639,221个核甘酸对,推定其中有4288个基因。
1990年基因数增至约1400个,染色体基因图的制作,1943GenesaremadeofDNAAveryetal(RockefellerU.)1953DiscoveryofDNAstructureWatsonandCrick(Cambridge)1975InventionofDNAsequencing-MaxamandGilbert,Sanger1977PhiX174(5.3kb)-Sanger1983Phagelambda(48kb)-Sanger1987AutomatedDNAsequencingHoodetal.andABIModel3731992Smallpoxvirus(186kb)Venter(TIGR)1995Haemophilusinfluenzae(1.83Mb)Venter(TIGR)1996Yeast(12Mb)InternationalteamleadbyAndreGoffeau1997E.coli(4.7Mb)F.Blattner(Wisconsin)1998C.Elegans-worm(97Mb)Sulston(SangerInst.)andWaterston(WashU.St.Louis)1999Drosophilamelanogaster-fly(160Mb)Venter(Celera)2000Human(3000Mb)Venter(Celera)andHumangenomepublicproject2002Mouse(3000Mb)Venter(Celera)andMouseGenomeSequencingConsortium2003SargassoSea1800speciesVenter(IBEA),Milestonesingenomesequencing,自体催化DNA和染色体复制,分子遗传学的发展,分子遗传学其着眼点和研究方法有别于经典遗传学,基因的两个基本属性:
异体催化蛋白质合成,基因与酶的关系,半保留复制,基因mRNA蛋白质(中心法则),生物学和物理学、化学的关系?
20世纪初,量子理论统一了物理和化学,20世纪50年代,生物学开始收益于物理化学思想的输入,薛定谔:
“生命是什么从物理学角度看活细胞”,生物学这门学科的特点?
Delbruck:
分子生物学之父,微生物作为遗传学研究材料的优越性,所有生命现象都遵循基本法则物理和化学定律,基本粒子的物理和化学行为最终确定任何复杂生物系统行为的参数:
细菌、植物、青蛙、人,“还原论”解释生命,复杂、多细胞的有机体,简单、单细胞的有机体,纯化的细胞组分,实验系统:
19001910,在微生物以外的各种生物中证实了孟德尔定律的普遍性,19101930,与细胞学结合,阐明遗传物质的传递规律,染色体变异和进化的关系,1940开始,阐明基因突变机制和基因作用机制,微生物方面的研究占有重要位置,微生物的特性,单细胞体制或多细胞少分化体制营养体多为单倍体多数能有一定培养基上生长繁殖在固体培养基上,能由一个细胞通过性繁殖形成菌落繁殖迅速代谢旺盛,在液体培养基中能在短时间内积累大量代谢产物。
环境因子能对分散的细胞起均匀而直接的作用。
有性世代在较短时间内完成。
微生物有最简单的类型病毒。
易获得营养缺陷型便于作为基因作用、基因突变的研究材料便于作为研究杂交、转导、转化等现象的材料便于作为基因精细结构的研究材料能被用作研究复杂体制的生物的简单模型。
可作为基因克隆和表达的系统,微生物作为遗传材料的优点,果蝇复眼原基移植实验,原基幼虫中一能发育成成虫的翅、触角、复眼的组织块v-杏红色cn-辰砂色+-暗红色,?
v+物质cn+物质野生型物质,色氨酸,v+,cn+,GrowthofMutantstrainsofNeurosporaonDifferentGrowthmedia,Citrulline:
瓜氨酸ornithine:
鸟氨酸,arg1,arg2,arg3,arg4arg7,DNA是遗传物质-phageT2(HersheyandChase,1952)基因和蛋白质是共线性的-phageT4(Brenner,1964)遗传密码由三个连续的核苷酸组成-phageT4(Cricketal,1961)DNA的复制由蛋白质复合物和核糖核苷酸引物引发-phagephiX174(GoulianandKornberg,1967)滞后链的合成是不连续的-phageT4(OkazakiandOkazaki,1969)DNA连接酶(ligase)催化DNA分子的共价连接-phagelambda(Gellert,1967),Afewimportantdiscoveriesthatrelieduponphageresearchinclude:
Centraldogma(中心法则):
随机发生的突变通过遗传选择在种群中固定下来-phageT1(LuriaandDelbruck,1943)缺失作图提供了刻画基因精细结构的方法-phageT4(Benzer,1957)重组发生在核苷酸之间-phageT4(Benzer,1957)不同的诱变剂产生不同的突变模式如独特的突变热点-phageT4(Benzer,1957)细胞的限制-修饰(Restriction-modification)系统能决定导入的DNA的命运-phageslambdaandP1(LuriaandHuman,1952;DussoixandArber,1962)噬菌体能通过转导将染色体DNA在不同细菌间转移-phageP22(ZinderandLederberg,1952),Moleculargenetics(分子遗传学):
转录调控可以通过蛋白质与对应DNA位点的结合来实现-phagelambda(JacobandMonod,1961;Ptashne,1967)转录调控可以通过抗阻遏蛋白的抑制作用来实现-phageP22(Levineetal.,1975;Botsteinetal.,1975)通过转录抗终止作用调控基因的表达-phagelambda(Roberts,1969)通过mRNA的降解调控基因的表达-phagelambda(GuarnerosandGalindo,1979),Geneticregulation(遗传调控):
基因克隆-phagelambda(Berg,1972;LobbanandKaiser,1973)蛋白质的SDSPAGE电泳-phagesT4andT7(Laemmli,1971;Studier,1973)噬菌体展示利用噬菌体RNA聚合酶过表达克隆基因,Methods(方法):
微生物遗传学在高等动植物遗传育种中的应用,用合成培养基,建立高等生物的纯系(即细胞株),使高等生物的细胞能体外培养。
突变型筛选单倍体细胞培养体外细胞融合和体细胞杂交转基因植物和转基因动物,微生物遗传学与现代生物技术,医药生物技术,饲料:
饲用酶制剂、氨基酸、生长激素,植物:
转基因农作物、作物遗传育种,杀虫剂:
重组病毒杀虫剂、重组细菌杀虫剂,动物:
转基因、动物克隆、动物生物反应器、动物疫苗、动物遗传育种,食品:
酶制剂、保鲜剂,农业生物技术,核心:
工业生物催化剂(酶)改性和提高,实质:
生物催化和生物转化,应用:
洗涤剂、纺织、皮革、食品、饲料、酒精和造纸等,工业生物技术,基因工程,发酵工程,细胞工程,蛋白质工程,植物和动物转基因工程,生物技术,
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