新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件第二部份仪器类SOP.docx
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临床基因扩增实验室标准操作程序目录
编号
名 称
页面
第一部分管理类SOP
SOP_18-1
临床基因诊断实验室设置及管理
4-10
S0P_18-2
实验室人员的配置及培训程序
11-12
S0P_18-3
手套使用及左右手分开的原则
13-13
S0P_18-4
实验室台面摆放顺序程序
14-14
S0P_18-5
实验室内务管理制度
15-15
S0P_18-6
实验室清洁制度
16-16
S0P_18-7
实验耗材的购买、质检和储存程序
17-19
S0P_18-8
仪器申请、采购、验证和管理程序
20-20
S0P_18-9
试剂的质检标准操作程序
21-21
S0P_18-10
实验室残留试剂药品、废弃物处理程序
22-22
S0P_18-ll
实验室生物防护程序
23-23
S0P_18-12
PCR实验室仪器故障、试剂耗材发生质量问题的应急处置程序
24-25
S0P_18-13
抱怨的处理程序
26-27
S0P_18-14
实验室记录的管理
28-29
S0P_18-15
实验室化学试剂的管理及配置标准操作程序
30-32
S0P_18-16
标本的采集、验收和保存的标准操作程序
33-35
S0P_18-17
标本与扩增板次唯一标识编号程序
36-36
S0P_18-18
实验室室内质量控制标准操作程序
37-38
S0P_18-19
实验室室间质量评价标准操作程序
39-39
SOP_18-20
新型冠状病毒核酸检测结果分析与报告管理及可疑、阳性结果讨论审签制度
40-48
S0P_18-21
新型冠状病毒核酸检测疑似阳性结果、可疑结果处置应急预案
49-53
第二部分仪器类SOP
S0P_18-22
移液器使用、维护与校准标准操作程序
54-55
S0P_18-23
移动紫外线消毒车使用、维护与校准操作程序
56-56
S0P_18-24
传递窗操作程序
57-57
S0P_18-25
生物安全柜使用、维护与校准操作程序
58-60
S0P_18-26
CleancubeMini过氧化氢空间消毒器使用、维护与校准操作程序
61-64
S0P_18-27
台式高速冷冻离心机使用、维护与校准操作程序
65-66
S0P_18-28
高压蒸汽灭菌器使用、维护与校准标准操作程序
67-68
S0P_18-29
超净工作台使用、维护与校准标准操作程序
69-69
S0P_18-30
旋涡振荡器使用与维护标准操作程序
70-70
S0P_18-31
冰箱使用、维护与校准操作程序
71-72
S0P_18-32
天隆GeneRotex96全自动核酸提取仪使用、维护与校准程序
73-74
S0P_18-33
MA-6000基因扩增检测仪使用、维护、校准程序
75-81
S0P_18-34
优思达UC0102核酸扩增检测分析仪使用、维护、校准程序
82-84
第三部分项目类SOP
S0P_18-35
临床标本的处理(核酸纯化)程序
85-86
S0P_18-36
新型冠状病毒2019-nCoV基因(达安红盒)扩增检测操作规程
87-92
S0P_18-37
新型冠状病毒2019-nCoV基因(金豪)扩增检测操作规程
93-97
S0P_18-38
新型冠状病毒2019-nCoV基因(之江)扩增检测操作规程
98-103
S0P_18-39
优思达新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测操作程序
104-106
S0P_18-40
新型冠状病毒2019-nCoV基因(中元)扩增检测操作规程
107-111
文件审批者:
发布日期:
年月曰
第二部分仪器设备类SOP
S0P_18-22移液器使用、维护与校准标准操作程序
1目的
正确使用移液器,确保移液器加样的精确性和准确性。
2适用对象
各种品牌、型号的可调式移液器。
3负责人
李四四
4操作人
分子生物组检验人员
5操作程序
5. 1转动旋钮设定移液量。
设定的移液量不可超出该移液器规定的范围,易造成移液器损坏。
5. 2装上配套的吸头(Tip)o
5. 3将按钮压至第一停点位置。
5. 4将移液管吸头浸入液面下2〜3mm深处,然后慢慢松开按钮吸入液体。
待移入吸头吸满液体后,将吸头撤出液面,擦掉吸头外侧的所有液滴。
5. 5轻轻压下操作按钮至第一停点位置,放出液体。
约1秒钟后,继续将操作按钮向下压至第二停点位置。
待吸头液体放干净后,将吸头贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中,撤出吸头。
5. 6松开按钮使之回到起点位置。
需要时,可更换吸头继续移液操作。
6维护与保养
加样器应根据使用频率进行维护,但至少应每3个月进行一次,具体方法如下:
6.1一般维护可用中性洗涤剂清洁,或者用60%的异丙醇,然后用蒸馅水反复洗涤,去除洗涤剂或异丙醇,晾干。
清洁后活塞处可使用一定量的润滑剂。
6. 2如果有液体进入加样器内的严重污染,可以将加样器拆开后进行清洁,具体拆开步骤参照
加样器说明书。
6.3高压消毒,有的加样器的吸管部分可高压消毒(12FC及1巴压力下消毒20分钟),如Eppendoff的Research单道可调加样器。
但需注意的是消毒时不可超温超时,也不能挤压放置,以免造成变形。
6. 4各区的加样器应有各自的标识,清洁和消毒时,应分别处理。
7校准程序
每隔半年请太阳市计量监督局对移液器进行一次校准,详细记录校准仪器的名称型号、以及校准时间。
8引用的图表
8.1YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-22-01附表22:
移液器维护记录表
8.2YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-8-01附表10:
仪器设备校准记录表
S0P_18-23移动紫外线消毒车
使用、维护与校准操作程序
1目的
正确使用移动紫外线消毒车进行消毒。
2适用范围
适用于本室使用的移动紫外线消毒车。
3品牌
翔东型号:
普通型产地:
中国丹阳市
4操作程序
4. 1打开保护门。
4. 2掘下上侧小按钮,用手托住灯臂往上抬至需要位置。
4. 3插上电源,打开灯开关。
4. 4根据需要设定时间。
4. 5使用完毕将按钮据到底,同时另一手托住灯臂慢慢将灯管放进灯箱内,关上保护门。
4. 6不同实验区的紫外线消毒车应有各区标识,避免混用。
5维护和校准程序
5.1日常维护:
用抹布擦拭紫外灯车表面及灯管表面(通常每周1次)。
5. 2校准:
医院按重点部门每个月统一对紫外灯管进行照射测试,本室作好相关记录。
附:
紫外线强度指示卡使用方法:
a) 打开紫外灯管5min,待其稳定。
b) 将指示卡置于距灯管下方垂直Im中央处,有图案一面朝向灯管,照射Imin。
c) 将图案中间的感光色块颜色与两端的标准色块(分别为90uW/cm'和70uW/cn?
)对比。
d) 结果判断:
新紫外灯管测试辐射强度值N90uW/cm2为合格;旧灯管辐射强度值N70pW/cm'时可继续使用,<70uW/cn?
时应更换。
6相关文件
移动紫外线消毒车说明书。
7相关记录
7. 1YCXZYY/JYK-JL-S0P_l8-23-01附表24PCR移动紫外线消毒车使用记录表
7. 2YCXZYY/JYK-JL-S0P_18-23-02附表25PCR移动紫外线消毒车维护记录表
7.3YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-8-01附表10:
仪器设备校准记录表
S0P_18-24传递窗操作程序
1目的
正确使用传递窗来进行试剂、标本的传递。
2适用范围
适用于本室第一区到第二区试剂的传递和第二区到第三区标本传递
3产地
中国太阳
4操作程序
4. 1打开试剂准备区传递窗门。
4. 2将配制好的试剂放于传递窗内,并关闭传递窗门。
4. 3打开标本处理区与试剂准备区相连的传递窗门,取出试剂并关闭传递窗门。
4.4打开标本处理区与扩增产物区相连的传递窗门,将已准备好的预扩增的PCR标本放于传递窗内并关闭传递窗门。
4. 5打开扩增产物区传递窗门,取出预扩增的PCR标本并关闭传递窗门。
5维护和保养程序
每日实验结束用75%酒精擦拭传递窗内部,开启紫外灯消毒1小时,作好相关记录。
6相关记录
6. 1YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-35-01附表21PCR实验室流程图
S0P_18-25生物安全柜使用、维护与校准操作程序
1目的
保证生物安全柜内的高洁净、无污染,保证操作人员的生物安全。
2适用范围
本实验室内所有生物安全柜。
3负责人
李四四
4操作人
分子生物学组检验人员
5操作程序
5. 1打开控制面板上的钥匙开关按钮,即接通了装备的总电源。
5.2按下风机开关,使装备在正式使用前开机30分钟,并开启紫外灭菌灯,杀灭工作区残留细菌。
5.3当按一下风机按钮时送风风机与排风风机同时开始工作,此时液晶显示屏显示的是送风或排风过滤器的压差损失,即按一下排/送按钮可以看到送风或排风过滤器的压差损失交替变换。
5. 4工作时,按一下照明按键,日光灯打开。
5. 5如需箱内插座通电,按一下插座按键,内箱后下方的电源插座通电。
5.61作时,物品经过箱体右侧传递窗放入箱内,放好后,把里外两道门关好,确保箱体不漏气;操作时把手伸进已配置好的手套里便可开始工作。
5. 7装备工作区后墙突起装置是压差传感器的通气口,所以用户不得堵塞该通气口,也不得在该装置上悬挂上物件。
5. 8超高效过滤器有其使用寿命,随着使用期的延长,尘埃及细菌积聚于过滤器会导致超高效
过滤器压力损失的增大,希望装备能运行于不低于10000级空气质量的背景环境中,若长期运行于劣质空气环境中会导致超高效过滤器的频敏更换。
6维护程序
6. 1使用环境:
使用温度范围(25±15°C);相对湿度(85%以下-25°C);大气压力(80—105Kpa)。
6. 2使用前须知:
6. 2.1安全柜启动与关闭
a) 穿好清洁的实验室工作服,把手洗净,正确带上手套。
b) 用75%的酒精或其它消毒剂全面擦试清毒柜内的工作平台。
c) 打开风机和紫外线灯,至少进行安全柜30分钟,以保证工作区空气中的污染物被完全清除,然后再将工作中所需的所有材料放入柜中。
d) 擦试干净你工作中所需要的每一件物品及柜内摆放物品的地方。
e) 不要在入气栅栏网前放置物品。
F)放置好柜内的所有物品后,尽量减少污染物体在清洁物体上的移动。
要将两者隔离开。
g) 安全柜不应过载,整个工作中所需要的每一件物品都应在工作开始前放置在安全柜中,以
便在工作完成前再没有任何物品需要经过空气隔层而拿出或放入。
h) 从安全的角度,请仔细检查手套有无破损,尤其是手套端口与圆圈接触部份有无漏洞,如有破损需马上更换新手套。
请尽可能在柜最里处工作,工作至少也要距前入气流栅栏网150mm、及左右侧距过滤器边150mm。
i) 当完成工作时,将所有的物品取出,并用75%的酒精擦试柜内四面。
关闭前至少再运行lOmin以便将工作区污染物质排出。
检查工作台下器皿,如有必要,请消毒擦试。
关闭风机。
j) 离开实验室前,脱掉实验服,并彻底洗净双手。
6. 2.2在安全柜里的工作
a) 正确运用微生物实验技术,如尽量端平开口的导管和瓶子以免可能的溅洒。
b) 使用便利的导管装置,不要使其开口,在柜体内部利用水平导管废物盘盛放适当的消毒剂,不要在柜外地板上使用垂直导管废物盘。
c) 一般来说,在安全柜内不应使用点火装置。
由火焰产生上升热气流会首先阻碍用以保护柜内物品的下流气体层。
火焰还会产生气流搅动,这会使保护操作人员入气帘气流中断。
不断积累热量还会对HEPA过滤器造成损害。
d) 操作期间如果需要拿出或移入任何物品,请尽量慢地移出或移入您的手臂,尽量减小空气的搅动,从而避免因气流层的紊乱而导致的污染逸出。
f) 如果您在安全柜中使用了一件可能产生空气搅动的设备,如离心机、搅拌器等,那么请将此设备放在柜子里面,并在运行时停止其它工作。
g) 并非立即需要的设备或物品,不要存放在柜内。
h) 任何洒溅在柜内的东西都应立即清除干净。
如果实验允许的请至少等待3至5分钟再重新开始工作。
7注意事项
7. 1A型生物安全柜适用于无挥发性的有毒化学物质,挥发性放身性核物质的危险度等级为1,
2,3的样品操作。
7.2 B2型生物安全柜适用于有微量挥发性有毒的化学物质,或微量放射性核元素作为微生物学研究的添加剂,生物危险度等级为1,2,3,4的媒质操作。
7.3在使用装置过程中,应注意不要将软质、细微的物品(例如:
软纸巾)放在台面上,以免其被吸入口吸进负压风道和风机中,影响装备运行。
7.4设备在维修保养时绝对不能碰到超高效过滤器的滤芯材料。
7. 5更换过滤器必须是同型号产品。
7. 6当有污染物残留工作台面时应及时清理,工作台面为不锈钢制品,清洗时应注意使其不受损伤,以保证长期使用和保持美观。
7. 7高效过滤器的压差损失在装备出厂时已设定预置值,操作者不得擅自改变压差损失在装备
出厂时的设定预置值。
7. 8当装备中的送风和排风报警灯亮时,装备发出警报声,此功能称为预先报警,此时送风或排风指示灯虽然亮,但并不表示装备已不能正常使用,操作者若想继续使用装备,直至送风或排风过滤器寿命终止是完全可以的,但由于此段使用时间中报警器一直处于鸣响状态,所以操作者可与生产厂家联系,在生产厂家技术人员的指导下消除报警声,操作者应当注意,一但红色报警指示灯亮,装备发出报警声时,需及时与生物安全柜生产厂家服务部门联系有关调换高效过滤器的事宜,如果长时间不予更换会影响装备的安全性能。
8校准程序
每隔半年请太阳市计量监督局对生物安全柜进行一次校准,详细记录校准仪器的名称型号、以及校准时间。
9引用的图表
9.1YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-25-01附表26:
生物安全柜使用记录表
9.2YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-25-02附表27:
生物安全柜维护记录表
9.3 YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-8-02附表11:
仪器设备维修记录表
9.4 YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-8-01附表10:
仪器设备校准记录表
SOP_18-26CleancubeMini过氧化氢空间消毒器
使用、维护与校准操作程序
1目的
保证CleancubeMini过氧化氢空间消毒器正常操作。
2适用范围
CleancubeMini过氧化氢空间消毒器。
3负责人
李四四
4操作人
分子生物组检验人员
5操作程序
5.1设备说明
设备名称
过氧化氢空间消毒器
设备型号
Mini
工作环境
20-30°C,0-60%RH
消毒剂
过氧化氢
电源要求
220V50Hz
最大功率
800W
喷射速度
IL/h
最大工作时间
60min
5.2准备工作
5. 2.1关闭窗户
5. 2.2将房间内的分隔窗帘收起来
5. 2.3关闭所有的空调系统、取暖器、烟雾探测器,封闭通风口。
5. 2.4在入口处粘贴警示牌,人员撤离后再用密封胶带将入口大门封闭。
5. 2.5将设备定位在房间的一角(离墙保持30cm以上),尽量远离空调口、通风口、门窗等。
5. 2.6测量房间的长、宽、高,并计算成立方米(本科室PCR二区为36立方米)。
5. 2.7检查房间的湿度(W60%)
5. 2.8中水平消毒时C=6ml/m3,高水平消毒时C=8ml/m3。
推荐使用剂量表如下:
表1
房间体积(m3)
运行时间(min)
C=6ml/m3
C=8ml/m3
0-40
16
20
40-60
22
30
60-80
30
40
80-100
38
50
100-120
46
59
5. 3操作步骤
5. 3.1加液
检查消毒器内的液位,应当大于储液箱的一半且满足消毒区域用量,若液位不足,需加入过氧化氢液体(“i”键可以切换观察液位)。
加液时应备好干纱布以防过氧化氢洒出,启动设备前加液口盖必须旋紧。
检查消毒器上方喷射口,确保喷射口无异物(加液口盖顶部有通气孔)。
5. 3.2定位
将消毒器放入要进行熏蒸的环境区域内,确保设备水平且周边离墙30cm以上,前方1.5m以上无遮挡,保障喷射出来的过氧化氢汽流易于扩散。
5. 3.3通电
用电源线连接设备(220v),打开设备电源,观察设备待机状态是否正常。
5. 3.4参数设定
根据灭菌区域房间的体积Vm3,计算所需的过氧化氢液体总量Cml(C=V*k,k为使用剂量ml/m3,k=6〜10,一般k=6),再根据液体总量C计算所需设定时间Tmin(T=60min*C/1000);得出T后,在PLC控制面板上输入T值,如T=30min,按下数字键“3”、“0”;按下确认键进入启动模式,最后按下确认键启动设备,启动设备后,将有20秒的延迟时间并伴有蜂鸣音,以便人员离开;如需终止程序,按下数字键“0”即可。
(注意时间输入顺序为:
小时、分钟、秒)T=0.06*V*k
5. 3.5密封与消毒
设备启动后,该区域的出入口应使用密封胶带封闭,并悬挂警示牌。
消毒器停止发生后,蜂鸣音响,提醒发生完成。
消毒区域继续保持消毒作用60min~90min,消毒作用时间结束后,打开通风系统通风60min,排除空气中残余过氧化氢,恢复消毒区域的环境。
作用时间结束前消毒区域需保持密封。
注:
月度熏蒸消毒消毒时,保持消毒作用60min即可;年末熏蒸消毒消毒时,保持消毒作用90min;特殊情况下可以延长保持消毒作用时间。
5.3.6消毒结束
消毒循环结束后,移除警示牌和密封胶带,该区域可恢复正常使用。
5.4维护保养
5.4.1每次消毒器使用完毕后,应及时清洁外表面及喷射口,并保证喷射口黑色内壁无液滴。
5.4.2清洁时用湿纱布,擦净消毒器外壁及喷射口。
不要使用钢渣绒或钢刷,以免损害消毒器外壁。
5.4.3须定期检查设备运行情况是否良好及设备底部过滤器。
5.4.4如停用半年以上,应将消毒器内的液体放出,并用清水冲洗管路。
5.4.5内管路建议每1-2年保养一次。
5.5注意事项
5.5.1过氧化氢空间消毒器只能使用纯过氧化氢溶液,切勿使用其他化学试剂或杀饱子剂等,否则易引起安全事故;加液时需先断开设备电源。
5.5.2喷射口前1.5米以上无障碍物遮挡。
5.5.3对设备进行任何操作的时候,都必须佩带防护手套和护目镜。
5.5.4使用前注意液位是否合适,建议启动前液位大于50%,加液口顶盖是否旋紧。
5.5.5与过氧化氢容易反应的物品应清除出消毒区域,如:
水、有机会、碱性物质等。
5.5.6消毒区域内的物品尽量不要堆放,不要遮挡,保证过氧化氢汽流扩散。
5.5.7消毒区域的暖通系统或其他通风设施应关闭,保证区域的密封性。
5.5.8消毒区域的环境参数建议控制在:
温度20-30oC,湿度0-60%o
5.5.9消毒循环未结束前,禁止人员入内;如遇特殊情况需穿戴专业护目镜、防护口罩、橡胶手套方可短时间进入。
5.5.10为防止冷凝设备应尽可能放置在地面工作,喷口离天花板距离不小于2米。
移动底座仅在设备转运过程使用。
5.5.11消毒过程中应有专人定期巡检,以防引起安全事故。
5.5.12消毒循环结束后,应尽快通风系统排除残余过氧化氢。
5.5.13如果设备需要装箱转运,务必先将设备内部液体排空,防止运输过程泄露。
6校准程序
每隔一年由厂家对过氧化氢空间消毒器进行校准,详细记录校准仪器的名称型号、以及校准时间。
7引用的图表:
8. 1YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-26-01附表28:
过氧化氢空间消毒器使用记录表
8. 2YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-26-02附表29:
过氧化氢空间消毒器维护记录表
8. 3YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-8-01附表10:
仪器设备校准记录表
S0P_18-27台式高速冷冻离心机
使用、维护与校准操作程序
1目的
保证离心机的正常使用。
2品牌
Eppendorf型号:
5424R产地:
德国
3操作规程
3. 1台式高速冷冻离心机应放置在水平坚固的台面上,并力求使仪器处于水平位置以免离心时造成仪器振荡。
3. 2打开电源开关,按功能选择键,设定离心温度、速度和时间。
3. 3待机腔温度达到设定要求时,将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上,关闭机盖。
3. 4按启动键,离心机将执行上述参数进行运行,到预定时间自动停止转动。
3. 5待离心机完全停止转动时打开机盖,取出离心样品。
如不再使用该离心机,关闭电源,用
柔软干净的布擦拭转头和机腔内壁,待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。
4维护程序
4. 1离心室的清洁:
为了避免样本等残留物的污染,应经常对离心机外壳和离心室进行清洁处理。
对离心室清洁,应先打开离心机盖,拨掉电源线,用专用设备将离心机转头旋下,再用中性去污剂(70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染)清洁离心室;离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后,用水冲洗,再用甘油润滑。
4. 2转头的清洁:
转头会被样本残留物污染,也可能会被某些化学试剂腐蚀,因此应对转头每月进行清洁维护。
每月用中性的清洁剂清洁转头一次,并在仪器使用记录本上作好记录,以延长转头的寿命。
4. 3离心结束后,使离心机盖打开,取出标本,应及时用干的软布拭去离心室的冷凝水。
(此步仅适用于冷冻离心机)。
4. 4日保养:
用75%酒精擦拭离心机表面。
4. 5周保养:
将底部接水盘的水倒去。
4.6月保养:
更换套管,用酒精清洗锥孔。
4.7季度保养:
卸下转子,用75%酒精擦拭离心机四壁。
5校准程序
定期(每年一次)请第厂家维护校准,详细记录校准仪器的名称型号、以及校准时间,出具鉴定报告。
附:
测定项目
a) 制冷:
设定4°C,能够达到,表明压缩机工作正常。
b) 测速:
能否上升至最大速度(14000rpm)及其加速时间。
c) 定时:
设定lOmin,能够在lOmin内进行离心,到达lOmin时结束工作。
6注意事项
6. 1离心机应始终处于水平位置,与外接电源电压匹配,并要求有良好的接地线。
6. 2开机前应检查机腔有无异物掉入。
6. 3离心机不使用时尽量把盖子打开,让水汽蒸发。
6. 4离心时,如发现离心管破裂,必须停止离心,将破裂管密封放入生物垃圾桶,用75%酒精擦拭漏液的锥孔,并开启移动紫外灯照射30-60分钟后才能继续使用。
6. 5样品应预先平衡,使用离心机微量离心时离心套管与样品应同时平衡。
6. 6挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏以免侵蚀机腔或造成事故。
6. 7每次操作完毕,应做好使用情况
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