超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别.doc
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超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别
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作者:
黄锁义,万承俊,邹永芳,李容
【关键词】超声波提取;,,鱼腥草;,,总黄酮;,,鉴别
摘要:
目的为充分利用鱼腥草植物资源,探讨鱼腥草总黄酮的提取及鉴别方法。
方法采用超声波乙醇浸提法从鱼腥草中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用紫外分光光度法测定含量。
结果测得样品中总黄酮的含量C=6.48%,回收率为102.4%,其纯度和产率均较高。
结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取鱼腥草黄酮类物质的有效途径。
关键词:
超声波提取;鱼腥草;总黄酮;鉴别
TheExtractionandIdentificationofTotalFlavanonefromHouttuyniaCordataThunb.byUltrasonicWave
Abstract:
ObjectiveInordertomakeuseoftheresourcesofHouttuyniacordataThunb.,theextractionidentificationoftotalflavanoneofHouttuyniacordataThunb.wasapproached.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromHouttuyniacordataThunb.withultrasonicwaveandethanolextraction.UsingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofHouttuyniacordataThunb..ResultsThecontentofthetotalflavanoneofhouttuyniacordataThunb.wasC=6.48%andtherateofrecoverywas102.4%.ConclusionTheoutcomeandthepurityoftheflavanoneareallveryhigh.Thismethodisapurelyphysicalprocess,andhasnotanypollution.ItisanidealwaytoextracttheflavanoneofHouttuyniacordataThunb..
Keywords:
UltrasonicwaveExtraction;HouttuyniacordataThunb.;Totalflavanone;Identification 鱼腥草(HouttuyniacordataThunb.),又名蕺菜。
别名丑菜,侧耳根,猪鼻孔,臭根草。
列于《名医别录》下品,是味较常见的中草药,广泛分布于长江以南各省,是一种很好的天然保健食品原料[1,2]。
其味辛,性微寒,归肺经,其功能有清热解毒,消痈排脓,利尿通淋,用于肺痈吐脓,痰热喘咳[2]。
现代药理研究表明[3~6]:
鱼腥草有抗病毒、抗菌、解热、抗炎镇痛、升白细胞等作用。
近年来鱼腥草有了新的用途,如:
用来治疗喘息型肺炎、病毒性心肌炎、小儿呼吸感染等[7,8]。
鱼腥草的主要化学成分有癸酰乙醛(也叫鱼腥草素)、月桂醛、2十烷酮、甲基正壬基酮、癸醛、亚油酸及大量的黄酮类化合物[2~9]。
有文献报道鱼腥草中总黄酮的提取方法有乙醇提取法[2]。
但是,这种方法的提取效率仍然较低。
近年来,超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究都已有报道[10,11],表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。
很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响[11]。
但超声技术应用于提取鱼腥草中黄酮类物质的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别。
1仪器与试剂
1.1仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂);ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)。
1.2试剂95%乙醇;亚硝酸钠AR;硝酸铝AR;氢氧化钠AR;三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;冰醋酸AR;醋酸乙酯AR;芦丁标准品(中国药品制品检定所);广西百色市东风菜市市售新鲜鱼腥草。
2方法与结果
2.1总黄酮成分提取取市售新鲜鱼腥草,烘干,粉碎。
精密称取鱼腥草粉末约6g,加80ml95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤,滤渣再加80ml95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤,合并滤液,减压回收乙醇至仅剩5~7ml为止,放置250ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。
2.2测定方法依据以芦丁为对照品测定鱼腥草中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3定量实验总黄酮的含量测定
2.3.1波长的选择取样品液适量,在0.3ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420~700nm波长范围测定络合物的吸光度,络合物于510nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。
2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液(0.1mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,静置6min;再加4%氢氧化钠溶液4.00ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12min,以试剂作空白,于510nm处测吸光度。
结果见表1。
表1紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度(略)
根据上表得回归方程:
A=2.141×10414.377C,r=0.9999。
2.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml,置10ml容量瓶,按标准曲线的制备操作测定吸光度,A=0.910,根据回归方程:
A=2.141×10414.377C,计算样品中总黄酮的含量C=6.48%。
2.3.4回收实验精密量取样品液2ml,加入标准芦丁对照品2ml(0.1mg/ml),同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为102.4%。
2.4定性实验总黄酮的鉴别
2.4.1颜色反应紫外光下呈色反应:
取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应:
取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5min,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应:
取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。
在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。
乙酸镁反应:
取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点。
盐酸镁粉反应:
取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色。
2.4.2纸层析取样品溶液10μl点在滤纸上。
用正丁醇:
醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂,上行展开5h,取出晾干。
喷1%氯化铝乙醇溶液。
吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。
3讨论
实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为102.4%,利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。
超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的应用前景。
黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分。
在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等[12]。
天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能:
消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[13~18]。
近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。
本文实验结果表明,鱼腥草中含有较为丰富的黄酮。
因此,鱼腥草具有广泛开发和利用价值。
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