固相萃取专场交流会-.pdf
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Sizescanbeadjusteddependingonthetextlength.固相萃取技术及在日常分析中的应用固相萃取技术及在日常分析中的应用岛津技迩(上海)商贸有限公司市场部岛津技迩(上海)商贸有限公司市场部Fontsize:
Sizescanbeadjusteddependingonthetextlength.厦门精艺联系人厦门精艺联系人福州售后主管(耗材联系人)黄英:
福州售后主管(耗材联系人)黄英:
189-5913-38120591-87535163许维群许维群0591-87535173售后服务电话售后服务电话400-0592051一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍食品安全领域环境领域汽车化工领域生命科学领域浓缩萃取净化浓缩萃取净化样品前处理的必要性经过固相萃取样品前处理的目的样品前处理的目的经过固相萃取净化前后比较净化前后比较将样品(溶剂相,含有被测物及杂质)在正压、负压、离心或重力条件下,通过含有固体吸附剂的萃取产品(包括萃取柱、萃取膜、萃取吸嘴等),使得被测组分(或者杂质相)被固体吸附剂吸附,最终通过具更高吸附强度的溶剂将被测物洗脱出来(除杂方法则只需要收集合并过柱液体),从而得到纯净的目标化合物进行分析检测的一种样品处理方法。
正压负压离心重力何为固相萃取?
何为固相萃取?
固相萃取相对于液-液萃取的优点固相萃取相对于液-液萃取的优点减少溶剂的消耗和废物的产生避免萃取过程中的乳化现象除杂能力强,易得纯净图谱提高检测限,增加灵敏度分析物的回收率高、重现性好操作简单,易于自动化优点优点2015-1-14固相萃取在相关标准中的应用一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍:
夹杂成分:
夹杂成分预处理:
活化小柱过柱洗净将被保留的夹杂物质洗净洗脱回收被精致浓缩的分离目的成分:
目的成分+脱水(水分析):
目的成分+脱水(水分析)常规固相萃取的方法常规固相萃取的方法12应用:
多用于多残留分析优点:
同时分析多种组分缺点:
属一阶净化,净化效果不如前2种策略多农残中有一定的应用基质分散-QuEChERS方法基质分散-QuEChERS方法2015-1-1413固相萃取流程的建立相关标准文献资料固相萃取小柱的建议操作流程方法优化通过pH值、洗脱强度调整,获得理想回收率和重现性固相萃取方法的建立固相萃取方法的建立固相萃取小柱的选择样品基质目标物质方法验证回收率、重现性验证固相萃取方法的建立一般有机化合物、药品食品添加物、环境污染物质等DNA,RNA萃取、精制蛋白质浓缩、磷酸化肽富集卤素、重金属、稀土类元素固相萃取小柱的选择目标物质的结构样品基质的成分作用机制目标物的官能团对应的作用机制目标物的官能团对应的SPE小柱小柱反相Pharma、PLS-3、RP-1C18、PH正相R-OH-COOHR-NH2NH2、Si、CN阳离子交换R4N+RNH3+CBA、MC-2、WCXSCX、MC-1、MPC阴离子交换RSO3-RCO2-NH2、MA-2、WAXSAX、MA-1、MAX、目标物的性质水溶性样品水、动物组织水性提取液、血样、尿样等有机溶剂样品与水互溶甲醇乙腈丙酮有机溶剂样品与水不互溶正己烷二氯甲烷乙酸乙酯反相反相RP-1、Pharma、PLS-3、C18等离子交换离子交换SAX、SCX、CBA、MPC等正相正相SI、FL、NH2等+水+正己烷离子交换离子交换SAX、SCX、CBA、MPC等样品基质基质和固相的选择事例NH3+NH2NH2CompoundSuggestedmechanismNon-polarPolarIonexchangeMatrixtypeSalinesolution盐分含量多的水试样OliveoilDrinkingwater盐分含量少的水试样油试样离子交换反相模式正相模式固相小柱规格的选择C18固相小柱的最大负载量,通常为填料量的5%2.5mg120uL5mg250uL10mg500uL25mg1.2mL100mg5mL50mg/1mL100mg/1mL200mg/3mL500mg/6mL2g/12mL最大负载量最少洗脱溶剂量*(2倍填料体积)样品对象硅胶基体固相萃取柱聚合物基体固相萃取柱样品对象硅胶基体固相萃取柱聚合物基体固相萃取柱动物源性食品6ml/500mg6ml/1g3ml/60mg6ml/150mg6ml/200mg地表水、饮用水等6ml/1g6ml/200mg生物样品,如血样、尿样等1ml/100mg3ml/200mg1ml/10mg1ml/30mg固相萃取流程的建立相关标准文献资料固相萃取小柱的建议操作流程固相萃取流程的建立-反相固相萃取流程的建立-反相【反相固相】InertSepCHInertSepC2InertSepC18InertSepC18InertSepC8(辛基+Si)(十八烷基+Si)(乙基+Si)(环己基+Si)InertSepPH(苯基+Si)作用机理NH2SO3-分子间引力硅胶母体固相硅胶母体固相保留:
以疏水性相互作用(难溶于水),保留水等极性溶剂中的低极性物质。
洗脱:
用低极性溶剂进行洗脱。
低极性溶剂高极性溶剂水通液速度、pH、有机溶剂含有量通液速度、确认容量状况固相脱水、洗脱液脱水含浸时间和洗脱速度浓缩温度(正好在样品干固前)活化活化、平衡、平衡上上样样清洗清洗脱水脱水洗脱洗脱浓缩浓缩反相固相萃取的操作流程活化/平衡溶剂的置换高极性溶高极性溶剂剂细孔细孔细孔细孔细孔细孔低极性溶剂细孔细孔细孔细孔细孔细孔低极性溶剂低极性溶剂高极性溶高极性溶剂剂甲醇活化平衡水清洗除去干扰物,保留目标物纯水清洗除去极性物质、盐类有机溶剂水清洗増加清洗强度注意目标物不要漏出注意目标物不要漏出杂质杂质目标物目标物洗脱洗脱目标物,不要引入干扰物洗脱液中有机相的比例洗脱液的体积洗脱液中有机相的比例洗脱液的体积注意不要引入保留过强的干扰物注意不要引入保留过强的干扰物氢键力氢键力OONCNCOOHOHOOHOHOHHOHH硅胶母体固相硅胶母体固相保留:
保留:
在在低极性溶剂中低极性溶剂中,通过,通过极性相互作极性相互作用(用(氢键力氢键力、电偶与电偶电偶与电偶相互作用相互作用等等),保留保留目的目的成分成分。
或通过或通过静电引力保留静电引力保留目的目的成分成分。
洗脱:
洗脱:
用用极性溶剂洗脱。
极性溶剂洗脱。
通过通过静电引力静电引力使使保留成分洗脱。
保留成分洗脱。
【极性固相】InertSepCN(氰丙基+Si)InertSep2OH(二醇基+Si)(硅胶)InertSepSIInertSepAL(氧化铝)(硅酸镁)InertSepFLInertSepFL-PR作用机理固相萃取流程的建立-正相固相萃取流程的建立-正相27活化用低极性溶剂进行活化用低极性溶剂进行活化对于固相而言,能够保留极性物质的这些小孔是空的,(活化就是)将这些小孔用低极性的溶剂填满。
像水这样的高极性物质与其他极性物质混合在一起的时候通过这些小孔的时候,再现性就会变差,保留能力下降。
低极性溶剂低极性溶剂水进入的话28上样主要是用低极性溶剂处理后的样品上样洗浄上样上样保持无极性物质极性物质29使用更强极性的溶剂将目标物洗出10丙酮/己烷洗脱30洗脱(分步)多种样品步骤(10乙酸乙酯/己烷)步骤(10丙酮/乙腈)0246810Time(min)02468101214mAU0246810Time(min)02468101214mAU0246810Time(min)02468101214mAU0246810Time(min)02468101214mAU离子交换固相:
选择性高123451234512345123451234512345HPLCconditionHPLCconditionColumn:
InertsilODS-3,5m4.6mmx150mmEluent:
48%CH3CN(0.7%KH2PO4+0.17%SDS,pH4.5)FlowRate:
1.0mL/minCol.Temp:
40Detection:
UV230nmSample:
1.心得静,2.美托洛尔,3.普萘洛尔,4.黄连素,5.UrineUrine(橙色)、STD(紫色)SPESCXSPE固相萃取流程的建立-离子交换固相萃取流程的建立-离子交换尿液中碱性物质的前处理例多虑平32pKapH时,解离度50%pKa2pKa-2碱性化合物解离酸性化合物解离碱性化合物非解离酸性化合物非解离化合物的解离、非解离的平衡点上样:
离子交换基团与目的物同时处于解离的状态,在离子强度低的溶液中,形成离子对。
(pKa,pKb)洗脱:
官能团又或者使目的物质处于非解离的状态,选择性高的抗衡离子进行交换,高离子强度溶剂洗脱。
吸附剂(CBA)目的物质结构COOHpKa=4.8NH3+pKa=10.610.7R975311311-COOH(非解离)-NH4(非解离)-COO-NH3+解离原理静电引力CBACOO-NH3+pH=7保留R保留CBACOOHNH3+pH=3以下洗脱R洗脱HHH方法优化通过pH值溶剂强度等根据标准/推荐流程确认基本流程穿透试验的数据取得洗脱溶剂的数据确认添加低,中,高浓度比较线性添加空白样品进行回收率试验具体研究例子的介绍2015-1-14使用固相评价的对比数据组是什么?
响应值STDBTF2F3W1W2F1F4F5化合物评价是指,如图BT、W、F某一个片段存在问题,又或者小柱对其进行了吸附,导致回收率低使用固相萃取评价方法能够提高成功率反相固相萃取例子2015-1-14ElutionPatternofEmporeDiskPlateC18SD0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.00BreakThroughWash1Wash2Elute1Elute2FractionC18SDCatechinC18SDProcyanidinB2C18SDEpicatechin穿透洗浄液洗浄液洗脱第一片段洗脱第二片段固相的研究例C18固相的研究例C18方法验证回收率、重现性验证检出限精密度准确度加标回收率方法精密度如作为执行标准,还需要6家具有资质的单位验证一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍项目名称项目名称SPE小柱小柱乳制品中三聚氰胺含量测定InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg猪肉中-受体激动剂的分析InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg动物肌肉/水产品/蜂蜜中四环素土霉素金霉素残留分析InertSepPharma3ml/60mg动物源食品中13种磺胺类药物多残留分析InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg鸡肉组织中硝基呋喃及其代谢物分析InertSepPharma3cc/60mg水产品中孔雀石绿和结晶紫分析WondaSepMPC3ml/60mg蜂蜜/牛奶/禽肉中青霉素类抗生素分析InertSep/WondaSepC186ml/500mg辣椒产品中苏丹红分析InertsepAl2O3B(碱性氧化铝)6ml/500mg坚果花生等样品中黄曲霉毒素G1G2B1B2分析InertSepVRA专用小柱水果蔬菜中有机氯分析InerstSep/WondaSepFL6ml/1g水果蔬菜中氨基甲酸酯分析InertSep/WondaSepNH26ml/500mg茶叶中农残分析InertSep/WondaSepGC/NH26ml/500mg/500mg固相萃取小柱在日常检测中的应用固相萃取小柱在日常检测中的应用农兽残农兽残41项目名称项目名称SPE小柱色谱柱小柱色谱柱水中多环芳烃WondaSepC186ml/1g或InertSepPLS-36ml/200mgInertsilODS-P水中酚类WondaSepC186ml/1g或InertSepPLS-36ml/200mgInertCap-5MS/Sil城市供水有机磷InertSepPLS-36ml/200mgInertCap/WondaCap17地表水、地下水及废水中多氯联苯WondaSepC186ml/1gInertCap/WondaCap1水中菊酯类InertSepPLS-36ml/200mgInertsilODS-3饮用水、地表水中微囊藻毒素WondaSepC186ml/1gl或InertSepPLS-36ml/200mgInertsilODS-3固相萃取小柱在日常检测中的应用固相萃取小柱在日常检测中的应用水质分析水质分析称取5g样品于离心管中(精确到0.01g)-加入20ml乙腈,用均质器15000r/min均质提取1min,5000r/min离心5min-取上清液转移至旋转蒸发瓶中-残渣再用15ml乙腈按照上述步骤提取一次,离心,合并2次提取液-将提取液于40摄氏度水浴浓缩至1ml,待净化。
做加标回收率时,标样在提取前加入,并静置1hWondaSepGC-e/NH26ml/500mg/500mg上样洗脱样品前处理活化、平衡5ml乙腈:
乙酸乙酯:
丙酮=3:
1:
2将上述1ml提取液转移至小柱上,再用6ml乙腈:
乙酸乙酯:
丙酮=3:
1:
2分3次洗涤样液瓶,收集流出液用20ml乙腈:
乙酸乙酯:
丙酮=3:
1:
2洗脱,收集浓缩定容1.茶叶中多种农药残留检测-WondaSepGC-e/NH21.茶叶中多种农药残留检测-WondaSepGC-e/NH2浓缩至0.5ml,丙酮:
正己烷=1:
1定容至1ml基质加标图谱及回收率基质加标回收率(基质加标,0.5ppm)准确称取25g样品,加入乙腈50ml,高速均浆2min后过滤,收集滤液于100ml具塞试管中,加入5-7g氯化钠,盖上塞子,剧烈震荡1min,室温静置30min,使乙腈和水相分层。
精确移出10ml乙腈溶液至小烧杯中,挥至近干。
将挥发至近干的提取液用2ml丙酮-正己烷(10+90)溶解,盖上铝箔,待净化。
WondaSepFL-PR6ml/1g上样洗脱样品前处理活化、平衡5ml丙酮:
正己烷=10:
90,5ml正己烷5ml丙酮:
正己烷=10:
90冲洗小烧杯后淋洗小柱,并重复一次,一并收集浓缩定容2.蔬菜、水果中有机氯、菊酯类农药检测-WondaSepFL-PR2.蔬菜、水果中有机氯、菊酯类农药检测-WondaSepFL-PR浓缩至5ml以下时,正己烷定容至5ml上述提取液2ml上样,并收集准确称取25g样品,加入乙腈50ml,高速均浆2min后过滤,收集滤液于100ml具塞试管中,加入5-7g氯化钠,盖上塞子,剧烈震荡1min,室温静置30min,使乙腈和水相分层。
精确移出10ml乙腈溶液至小烧杯中,挥至近干。
将挥发至近干的提取液用2ml甲醇:
二氯甲烷=1:
99溶解,盖上铝箔,待净化。
WondaSepNH26ml/500mg上样洗脱样品前处理活化、平衡4ml甲醇:
二氯甲烷=1:
99,5ml正己烷2ml甲醇:
二氯甲烷=1:
99冲洗小烧杯后淋洗小柱,并重复一次,一并收集。
浓缩定容3.蔬菜、水果中氨基甲酸酯类农药检测-WondaSepNH23.蔬菜、水果中氨基甲酸酯类农药检测-WondaSepNH2浓缩至近干,甲醇定容至5ml上述提取液2ml上样,并收集46农残前处理对应叶绿素色素脂肪酸脂质极性物质InertSepGCWondaSepGC-eInertSepPSA,NH2WondaSepPSA,NH2InertSepSIWondaSepSIInertSepFLWondaSepFL-PRInertSepC18WondaSepC18QuEChERSProductsQuick,Easy,Cheap,Effective,Rugged&Safe农残解决方案只需三步样品处理速度较普通SPE方法更快操作方法简便,更经济基质分散固相萃取用于农残前处理QuEChERS方法的操作步骤QuEChERS方法的操作步骤提取带缓冲盐的AOAC方法15g样品带缓冲盐的EN方法10g样品均质样品转移到50ml空的离心管中测pH值,并调至5-5.5,加内标,振荡1minAOAC方法简单基质的果蔬含色素多的果蔬含脂类多的果蔬同时脂类、色素都多的果蔬简单基质的果蔬含色素多的果蔬含脂类多的果蔬同时脂类、色素都多的果蔬EN方法早期无缓冲盐的方法净化选择提取盐试剂包振荡,离心选择净化试剂WondaPakQuEChERS产品WondaPakQuEChERS产品如何选择合适的WondaPakQuEChERS产品如何选择合适的WondaPakQuEChERS产品净化包的选择根据样品基质不同,选择对应的净化试剂含脂和蜡质的基质,如牛油果、坚果、谷物等MgSO4+PSA+C18色素较多的蔬菜、水果,如叶类蔬菜、茶叶、咖啡豆等MgSO4+PSA+GC-e含色素和脂类的基质,如茄子、胡椒粉、某些婴儿食品等MgSO4+PSA+C18简单基质样品,如苹果、黄瓜、梨等MgSO4+PSA含脂和蜡质的基质,如牛油果、坚果、谷物等MgSO4+PSA+C18简单基质样品,如苹果、黄瓜、梨等MgSO4+PSA含色素和脂类的基质,如茄子、胡椒粉、某些婴儿食品等MgSO4+PSA+C18含脂和蜡质的基质,如牛油果、坚果、谷物等MgSO4+PSA+C18简单基质样品,如苹果、黄瓜、梨等MgSO4+PSA色素较多的蔬菜、水果,如叶类蔬菜、茶叶、咖啡豆等MgSO4+PSA+GC-e含色素和脂类的基质,如茄子、胡椒粉、某些婴儿食品等MgSO4+PSA+C18+GC-e含脂和蜡质的基质,如牛油果、坚果、谷物等MgSO4+PSA+C18简单基质样品,如苹果、黄瓜、梨等MgSO4+PSAQuEChERS产品选择指南取匀浆好的牛肉5g(精确到0.01g),+50ul,10ppm的混标,分别加入20ml、20ml、10ml0.1mol/LEDTA-Mallvaine缓冲液,并加2ml的2%醋酸铅溶液,置于冰水浴中超声10min后取出,3000r/min下离心5min,合并上清液,正己烷除脂,定容至50ml,离心,取上清液,混匀,待净化。
InertSepPharma3ml/60mg上样清洗洗脱脱水干燥样品前处理活化、平衡5ml甲醇5ml水50ml待测液中准确取10ml过柱5ml水、5ml甲醇:
水=1:
1910ml甲醇:
乙酸乙酯=1:
9浓缩定容4.肉中土霉素、金霉素以及四环素前处理-InertSepPharma4.肉中土霉素、金霉素以及四环素前处理-InertSepPharma4.肉中土霉素、金霉素以及四环素前处理-InertSepPharma4.肉中土霉素、金霉素以及四环素前处理-InertSepPharma名称空白加标基质加标回收率回收率RSD回收率回收率RSD土霉素98.63%7.5%85.19%2.2%四环素100.96%8.4%95.73%5.8%金霉素91.05%6.6%98.11%8.1%色谱柱:
InertSustainC185um4.6*250mm流动相:
乙腈:
甲醇:
0.01%草酸溶液=2:
1:
7流速:
1.0ml/min柱温:
25进样量:
60ul检测波长:
350nm仪器:
ShimadzuLC-20A准确称取5g(精确至0.01g)捣碎的猪肉,加入10ppm的沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的混标10ul,1ppm的内标各100ul于50ml离心管中,加入20ml乙酸胺缓冲液,均质提取1min,充分酶解,低温8000r/min离心5min,收集上清液于离心管中,加入20ml正己烷,震荡均匀,低温12000r/min离心5min,弃去正己烷层,取水层,待净化WondaSepMPC3ml/60mg上样清洗洗脱脱水干燥样品前处理活化、平衡3ml甲醇3ml水3ml0.1mol/l盐酸溶液上述提取液上柱,流速1ml/min3ml0.1mol/l盐酸溶液、3ml水、3ml50%甲醇、3ml正己烷3ml乙酸乙酯:
甲醇:
氨水=55:
45:
5浓缩定容5.猪肉中瘦肉精前处理-WondaSepMPC5.猪肉中瘦肉精前处理-WondaSepMPC6.猪肉中磺胺类物质检测6.猪肉中磺胺类物质检测样品前处理WondasepMPC(60mg/3ml)活化:
2ml甲醇和2ml0.1mol/L的HCl上样淋洗0.1mol/L盐酸溶液4ml洗脱浓缩、流动相定容取均质后的猪肉5g,加入50ml的离心管中,加入乙酸乙酯20ml,涡旋一分钟,4000r/min5min离心后,去上清液至鸡心瓶中。
将残渣重复用20ml乙酸乙脂提取一遍,涡旋、离心,取上清合并备用。
鸡心瓶中加入4ml0.1mol/L的HCl溶液,用旋转蒸发仪浓缩至液体少于3ml,用2ml的0.1mol/L的HCl和正己烷清洗烧瓶,收集合并清洗液与浓缩后的液体,涡旋1min,3000r/min离心5min,弃去上层正己烷层,下层清液备用,上SPE柱。
4ml5%氨水-甲醇40度氮吹名称动物组织基质加标回收率%RSD%磺胺吡啶87.244.81磺胺甲基嘧啶97.285.26磺胺二甲基嘧啶89.007.30磺胺甲氧哒嗪87.234.62磺胺间甲氧嘧啶88.104.37磺胺氯哒嗪88.213.80磺胺甲噁唑92.483.51苯酰磺胺85.164.11磺胺二甲氧哒嗪89.653.65色谱柱:
InertsilODS-35um4.6*250mm(国标29694-2013指定)流动相:
0.1甲酸水:
乙腈0-5min83:
175-10min83-80:
17-2010-22min80-60:
20-4022-23min60-10:
40-9023-30min10:
9030-31min10-83:
90-1731-48min:
83:
17流速:
1.0ml/min柱温:
30进样量:
100ul检测波长:
270nm6.猪肉中磺胺类物质检测6.猪肉中磺胺类物质检测7.动物组织中氯霉素的高效液相色谱法测定动物组织中氯霉素的高效液相色谱法测定取均浆后的猪肉10g,加入50ml的离心管中,加入10ul,100ppm的氯霉素标准液后(保证每kg原料乳中各含0.1mg标样),加入20ml乙酸乙酯,涡旋1min后,4000r/min离心5min。
取出上清液,残渣继续用20ml乙酸乙酯同法操作一次,合并两次上清液。
并于40度条件下,旋转蒸发仪内旋干。
取4%氯化钠:
甲醇=70:
30的溶液4ml清洗旋蒸容器,并加入3ml正己烷收工震荡旋转1min,收集清洗液;并继续加入1ml4%氯化钠:
甲醇=70:
30的复溶液及1ml正己烷清洗容器,收集并合并两次清洗液。
涡旋1min,于4000r/min离心5min,弃去正己烷层,用4ml正己烷重复上述动作,得提取液。
InertSepPharma3ml/60mg上样清洗洗脱样品前处理浓缩定容活化、平衡3ml甲醇3ml水3mL10%甲醇-水3mL甲醇7.动物组织中氯霉素的高效液相色谱法测定动物组织中氯霉素的高效液相色谱法测定名称基质加标名称基质加标回收率%RSD%氯霉素氯霉素84.183.63色谱柱:
InertsustainC185um4.6*250mm流动相:
乙腈:
水=30:
70流速:
1.0ml/min柱温:
30进样量:
20
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