实验7-大豆分离蛋白的制备Word文档格式.doc
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蛋白的提取方法有许多种,例如:
碱提酸沉、酶提酸沉、超声酸沉、酶解提取、膜分离法等。
本实验采用超声波辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白,通过粉碎、正己烷低温浸提脱脂、纤维素酶酶解增溶等预处理方法,采用超声波辅助“碱提酸沉法”使蛋白质在等电点状态下析出。
通过本实验,掌握超声波、酶解、离心分离、浸提、等电点析出等蛋白质分离手段,了解植物蛋白制备的常用技术。
2.材料、仪器与设备
2.1实验材料
黄豆,1mol/LNaOH、10%HCl、正己烷、纤维素酶
2.2实验仪器
恒温水浴锅、粉碎机、高速离心机、超声波仪、pH计、烘箱、电子天平、250mL三角瓶、平皿、大烧杯、玻棒、药匙
3.实验内容与步骤
3.1实验流程
黄豆粉碎→正己烷低温浸提(脱脂)30min→离心分离→收集沉淀→烘干20min→纤维素酶酶解→离心分离→收集沉淀→碱溶(调pH11)→超声波处理20min→离心分离→收集上清→等电点酸沉析出(调pH4.5)→离心分离→收集沉淀→烘干30min称重→计算蛋白质粗提回收率
3.2实验步骤
(1)黄豆预处理
选择果粒饱满,色泽明亮的黄豆为原料,称取黄豆250g用小型粉碎机粉碎,破碎粉末用60目的不锈钢网筛过筛,去除夹杂物,备用。
(2)溶剂低温浸出法制取脱脂豆粕粉
取250mL三角瓶,加入粉碎后的豆粉20g,100mL正己烷,瓶口用平皿覆盖,恒温水浴60℃浸提30min使大豆中的油脂溶出,5000rpm离心15min后去上清液,将沉淀收集后放烘箱内50℃,20min烘干,得脱脂豆粕粉样品。
以下周四完成
(3)纤维素酶酶解辅助提高大豆蛋白溶出率
取10g烘干的脱脂豆粕粉,按1:
15料液比加入150mL蒸馏水,用10%HCl溶液调至pH5.0,按0.5%(脱脂豆粉)的酶量加入纤维素酶,在恒温水浴锅里加热至48℃,并恒温酶解90min。
酶解结束后,将酶解液以5000rpm离心15min除去上清液,收集沉淀。
(4)超声辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白
收集酶解离心沉淀,按1:
15料液比加入150mL蒸馏水,用1mol/LNaOH溶液将pH调至11,用超声波仪进行辅助提取,超声设置200W功率,超声时间5s、间隙5s、总工作时间20min;
超声结束后静置20min,以5000rpm离心15min,通过离心分离除去浸提液中的细豆渣、淀粉,收集上清液,得澄清的蛋白质水溶液。
采用酸沉工艺,边搅拌边在澄清的蛋白质水溶液中缓慢加入10%的HCl溶液,调节溶液的pH至4.4~4.6,使蛋白质在等电状态下沉淀,此时蛋白质溶液由浅黄色的澄清溶液逐渐变成白色浑浊液。
当溶液达到等电点时,立即停止搅拌,静置30min,使蛋白质能形成较大的颗粒沉淀下来。
将酸沉后溶液得到的沉淀物用离心机5000rpm离心15min,弃去清液,收集沉淀,放烘箱内50℃,30min烘干,得大豆蛋白粗提物。
3.3 计算大豆蛋白提取率
%
注意:
由于蛋白质高温下易变性,整个实验操作中有机溶剂脱脂、酶解、干燥等环节均要在60℃以下的低温下进行。
参考文献
[1]徐静.大豆蛋白分离工艺研究[J].金山油化纤2006,25(3):
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[3]高红岩,石国,马永强.纤维素酶解对高变性大豆蛋白溶出率影响的研究[J].食品科技,2001
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498-501
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