新课标高考生物二轮复习专题九《生物技术实践》10Word格式文档下载.docx
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鉴别不同种类的微生物
(2)培养基的营养成分
营养要素
来源
碳源
无机碳源
CO2、NaHCO3等含碳无机物
有机碳源
糖、脂、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等
氮源
无机氮源
无机氮、NH3、铵盐、硝酸盐、N2等
有机氮源
牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸
生长因子
维生素、氨基酸、碱基
提示:
培养基的营养要素除了碳源、氮源和生长因子外,还有水、无机盐以及不同微生物生长对pH以及氧气的需求。
(3)消毒和灭菌的区别
条件
结果
常用的方法
应用的范围
消毒
较为温和的物理或化学方法
仅杀死物质表面或内部一部分对人体有害的微生物
煮沸消毒法
一般物品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源等
灭菌
强烈的理化因素
杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子
灼烧灭菌
接种工具
干热灭菌
玻璃器皿、金属工具
高压蒸汽灭菌
培养基及容器的灭菌
(4)纯化大肠杆菌的原理:
在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
考点二:
酵母细胞的固定化
(1)实验原理:
①固定化酶不溶于反应液中,易于回收,可以重复使用。
②固定化酶和固定化细胞是利用物理和化学方法将酶或细胞固定于一定空间内的技术。
常用方法
包埋法:
适合于较大的细胞
化学结合法
物理吸附法
(2)直接使用酶、固定化酶、固定化细胞的比较
方法
优点
缺点
直接使用酶
催化效率高、耗能低、污染低
对环境条件非常敏感、易失活;
难回收,成本高,影响产品质量
固定化酶
既能与反应物接触,又能与产物分离;
可以反复利用
不利于催化一系列的酶促反应
固定化细胞
成本低、操作容易
反应物不易与酶接近,尤其是大分子物质,反应效率下降
(3)制备固定化酵母细胞成功的关键
加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环,如果浓度过高,将很难形成凝胶珠,如果浓度过低,形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数量少,都会影响实验效果,同时对海藻酸钠溶化时要用小火间断加热,避免海藻酸钠发生焦糊。
考点三:
五种重要物质的提取
(1)提取方法总结
提取物质
提取方法
提取原理
步骤
DNA
盐析法
①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同;
②DNA不溶于酒精,但某些蛋白质则溶于酒精
①溶解在2mol/L的NaCl溶液中;
②加水稀释至0.14mol/LNaCl溶液使DNA析出过滤;
③加入冷却酒精析出。
血红蛋白
凝胶色谱法
根据相对分子质量的大小
①样品处理;
②粗提取;
③纯化;
④纯度鉴定
电脉法
根据各种分子带电性质差异及分子本身大小、形状的不同
玫瑰精油
水蒸气蒸馏法
利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来
①水蒸气蒸馏;
②分离油层;
③除水过滤
橘皮精油
压榨法
通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油
①石灰水浸泡、漂洗;
②压榨、过滤、静置;
③再次过滤
胡萝卜素
萃取法
使提取物溶解在有机溶剂中,蒸发后得到提取物
①粉碎、干燥;
②萃取、过滤;
③浓缩
(2)DNA粗提取与鉴定
①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,不适于作DNA提取的材料,但却是提取血红蛋白的理想材料。
②实验过程中两次用到蒸馏水:
第一次目的是使成熟
的鸡血细胞涨破释放出DNA,第二次目的是稀释NaCl溶液。
③鉴定DNA加入二苯胺试剂并沸水浴加热,观察是否出现蓝色。
(3)血红蛋白的提取和分离操作程序
①样品处理:
红细胞的洗涤(除去血浆蛋白等杂质)、血红蛋白的释放(使红细胞胞破裂,血红蛋白释放出来)、分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来)。
②粗分离——透析:
除去样品中分子量较小的杂质。
③纯化:
一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。
④纯度鉴定:
一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,来测定蛋白质的分子量。
(4)植物有效成分的提取方法
①蒸馏法:
芳香油具有挥发性,把含有芳香油的花、叶等放入水中加热,水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来,形成油水混合物;
冷却后,油水混合物又会重新分成油层和水层,除去水层便得到芳香油。
②萃取法:
需将植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中,使芳香油或色素充分溶解,然后蒸去低沸点的溶剂,剩下的就是芳香油或色素。
③压榨法:
橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中,芳香油的含量较多,可以用机械压力直接榨出,这种提取方法叫做压榨法。
【典例导析】
【例1】
(2009年安徽卷)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述,其中错误的是()
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白膝培养基,经高温、高压灭菌后倒平板
B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml,分别涂布于各组平板上
C.将实验组和对照组平板倒置,37℃恒温培养24~48小时
D.确定对照组无菌后,选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
【答案】D
【分析】本题主要考查微生物的应用与培养的有关知识。
土壤中微生物的量相对稳定,由于实验原因,很容易引起数量的剧烈变化,所以要选择30~300左右进行计数。
【例2】
(2009年宁夏卷)
(1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑______、______和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。
(2)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行________(消毒、灭菌);
操作者的双手需要进行清洗和______;
静止空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能__________。
(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的_______。
(4)通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
(6)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
【答案】
(1)温度酸碱度易培养生活周期短
(2)灭菌消毒损伤DNA的结构
(3)比例合适(4)鉴定(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌
【分析】本题主要考查微生物培养的综合知识。
消毒一般只是消灭体表的微生物,而灭菌是杀死所有的微生物及孢子等。
观察细菌等微生物的有无通常是通过培养来观察菌落的形状、颜色等。
【备战策略】
本专题知识与生活密切相关,对有关知识的考查上注重与之相关的基础知识,并突出重点。
因此在复习中不要“深挖洞”,但要“广积粮”。
要牢固掌握相关的基础知识,在此基础上注重培养获取信息的能力、综合运用知识的能力。
【专题演练】
1.下列有关生物技术的叙述正确的是(多选)()
A.制作果醋时,必需向发酵装置不断地补充氧气,以保证醋酸菌的生长
B.制作泡菜时,罐口封闭要严,否则氧气会抑制乳酸菌的生长繁殖
C.固定化酵母细胞分解葡萄糖速度要比酵母细胞快
D.培养基中添加的蔗糖是植物组织重要的能源物质
2.利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇,经加工可制成燃料乙醇。
使用燃料乙醇减少了对石油资源的依赖.下图为生产燃料乙醇的简要流程,据图分析错误的一项是()
A.要得到微生物A,最好选择富含纤维素的土壤采集土样
B.图中②过程常用的微生物B是酵母菌
C.微生物A和微生物B可利用的碳源相同
D.可用固定化酶代替微生物A起作用
3.(2010年上海模拟)有关平板划线操作正确的是()
A.使用已灭菌的接种环、培养皿,操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌,取出菌种后要马上塞上棉塞
C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线即可
D.最后将平板倒置,放入恒温箱中培养
4.某同学在进行菊花茎尖组织培养时,发现组织材料只分裂而不分化出芽和根,最可能原因是( )
A.未进行光照B.培养基中没有加入蔗糖
C.培养基营养过多 D.细胞分裂素和生长素配比不对
5.制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基,待培养基冷却至50℃左右时,在酒精灯火焰附近倒平板(步骤如图所示),倒平板的具体描述不准确的是(多选)()
A.一:
将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞
B.二:
右手拿锥形瓶,使瓶口缓缓通过火焰
C.三:
左手打开培养皿,将培养皿盖倒放在火焰旁的桌面上,右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿
D.皿:
等待平板冷却5~10min,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上
6.下列关于固定化酶技术的说法正确的是()
A.固定化酶和固定化细胞都可以催化一系列的酶促反应
B.固定后的酶既能与反应物接触,又能与反应物分离
C.加酶洗衣粉是添加了固定化酶的洗衣粉,其优点是可再次利用
D.固定化酶易溶于水,不会污染环境
7.(2010年山东济南模拟)在研究DNA的基因样本前,采集来的血样需用蛋白水解酶处理,然后用有机溶剂除去蛋白质,请问:
用蛋白水解酶处理血样的目的是什么?
()
A.除去血浆中的蛋白质
B.除去染色体上的蛋白质
C.除去血细胞表面的蛋白质
D.除去血细胞中的所有蛋白质,使DNA释放
8.(2010年北京模拟)人们利用某些微生物制作食品时,需要分析微生物的特点,控制微生物的发酵条件。
下列与此有关的各项内容都正确的是()
A
B
C
D
食品
果酒
果醋
腐乳
泡菜
主要
微生物
酵母菌
醋酸菌
毛霉
制作装置或操作步骤
9.(2010年江苏南通模拟)下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述,正确的有(多选)()
A.提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞
B.用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质
C.蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA
D.蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化
10.下列不属于橘皮精油提取中应注意的问题事项的是()
A.橘皮在石灰水中浸泡时间为10小时以上
B.橘皮要浸透,从而压榨时不会滑脱
C.压榨液的粘稠度要高,从而提高出油率
D.为了使橘皮油与水分离,可加入0.25%的小苏打和5%的硫酸钠,并调节pH
11.(2010年山东泰安模拟)生活中有许多微生物技术的应用,请分析回答:
(1)家庭酿酒时先将米煮熟,其目的是。
冷却到30℃后才能加酒药的原因是。
如果时常开坛盖取酒,不久酒就会变酸,其原因是。
(2)腐乳制备过程中,豆腐相当于微生物生长的,豆腐变为味道鲜美腐乳的原理是,写出制作腐乳的实验流程:
。
(3)在制作泡菜过程中,主要起作用的微生物是,欲检测泡菜中亚硝酸盐含量,使用对氨基苯磺酸溶液和溶液检测,泡菜溶液会出现玫瑰红色。
12.(2010年东北三校联考)现在大力提倡无纸化办公,但是仍然不可避免的每年要产生大量的废纸,其主要成分是木质纤维,人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。
右图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工作流程,请回答相关问题:
(1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在________________________
的环境中。
将从土壤中获得的微生物培养在以___________________
为碳源、并加入__________________________的培养基上筛选周围有
___________________的菌落。
(2)如上所述的筛选中获得了三个菌落,对它们分别培养,并完成环节②,
且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同,则你认为三种酶液的活性_____
(一定相同、不一定相同、一定不同),可以通过______________进行
定量测定。
(3)根据测定结果,①环节常选择木霉,则②中获得的酶是_____________
酶。
该酶至少包括________________________三个组分。
(4)生产中可以满足④环节的常见菌种是___________,为了确保获得产物乙醇,⑤环节要注意_________,④过程要注意避免________________________。
(5)该技术虽然有广阔的前景,但存在酶的成本高等问题,为了降低成本主要从以下几方面入用改进该过程。
首先要通过______________________________等技术手段对产酶微生物改造,提高酶的产量。
其次,可利用__________________等技术使酶能够重复利用。
13.苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋,再兑以苹果汁等原料而成的饮品。
既有淡淡的醋味,又有果汁的香甜,喝起来非常爽口。
苹果醋还能保健养生、改善疲劳、美容养颜,是目前大众非常喜爱的饮品。
下图是苹果醋的制作简图,据图回答:
鲜苹果汁
③
①
(1)在图中苹果汁的生产中,为了提高出汁率需要添加的酶是。
(2)过程①中使用到的微生物是,为了提高该微生物的利用率,最好用方法对其进行固定。
若要检测是否产生了苹果酒可用试剂进行检测。
(3)过程②和过程③中起作用的微生物都是,但过程②和过程③该微生物分解的碳源不同,过程②和过程③的碳源分别是___________、__________,产生醋时该微生物可以从食醋中分离纯化获得,具体方法是:
第一步:
配置培养基。
该培养基必须含有微生物生长所需要的基本营养成分。
第二步:
对培养基用方法进行灭菌。
第三步:
接种。
微生物常用的接种方法有:
、。
第四步:
培养。
温度控制在,培养时是否需要提供氧气?
一般应采用平板倒置培养,原因是。
第五步:
挑选符合要求的菌落。
14.(2010年山东烟台模拟)某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。
实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。
请回答与此实验相关的问题。
(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了____和______。
除此之外,培养基还必须含有的基本成分是和_____。
(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是________________。
(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于______中培养,培养的温度设定在37℃。
要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种______作为对照进行实验。
(4)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有_____种细菌。
一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越_______。
(5)如果提高培养基中NaCl的浓度,可以用于筛选耐_____细菌,这种培养基被称为____。
15.(2010年湖北武汉模拟)2007年,我国利用秸秆生产车用燃料乙醇的关键技术获得了重大突破,目前已顺利进入工业化实验阶段。
实验显示,每4吨秸秆(玉米、麦草秸秆等)可生产1吨燃料乙醇。
秸秆的主要成分是纤维素、半纤维素和木质素,通过自主创新,我国已经掌握了纤维素、半纤维素的水解技术以及能代谢五碳糖的基因工程菌,预计2008年可以进行工业化推广。
(1)利用玉米秸秆生产乙醇首先选用______________________酶进行水解,使之转化为发酵所需的葡萄糖等,然后进行发酵获得乙醇,反应式是__________________________。
但酵母菌缺乏相关酶系,所以无法直接利用秸秆,请提出解决该问题的方法(列举两种方法)_______________________________、________________________________________________。
(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种的原因是_________
为获取耐高糖和耐酸特性的酵母菌,可将野生酵母菌进行空间诱变,然后利用_________培养基筛选出突变菌。
(3)利用获得的突变菌和糖汁进行酒精发酵实验,除了将培养基灭菌、保持空间清洁外,发酵过程中防止外来杂菌入侵还有哪些可行的方法?
(列举两种)___________
(4)在酵母菌的纯化培养中,培养基上会出现一些分别由一个酵母菌繁殖而成的菌落,在生态学上,一个菌落的全部酵母菌称为一个________________。
为了能反复利用,需要将纯化后并经过繁殖培得到的酵母菌与海藻酸钠溶液混合制成“凝胶珠“,这一技术叫__________________________。
16.下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径,请据图回答有关问题:
(1)选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素,一般来说选用____________期的花粉可提高成功率。
选择花粉时,一般要通过____________来确定花粉是否处于合适的发育期,这时需要对花粉的细胞核进行染色,常用的染色剂是____________。
(2)上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中____________,不管哪种途径,最终获得的完整植株都称为__________________,必须对植株进行,才能使其结实产生后代。
(3)胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松无规则,是一种高度____________的薄壁细胞,胚状体与____________发育形成的胚有类似的结构,即具有胚芽、胚轴和胚根。
(4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素,请说明下列各项中需要灭菌的有___________(填编号),需要消毒的有___________(填编号)。
①培养基②培养皿③接种环④花蕾⑤实验操作者的双手⑥三角锥形瓶
(5)试管苗移栽到土壤前,通常要进行壮苗处理,应如何壮苗?
___________________________________。
17.某化工厂生产的一种加酶洗衣粉,其包装袋上印有如下说明(部分)。
某研究性学习小组为探究该洗衣粉中酶催化作用的最适温度,设计了如下装置进行实验,并将结果用下列曲线图A、B表示。
请回答以下各题:
(1)碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的。
由图A、B可知,使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为_____________。
(2)在实验过程中可通过直接测定________(指标)来表示该洗衣粉中酶的催化效率。
(3)目前使用的加酶洗衣粉都是一次性的,某洗涤公司为降低生产成本研制了一种能多次重复使用加酶洗衣粉的设备,他们将酶固定在不溶于水的尼龙载体上,洗涤完衣物后,经过简单处理,这些酶还可以多次重复利用,这种方法制成的酶叫__________。
(4)除加酶外,很多洗衣粉中还加有香精,高档洗衣粉中的香精都是由植物芳香油制成的,请列举两种目前从植物中提取芳香油的方法:
____________、____________。
(5)在“探究洗衣粉中酶催化作用的最适温度”的实验中,变量控制方法正确的是______。
A.若采用手洗法进行去污,必须尽可能保证各组洗涤用力程度、时间等基本相同
B.水的用量和布料的大小是成正比的,实验用的布料越大、水量越多实验效果越好
C.水温属于本研究的变量,实验过程中必须保证各组实验温度相
同且恒定
D.实验材料的污染程度属于本研究的无关变量,实验过程中不必
考虑
18.最近,我国科学家从人口腔下腭唾液腺分离出抗艾滋病病毒的某种活性蛋白,该活性蛋白通过和艾滋病病毒结合,使病毒再也无法与细胞受体结合并进入细胞复制,从而达到预防艾滋病病毒感染的目的。
研究还表明,该活性蛋白与血红蛋白具有相同的分离和提取方法。
请回答:
(1)利用蛋白质各种特性的差异,可以分离不同种类的蛋白质。
凝胶色谱法的原理利用了蛋白质的的特性。
运用凝胶色谱法分离血红蛋白质时,在填充凝胶柱的过程中不能有气泡存在,因为
待蛋白质接近色柱底端时,用试管连续收集流出液,先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是____________________________________________。
(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该活性蛋白是否具有抗菌特性。
抗菌性检验实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨分别主要为金黄色葡萄球菌生长提供和,除此之外,培养基还必须含有的基本成分是____________和____________。
(3)细菌培养常用的接种方法有和,但无论哪种接种方法,其主要目的都是防止杂菌污染,请指出培养皿和培养基的灭菌方法分别是_________________、____________________。
19.(2010年安徽模拟)回答下列有关生物技术的相关问题:
(1)PCR是一种DNA体外扩增技术。
1988年,PCR仪问世,并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。
右图是PCR技术示意图,
请回答下列问题:
①引物是此过程中必须加入的物质,从化学本质上说,引物是一小段。
②将双链DNA,使之变性,从而导致
③引物延伸需提供作为原料。
(2)红细胞含有大量血红蛋白,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动
物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,血红蛋白提取和分离
的程序可分为四步:
样品处理、粗分离纯化纯度鉴定。
请回答
下列有关问题:
①样品处理,它包括红细胞的洗涤、、收集血红蛋白溶液。
②收集的血红蛋白溶液在透析袋中经过透析,这就是样品的粗分离。
透析的目的是。
透析的原理是。
③通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳
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