瑞格列奈片的制备和质量标准研究Word格式.doc
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含量测定;
质量标准
Abstract:
ObjectiveTopreparerepaglinidetabletsandestablishthequalitystandard.MethodsOrthogonalarraytestingwasconductedtooptimizetheformulationwiththeindicesofdissolutionrate,appearanceandhardness.HPLCmethodwasestablishedtomeasurecontent,contentuniformityanddissolutionrate.ResultsTheoptimumformulationofrepaglinidetabletswasMCC∶PVPK30∶CCNa=74∶5∶20,andagoodlinearrelationshipwasobtainedintherangeof9.905~99.05μg·
mL-1,r=1.0000.Theaveragerecoverywas100.83%,withRSD0.98%(n=9).TheLODwas2.0ngandtheLOQwas8.0ng,contentuniformwas6.84,anddissolutionwas99.25%.ConclusionThereasonableformulationwasobtainedandpreparationwassimple,andthepreparedtabletsmettherequirements.
Keywords:
repaglinidetablets;
orthogonalarraytest;
HPLC;
contentdetermination;
qualitystandard
瑞格列奈(repaglinide,RG)是由德国诺和诺德公司于1998年在美国率先上市的治疗Ⅱ型糖尿病的一线口服降糖药[1],可在患者体内模拟生理性胰岛素分泌,有效控制餐后血糖,具有吸收快、起效快、作用时间短、不增加患者体重、安全性高的特点。
瑞格列奈具有广阔的市场前景,据文献报道其用药频度占据降糖药中的第二位[2],用药频率增速在常用口服降糖药中居首位[3]。
由于瑞格列奈的专利保护刚刚到期,市场长期被进口的瑞格列奈片主导,国内仅有一家药厂在我国受理瑞格列奈专利前抢先仿制。
目前国内还没有瑞格列奈剂型研究的文献报道。
瑞格列奈在水中几乎不溶,药物体外溶出度差,导致其生物利用度低[4]。
本文采用正交试验以溶出度为主要指标,筛选瑞格列奈片的最佳处方组成,同时由于瑞格列奈片的规格为0.5mg·
片-1,按照中国药典要求,以含量、含量均匀度、溶出度为指标,建立其质量标准。
1仪器与试药
1.1仪器
ZP19旋转式压片机(上海天和制药机械有限公司),ZRS8G智能溶出试验仪(天津大学无线电厂),岛津LC20A高效液相色谱仪(日本岛津有限公司),岛津UV2450紫外分光光度计(日本岛津有限公司),PHS3C实验室pH计(上海鹏顺科学仪器有限公司),十万分之一电子天平(德国赛多利BP211D电子天平)。
1.2试药
瑞格列奈对照品(中国药品生物制品检定所,批号:
100753200501);
瑞格列奈原料药(浙江海翔药业股份有限公司,批号:
30032071,含量100.4%);
孚来迪(江苏豪森医药药业股份有限公司,批号:
081107);
乳糖(德国美剂乐集团);
交联聚维酮(PVPP,东北制药总厂);
羧甲基淀粉钠(CMSNa,浙江菱湖联合化工厂);
交联羧甲基纤维素钠(CCNa,德国JRS公司);
羧甲基纤维素钠(CMCNa,广州市医药公司);
微晶纤维素(MCC,湖州展望药业有限公司);
聚维酮K30(PVPK30,东北制药总厂);
羟丙甲基纤维素60RT50(HPMC60RT50,山东瑞泰化工厂);
甲醇为色谱纯;
磷酸二氢铵、醋酸铵、磷酸、盐酸等均为分析纯;
水为超纯水。
2方法与结果
2.1片剂制备
将辅料(硬脂酸镁除外),分别过100目筛,混匀,再与原料药等量递增混匀,加入适量的水制软材,过24目筛制粒,60℃干燥3h,再加入质量分数0.5%的硬脂酸镁,混匀、整粒,采用直径为6.5mm的平冲压片,片重100mg。
每片含瑞格列奈0.5mg。
广东药学院学报第25卷第6期丁钢,等.瑞格列奈片的制备和质量标准研究2.2处方设计[5]
在预试验的基础上,选择填充剂(A)、黏合剂(B)、崩解剂(C)为考察因素,采用L9(34)正交表设计试验,以硬度(x1)、溶出度(x2)及外观(x3)为考察指标进行综合评分,评分标准:
5分(硬度2.9~3.2kg,溶出度﹥90%,外观比较光洁),4分(硬度2.6~2.9kg或3.2~3.5kg,溶出度75%~90%,外观光洁),3分(硬度2.3~2.6kg或3.5~3.8kg,溶出度60%~75%,外观平整),2分(硬度2.0~2.3kg或3.8~4.1kg,溶出度45%~60%,外观稍显粗糙),1分(硬度1.7~2.0kg或4.1~4.4kg,溶出度30%~45%,外观比较粗糙),0分(硬度<
1.7或>
4.4kg,溶出度<
30%,外观非常粗糙);
综合各因素权重得到综合分y=0.2x1+0.6x2+0.2x3。
正交试验的因素和水平见表1,试验结果和分析见表2、表3。
表1因素水平表表2正交试验方案及结果表3方差分析表由表2的极差分析结果可见,各因素的影响大小顺序为B>
A>
C;
由表3的方差分析结果可见,A、B、C3个因素对实验结果均无显著影响;
确定最佳处方组合为A2B2C3,即:
74mg的MCC,5mgPVPK30,20mg的CCNa。
验证试验:
按正交试验筛选出的最佳处方压制片剂,经溶出度试验,测得3个批号的瑞格列奈片的30min时的累积溶出率为(98.25±
1.78)%,确定该处方为瑞格列奈片的处方。
2.3含量测定方法学的建立
2.3.1溶液的制备
2.3.1.1对照品溶液精密称取瑞格列奈对照品20mg,置100mL容量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,得对照品储备液。
取对照品储备液2.5mL,置10mL容量瓶中,加入流动相稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。
2.3.1.2供试品溶液取瑞格列奈片20片,精密称定,研细,精密称取适量(相当于瑞格列奈2.5mg)置50mL容量瓶中,加流动相至刻度,超声15min溶解,0.45μm微孔滤膜过滤,弃去初滤液,取续滤液即得。
2.3.2色谱条件色谱柱:
DIKMAC18柱(150mm×
4.6mm,5μm);
流动相:
甲醇磷酸盐缓冲液(2.0g磷酸二氢铵溶于1000mL水中,加磷酸调节pH至2.5)(体积比70∶30);
流速:
1.0mL·
min-1;
检测波长:
243nm;
柱温:
40℃;
进样体积:
20μL。
瑞格列奈色谱峰的理论塔板数为36393,对照品及样品的色谱图见图1。
2.3.3标准曲线及线性范围精密吸取“2.3.1.1”项中的对照品储备液0.5、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0mL,分别置10mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积(A)为纵坐标,以质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归,得回归方程:
A=0.1828ρ+0.0544,r=1.0000,表明瑞格列奈质量浓度在9.905~99.05μg·
mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.3.4精密度试验取对照品溶液(50μg·
mL-1),连续进样6次,记录峰面积。
结果峰面积的RSD值为0.30%,表明仪器精密度良好。
2.3.5稳定性试验取“2.3.1.2”项的供试品溶液(50μg·
mL-1)分别于日内测定5次和连续5d测定,结果日内RSD值为0.28%,日间RSD值为0.51%,表明供试品溶液稳定。
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2.3.6回收率试验分别精密称取瑞格列奈原料药40.0、50.0、60.0mg及按处方配比量相当于瑞格列奈50mg相应的辅料,置100mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,超声15min溶解,精密移取上清液5mL至50mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,分别得质量浓度为40.0、50.0、60.0μg·
mL-1的供试品溶液,每个浓度分别平行做3份;
另取瑞格列奈对照品同法配制对照品溶液(50μg·
mL-1)。
按“2.3.2”项下色谱条件进样测定,按外标法以峰面积计算回收率,结果见表4。
表4瑞格列奈的回收率试验结果中国论文联盟www.LWLM.com编辑。
2.3.7最低检测限与定量限取空白基线一段,计算其噪音的平均峰高,再将瑞格列奈对照品溶液用流动相稀释至适当浓度,进样20μL,使其峰高为噪音的3倍,得最低检测限为2.00ng;
使其峰高为噪音的10倍,得定量限为8.00ng。
2.4样品含量测定
分别取3个不同批号的瑞格列奈各20片,按“2.3.1.2”项方法配制供试品溶液;
取“2.3.1.1”项的对照品溶液;
分别测定,按外标法以峰面积分别计算样品中的瑞格列奈的含量,结果测定3个批号样品含量分别为99.32%、101.05%和98.78%,符合规定。
2.5样品的含量均匀度测定
取瑞格列奈片10片,分别置10mL容量瓶中,加流动相至刻度,超声15min,使瑞格列奈溶解,0.45μm微孔滤膜过滤,弃去初滤液,取续滤液测定含量。
按外标法以峰面积分别计算样品中的瑞格列奈的含量,结果含量均匀度A+1.8S=6.84<
15,符合规定。
2.6溶出度测定
取瑞格列奈片6片,照溶出度测定法(中国药典2005年版二部附录ⅩC第三法),以0.1mol·
L-1盐酸溶液100mL为溶出介质,转速50r·
min-1,依法操作,30min时取样,滤过得供试品液;
取瑞格列奈对照品适量,加0.1mol·
L-1盐酸溶液配制对照品溶液(5μg·
mL-1);
按照“2.3.2”色谱条件测定,计算瑞格列奈片30min的溶出度。
同时,进行自制瑞格列奈片与上市产品(孚来迪)分别在2、5、8、11、15、30min时取样,测定含量,进行溶出曲线的对比,结果见图2。
自制瑞格列奈片与上市产品有相似的溶出曲线,并且自制瑞格列奈片对应时间点的累积溶出量高于上市品。
3讨论
3.1辅料筛选
瑞格列奈的溶解度低,生物利用度差,因此处方设计时主要考虑如何提高其溶出度。
本文中,交联羧甲基纤维素纳作为崩解剂可使药片瞬时崩解,从而提高溶出速度;
MCC具有较大的比表面积,吸附性好,遇水可迅速崩解形成均匀的黏性混悬液,增加溶出速率;
黏合剂PVPK30的水溶液,可使疏水性颗粒表面亲水性增加,加快崩解和溶出[6]。
从“2.6”项的溶出曲线(图2)可以看出,自制品10min时的累积溶出百分率已超过90%,证明正交试验筛选得到的处方是合理的。
3.2流动相的选择
我国新药转正标准[7]采用pH4.0醋酸铵缓冲液(取醋酸铵3.85g,加水1000mL使溶解,用冰醋酸调pH值至4.0)甲醇(体积比20∶80)为流动相,但在考察此流动相pH值变动的耐用性时,pH值变动0.2时的RSD值为3.46%,不符合规定。
姚静等[8]采用pH6.5的磷酸氢二钾缓冲液为流动相,经重复试验表明色谱峰有拖尾现象(拖尾因子1.46)。
本文参照美国药典[9],以pH2.5的磷酸二氢铵缓冲液(取磷酸二氢铵2.0g,加水1000mL使溶解,用磷酸调pH值至2.5)甲醇(体积比30∶70)为流动相,其耐用性相对国家新药转正标准有较大提高(流动相变动0.2个pH,耐用性RSD为0.99%,符合规定),且色谱峰对称(拖尾因子1.09)。
由上可见流动相缓冲盐的pH值对测定结果有较大影响。
原因可能是瑞格列奈为弱酸性化合物,其pKa1为4.16,pKa2为6.01[10]。
流动相的缓冲盐的pH值在pH2.5时,瑞格列奈以H2R+形式存在;
在pH4.0时,以H2R+和HR±
2种形式存在;
在pH值6.5时,以HR±
和R-2种形式存在[10]。
而以2种形式存在时,由于极性不同,保留时间不同,随着流动相的洗脱,2种存在形式在色谱柱中被分离,原来的解离平衡被打破,2种存在形式在各自谱带区里再建立新的解离平衡,导致峰拖尾[11],造成测定结果重现性差。
依据上述分析,本文采用pH2.5的缓冲盐为流动相要优于文献[7.8]中所用的pH4.0和pH6.5缓冲盐。
3.3含量测定溶剂选择
试验过程中曾采用国家新药转正标准所用的0.1mol·
L-1盐酸为溶剂溶解提取辅料中的药物,通过回收率试验发现0.1mol·
L-1盐酸难以将药物提取完全(回收率为91.3%),后改用本文色谱条件中的流动相为溶剂,回收率可达到100.83%(n=9),原因可能是因为流动相中含70%的甲醇,对溶解度小的瑞格列奈有比较好的溶解度的缘故。
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