最新版三氯乙烯药疹样皮炎细胞免疫学指标及发病机制研究硕士毕业设计Word文件下载.docx
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为验证上述假说,本研究采用成组设计的多个样本比较分析以及TCE药疹样皮炎患者入院治疗以及肝功能恢复正常时机体细胞免疫学指标的比较分析,进一步探讨机体细胞免疫学指标的变化与TCE药疹样皮炎的关系。
研究结果如下:
一、TCE药疹样皮炎细胞免疫学指标及发病机制研究
本研究选择三组研究对象,病例组为16例TCE药疹样皮炎患者。
接触对照组为32例来自与病例同车间的从事TCE作业的健康职业工人;
非接触对照组为28例从未接触过TCE及其他职业性有害因素的的健康就业前体检工人。
三组研究对象按年龄性别进行匹配后,结果如下:
1.淋巴细胞抗原特异性增殖功能
16例病人除皮疹外,还伴有不同程度的肝损害,谷丙转氨酶(ALT)水平升高者15例(93.33%);
谷草转氨酶(AST)升高者12例(73.33%)。
三组研究对象外周血淋巴细胞分别与不同浓度TCE(0.2mmolL、1mmolL、5mmolL)共培养,在各组内随着TCE染毒浓度的增加外周血淋巴细胞的存活率逐渐降低,差异有统计学意义(p<
0.05),相同染毒浓度下淋巴细胞的存活率组间差异无统计学意义(p>
0.05),提示TCE本身具有细胞毒性,而在TCE药疹样皮炎患者以及TCE接触对照体内并不存在针对TCE原形的特异性记忆性淋巴细胞。
2.外周血淋巴细胞亚群分析
研究对象血常规检测结果发现,16例病人中有6例(37.5%)病人外周血淋巴细胞(LYMP)高于临床正常参考值范围,1(6.25%)例低于临床正常参考值范围;
6例(37.5%)单核细胞(MONO)高于临床正常参考值范围;
14例(87.5%)中性粒细胞(NEUT)高于临床正常参考值范围;
8例(50%)嗜酸性粒细胞(EO)高于临床正常参考值范围,2例(12.5%)低于临床正常参考值范围,8例(50%)嗜碱性粒细胞(BASO)高于临床正常参考值范围。
在接触对照组和非接触对照组体内上述指标均在临床正常参考值范围内。
提示TCE药疹样皮炎患者体内免疫细胞的数量发生异常,由于外周血免疫细胞的改变与组织内免疫细胞的浸润密切相关,尤其是嗜酸性粒细胞主要分布于人体内呼吸道、消化道和泌尿生殖道粘膜组织中,其水平的升高可能与TCE药疹样皮炎病人出现的眼、口、生殖器等处的粘膜损伤有关。
结合血常规与流式细胞术检测的结果,比较各组之间淋巴细胞亚群在外周血中的变化情况。
结果发现病例组外周血淋巴细胞总数、T细胞、CD4+T细胞计数均明显高于接触对照组和非接触对照组(p<
0.05),在接触对照组和非接触对照组之间无统计学差异(p>
0.05),提示这三个指标可作为TCE药疹样皮炎的疾病标志;
CD8+T细胞和CD8+CD28-T细胞三组之间比较为病例组>
接触对照组>
非接触对照组,各组间差异有统计学意义(p<
0.05),CD3-CD56+细胞三组之间比较为病例组<
接触对照组<
非接触对照组,各组之间有统计学差异(p<
0.05)。
提示这三个指标可作为TCE接触工人的免疫学效应指标。
3.外周血FasFasL、PFGrB的测定
病例组外周血CD8+T细胞表面Fas阳性表达的百分比高于接触对照组和非接触对照组,差异有统计学意义(p<
0.05),在接触对照组和非接触对照组之间差异无统计学意义(p>
0.05);
病例组与接触对照组外周血CD4+T细胞表面FasL阳性表达的百分比均高于非接触对照组(p<
0.05),在病例组与接触对照组之间均无显著性差异(p>
CD8+T细胞表面FasL阳性表达的百分比呈现病例组>
非接触对照组,组间差异有统计学意义(p<
PF蛋白在外周血淋巴细胞中表达高于接触对照与非接触对照组(p<
0.05),而在接触对照组与非接触对照组之间无显著性差异(p>
GrB在病例组的表达高于非接触对照组(p<
0.05),在病例组和接触对照组之间差异无统计学意义(p>
提示在病例组工人体内活化的CTL通过FasFasL途径清除了一部分,但由于同时表达FasL的CD8+CTL随血液循环迁移至皮肤、肝脏、肾脏等组织器官,通过与这些组织细胞表面的FAS蛋白结合介导靶细胞的凋亡。
同时病例组体内通过活化的CTL高表达PF和GrB蛋白,介导皮肤角质细胞的死亡,引起TCE药疹样皮炎患者皮肤的损伤。
而健康的TCE接触对照工人体内也存在活化的细胞毒性T细胞(CD4+CTL与CD8+CTL),但并没有发病,其原因仍有待进一步研究。
病例组外周血FasmRNA表达高于接触对照组(1.2622倍)与非接触对照组(1.1383倍),接触对照组低于非接触对照组(0.9019倍);
病例组外周血FASLmRNA表达高于接触对照组(1.4239倍)与非接触对照组(1.7507倍),接触对照组低于非接触对照组(0.8133倍)。
病例组(0.8166倍)与接触对照组(0.6009倍)PFmRNA表达低于非接触对照组,而病例组高于接触对照组(1.3590倍)。
病例组GrBmRNA表达低于接触对照组(0.4477倍)与非接触对照组(0.4835倍),接触对照组高于非接触对照组(1.0800倍)。
此研究结果与FAS、FASL、PF、GrB蛋白的表达情况不完全一致,是由于mRNA的表达在转录和翻译水平均受到多种因素的调节。
二、8例TCE药疹样皮炎病例报告分析
对8例TCE药疹样皮炎的病人入院治疗时及肝功能恢复正常时(转归时)各指标进行比较分析,进一步探索TCE药疹样皮炎病人体内各免疫学指标的变化以及可用于评价临床治疗效果的指标,并结合前面病例与对照实验研究结果对TCE药疹样皮炎与各细胞免疫学指标的关系进行综合分析。
1.各群淋巴细胞检测分析
获得6例病人入院治疗时及转归时淋巴细胞检测结果资料。
与临床正常参考值相比较,6例(100%)病人入院时NEUT均升高,1例病人肝功能恢复正常时NEUT仍高于正常参考值范围;
入院时EO升高者有4例(66.67%);
BASO和LYMPH升高者分别有3例(50%);
MONO升高者有2例(33.33%),出院时仍有1例病人MONO升高。
对6例病人入院和转归时血常规结果进行比较,其中6例(100%)病人入院时NEUT与BASO均升高,5例(83.33%)病人LYMPH、MONO、EO均升高。
提示TCE药疹样皮炎患者在发病的初期机体正在进行着免疫反应,与第一部分研究结果相一致。
对6例病人入院和转归时淋巴细胞亚群分析结果进行比较,6例病人中有4例(66.67%)在入院时T淋巴细胞升高,B淋巴细胞有3例(50%)升高,4例(66.67%)NK细胞降低。
入院时4例(66.67%)CD4+T淋巴细胞明显增多,4例(66.67%)CD8+T淋巴细胞明显增多。
CD8+CD28+T有3例(50%)入院时降低,CD8+CD28-T有5例(83.33%)入院时升高。
6例病人中有4例在入院时CD4+CD8+比值降低,4例CD28+CD28-细胞的比值降低。
提示TCE药疹样皮炎患者在发病初期机体内各群免疫细胞的数量与比例发生变化。
2.外周血FasFasL、PFGrB的测定
与疾病转归时相比较,入院时6例病人中有4例(66.67%)Fas表达阳性CD4+T细胞百分比升高;
3例(50%)病人Fas阳性CD8+T细胞百分比升高。
6例病人中有3例(50%)FasL阳性CD4+T细胞升高;
3例(50%)病人FasL阳性CD8+T细胞升高。
而两例入院检测前未经激素治疗的病例外周血入院时Fas表达阳性CD4+T细胞百分比降低、Fas阳性CD8+T细胞百分比升高、FasL阳性CD8+T细胞升高,提示病例在发病的早期CD4+CTL未发挥负调节免疫应答的作用,未及时清除活化的T细胞。
CD8+CTL通过FasFasL途径介导了TCE药疹样皮炎患者的病例损伤。
3例(100%)病人在外周血中PF表达阳性淋巴细胞百分率均高于出院时。
1例(33.33%)病人外周血中GrB表达阳性细胞百分率高于出院时。
提示在TCE药疹样皮炎的发病早期,PF通过杀伤皮肤角质细胞介导TCE药疹样皮炎患者的皮肤损害。
此与第一部分研究结果相一致。
总之,本研究通过病例与对照实验研究以及病例入院和转归时细胞免疫学指标的比较分析,揭示TCE药疹样皮炎的发生可能是由其代谢产物而非TCE本身引起,TCE药疹样皮炎的发生与体内免疫细胞的活化增殖有关,TCE暴露能诱导人外周血淋巴细胞亚群的数量发生变化,其中总淋巴细胞、T细胞和CD4+T细胞计数升高可能作为TCE接触工人发生药疹样皮炎的的临床筛检指标,CD3-CD56+细胞计数降低、CD8+T细胞计数升高以及CD8+CD28-T计数升高可作为反映TCE接触的效应指标。
CD4+CTL细胞通过表达Fas介导活化的T细胞凋亡,维持机体的免疫自稳。
CD8+CTL通过表达FasL并随血液循环与皮肤、肝脏、肾脏等组织细胞表面Fas结合介导靶细胞凋亡,引起组织器官的免疫性损伤。
CTL通过PFGrB途径介导TCE药疹样皮炎患者的皮肤损害。
因此本研究为TCE接触工人的健康监护具有重要指导意义和参考价值,并对TCE药疹样皮炎病人采取针对性的免疫治疗措施提供理论依据。
关键词:
三氯乙烯,细胞免疫,药疹,接触性过敏性皮炎,半抗原,细胞毒性T细胞,淋巴细胞亚群,职业接触
StudyonIndexofCell-mediatedimmunityandPathogenesis
ofDermatitismedicamentosa-likeoftrichloroethylene
英文摘要
Abstract
Dermatitismedicamentosa-likeoftrichloroethylene(DMLT)inworkersappearstobeanoccupationalinChinainrecentyears.However,littleisknownaboutitspathogenesistodate,therearealsolackofspecificindexesfortypeⅣofTmemorylymphocytesandproliferationarethetwostepsofcell-mediatedimmunity.ActivatedTcellsregulatetheproliferationofNKandBcellsthroughsecreteaseriesofcytokines.CytotoxicTlymphocytes(CTL)playanimportantpartincell-mediatedimmunesystem.Itscytotoxicitycanbeinducedbytwoways:
a)granuledependentexocytosispathway,whichparticipateimmunedefenses.b)Fas-FasLintercellularlinkage-mediatedpathway,whichdown-regulateimmuneresponsethroughcleanactivatedperipheralCTLattheendoftheimmuneresponse.ThetwowaysplayanimportantroleinmaintainingtheimmuneoflymphocytesandthefunctionofCTL.Thosetwoapproachesplayanimportantroleincleaningforeignantigenstomaintainimmunenormalcondition,specificimmunelymphocyteswhichstimulatedbyantigenproliferateinperipheralimmuneorgans.Intheendoftheimmuneresponse,theactivatedcellsapoptosisthroughFasFasLpathway,thustocontroltheimmuneprocessandmaintainimmunetime,andstrongimmuneresponsebreakout.
Inordertotesttheaboveanalysisandcasesanalysistoexploretherelationshipbetweenabnormalindexofcell-mediatedimmunityandDMLT.Theresultswereasfollows:
1.StudyonIndexofCell-mediatedimmunityandPathogenesisofDMLT
Therearetheregroupsinthisstudy:
casegroup,casesare16patientsofDMLT,allexaminationsexecutedonadmission;
TCE-exposuregroup,30workerscameformtheworkshopsthecasesoccurredbutnoskindisordersexaminedbytheoccupationalphysiciansafterthefirst3monthsofTCEexposure.Healthyworkergroup,28workerswereneverexposedtoTCEandnodisease.Themainresultsareasfollows:
Ⅰ.Testforfunctionsofantigen-specificlymphocyteproliferation
16patientswithsevererash,accompaniedbydifferentdegreeofliverdamage,15cases(93.33%)in16with16withanygroup,peripheralbloodlymphocytesurvivalratesgraduallyreducedwiththeincreaseofTCEconcentration.Nosignificantdifferencewasfoundaboutsurvivalratesoflymphocytesunderthesameconcentrationsinthreegroups.TheresultsuggestthatTCEperformedgreatcelltoxicityonperipheralbloodlymphocytes,andtherewasnoTCE-specificmemorylymphocyte.
Ⅱ.Analysisoflymphocytesubsetsinperipheralblood
Fromtheroutinebloodtestof16patients,6cases(37.5%)peripheralbloodlymphocyte(LYMP)thenormalclinicalrange,1(6.25%)belowthenormalclinicalrange;
6cases(37.5%)mononuclearcells(MONO)normalreferencerangeofclinical;
14cases(87.6%)neutrophilsNEUT)normalclinicalrange;
8cases(50%)eosinophils(EO)normalclinicalrange,2cases(12.5%)belowthenormalclinicalrange;
8cases(50%)basophilicgranulocyte(BASO)thenormalrangeofclinicalrange.Inbothclinicalnormalreferenceranges.ThoseindicateimmuneresponseongoinginpatientsofDMLT.Thechangeofperipheralimmunecellsarecloselyrelatedtotheorganizationofimmunecellinfiltrates,eosinophilsmainlydistributedintherespiratorytract,enteronandgenitourinarytractmucosatissue,theincreaseofEOinperipheralbloodmightrelatetothedamageofmucousmembraneineye,mouthandgenitalofpatients.
Theabsolutecountsoflymphocyte,Tcell,CD4+Tcellweresignificantlyincreasedinpatientswithcountsoflymphocyte,Tcell,CD4+Tcellweredemonstratedbetweenexposedandunexposedgroups(P>
0.05),sothosethreeindexescouldbediseasemarkersofDMLT.CD8+Tcell,CD8+CD28-Tcellcountsamongthethreegroupsshowedcasegroup>
exposedgroup>
unexposedcontrolgroup,andthedifferencewassignificant(P<
0.05).NKcellcountsamongthe3groupsshowedthecasegroup<
exposedgroup<
0.05),sothosethreeindexescouldbeimmunologyeffectmakersforTCEexposure.
Ⅲ.ExaminationofFasFasL、PFGrBexpressionofproteinandmRNAinperipheralblood
ThepercentageofCD8+CD95+TcellinCD8+Tcellincaseisexposedgroupandunexposedgroup(P<
0.05),nosignificantdifferencebetweenexposedgroupandunexposedgroup(P>
0.05).ThepercentageofCD4+CD178+TcellinCD4+Tcellincaseandexposedgroupareunexposedgroup(P>
0.05),nosignificantdifferencebetweencasegroupandunexposedgroup(P>
0.05).ThepercentageofCD8+CD178+TcellinCD8+Tcellamongthethreegroupsshowedcasegroup>
unexposedcontrolgroup,andthedifferencewassignificant(P<
0.05).Incasegroup,PFproteininperipherallymphocyteisexposedgroupandunexposedgroup(P<
0.05).ItindicateCTL(CD4+CTLandCD8+CTL)induceapoptosisofeffectorcellsincases,someCTLsareremovedthroughFasFasLpathway,othersmigratetoskin,liver,kidney,etc,andmediatedthetargetcellapoptosis.Meanwhile,theofPFandGrBcauseskindamageincases.
IncasegrouptheexpressionofFASmRNAisexposed(1.2622fold)andunexposedgroup(1.1383fold),exposedgroupislowerthanunexposedgroup(0.9019fold);
IncasegrouptheexpressionofFasLmRN
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