第5章第六节精液保存PPT资料.ppt
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在一定范围内是可逆抑制,通常把pH调整到6.35左右。
2.稀释液配方(见课本128页),
(二)精液低温保存(保存温度0-5),1.保存原理,精子在体温状态下,能够进行正常的代谢活动,随着温度的降低,精子的代谢活动减弱,当温度降至10以下时,精于的代谢活动受到抑制。
营养物质消耗减少,代谢产物积累减缓,精子存活时间延长。
但当温度回升,精子的代谢活动又逐渐恢复,并且不丧失受精能力,因此在低温下能延长精子的存活时间,故可达到保存目的。
2.保存方法,精液进行低温保存时,应采取逐步降温的方法,并使用含卵黄的稀释液,以防冷休克。
把包装好的精液放到05的低温环境中,经12h,精液即降至05。
在保存过程中,要维持温度的恒定,防止升温。
3.低温保存稀释液,见课本126页配方表。
(三)精液冷冻保存,精液冷冻保存是利用液氮(-196)或干冰(-79)作冷源;
将精液经特殊处理后保存在超低温下,以达到长期保存的目的。
精液冷冻保存是人工授精工作的一大进步,由于保存时间的延长,使精液的使用不受地区的限制,从而加快了家畜品种的育成和改良速度。
1.精液冷冻保存的原理,精子在超低温下,其代谢活动几乎停止(完全被抑制),使其在静止状态下保存下来,一旦升温又能复苏而不失去受精能力。
其理论依据是玻璃化假说和甘油保护学说。
(1)玻璃化假说,物质的存在形式有气态、液态和固态,其中固态又分为结晶态和玻璃态。
在不同的温度条件下,这两种形式可以相互转化。
A.结晶态,当精液的温度由冰点(0)缓慢降到-60左右时,精液中的水分由液态变成固态,冰晶颗粒大而均匀,叫做结晶态或冰晶化。
对细胞内的细胞器构成巨大的破坏作用,因而,把这一温度区称为有害温区。
缓慢降温形成冰晶化是造成精子死亡的主要原因。
B.玻璃态,但在特定冷冻剂参与下,精液由低温骤然降到-60度以下,精液变成固态时,冰晶颗粒细小而均匀,叫做玻璃态(化)。
不会对细胞器造成破坏,从而达到长期保存的目的。
经试验证明,在060是冰晶形成的温度区域,叫做危险温度区。
而且在逐渐降温的条件下才能形成。
降温越慢,冰晶形成越大,尤以-1525为甚。
玻璃化必须在-60-250的低温区域内,经快速降温,迅速越过冰晶化而形成。
(2)甘油保护学说,快速降温可使精液跨越结晶态进入玻璃态,但急剧降温会造成精子冷休克。
研究表明,向稀释液中添加甘油,不但可增强精子的抗冻能力,而且又可防止冰晶化和精子冷休克。
甘油又名丙三醇,分子式CH2(OH)CH2(OH)CH2(OH),为高热能脂肪家族,其3个羟基(OH)为亲水基团,可与精液中的水结合,限制和干扰水分子的晶格排列,而产生冰晶;
其烃链为疏水基团,朝向精子,可阻止精子的内外水分相互渗透,从而使精子保护在玻璃化膜中。
但是,甘油浓度高时,对精子有危害作用,应掌握甘油的用量。
一般牛冷冻精液中甘油通常加入57。
除甘油外,其他多羟化合物如二甲基亚砜(DMSO)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、糖类等都具有抗冻作用。
2.精液冷冻保存稀释液配方(见课本),3.冷冻精液制作方法,牛的精液冷冻已普及,现以牛精液冷冻为例,将精液冷冻制作技术叙述如下:
(1)采精及精液品质捡查精采精后,立即进行精液品质检查,制作冷冻精液的精子活率应达到0.7以上。
(2)精液稀释根据冻精的种类、分装剂型和稀释倍数的不同,选择合适的稀释液,按照精液的稀释方法进行稀释。
稀释后取样在38-40摄氏度下镜检活率不低于原精液。
现生产中多采用一次或两次稀释法。
3.降温平衡,采用一次稀释法,由于稀释温度为30,需经12h缓慢降温至0-5,以防冷休克的发生。
平衡是降温后,把稀释后的精液放置在0-5的环境中停留2-4h,使甘油充分渗入精于内部,起到膜内保护剂作用的过程。
4.精液的分装现行冻精常采用颗粒、细管和袋装等分装方法。
精液的分装,
(1)颗粒冻精将精液滴冻在经液氮致冷的金属网或塑料板上,冷冻后制成01m1左右的颗粒。
颗粒冻精曾在牛中广泛应用,现多用于马、绵羊及野生动物的冻精剂型,具有成本低、制作方便等优点,但不易标记,解冻麻烦,易受污染。
(2)细管冻精把平衡后的精液分装到塑料细管中,细管的一端塞有细线或棉花,其间放置少量聚乙烯醇粉(吸水后形成活塞),另一端封口,冷冻后保存。
细管的长度约13cm,容量有0.25、0.5或1.Oml。
现生产中牛的冻精多用0.25m1剂型。
细管冻精具有不受污染、容易标记、易贮存、适于机械化生产等特点,是最理想的剂型。
(3)袋装冻精马和猪输精量大,可用塑料袋分装,但目前冷冻效果不理想。
5.冻结,
(1)干冰埋植法适合于小规模生产及液氮缺乏地区。
颗粒冷冻把干冰置于木盒中,铺平压实,用预先做好的模板在干冰上压出直径0.5cm、深23cm的小孔,用滴管将平衡后的精液0.1ml左右滴人孔内,覆以干冰,24min后,收集冻精保存。
细管冻精冷冻将分装的冻精平铺于压实的干冰上,并迅速用于冰覆盖,24min取出贮存于干冰或液氮中。
(2)液氮法颗粒冻精在广口液氮桶上安装铜纱网,调至距液氮面13cm,预冷几分钟后,使纱网附近温度达-80-100,将精液均匀地滴压在铜纱网上,24min后,待精液颗粒充分冻结、颜色变浅发亮时,用小铲轻轻铲下颗粒冻精,每50100粒装入纱布袋中,沉入液氮保存。
细管冻精除按上述方法对细管进行熏蒸冷冻外,也可采用液氮浸泡法。
把分装好的精液细管平铺于特制的细管架上,放人盛装液氮液氮柜中浸泡,盖好,5min后取出保存。
这种方法启动温度低,冷冻效果好。
(三)冻精的贮存目前,冻精保存普遍采用液氮做冷源,以液氮罐为容器贮存和分发冻精。
1.液氮及其特性液氮是空气中的氮气经分离、压缩形成的一种无色、无味、无毒的液体,沸点温度为-195.8。
在常温下,液氮沸腾,吸收空气中的水气形成白色烟雾。
液氮具有很强的挥发性,当温度升至18时,其体积可膨胀680倍。
此外,液氮又是不活泼的液体,渗透性差,无杀菌能力。
基于液氮的上述特性,使用时要注意防止冻伤、喷溅、窒息等,用氮量大时要保持空气通畅,注意保护。
2.液氮容器包括液氮贮运容器和冻精贮存容器,前者为贮藏和运输液氮用,后者为专门保存冻精用。
当前冷冻精液专门使用的液氮罐型号较多,但其结构基本相同。
(1)罐壁由内外两层构成,一般由坚硬的合金制成。
(2)夹层指内外壳之间的空隙。
为增加罐的保温性,抽成真空。
真空度为1.33X10-4pa,在夹层中装有活性碳、硅胶及镀铝绦纶薄膜等,以吸收漏入夹层的空气,也增加了罐的绝热性。
(3)罐颈由高热阻材料制成,是连接罐体和罐壁的部分,较为坚固。
(4)罐塞由绝热性好的塑料制成,具有固定提筒手柄和防止掖氮过厦挥发的功能。
(5)提筒存放冻精的装置。
提筒的手柄由绝热性良好的塑料制成,既能防止温度向液氮传导,又能避免取冻精时冻伤。
提筒的底部有多个小孔,以便液氮渗入其中。
3.液氮容器使用应注意的问题,液氮容器主要是靠真空和减少导热来维持其冷藏性能。
使用时应注意:
(1)用前仔细检查外观,看是否又碰伤;
然后倒入液氮检查其损耗情况。
(2)存放于阴凉、干燥、通风良好的室内,严禁靠近热源和室外日晒雨淋。
(3)使用过程中尽量避免碰撞、振动,严禁横放、叠放或倒置。
(4)存放液氮的容器要用瓶塞盖好,但瓶口不能密闭,以防爆炸。
(5)存放精液等要定期补充液氮,确保冻精浸入液氮中。
(6)取放冻精时,要尽量避免碰撞颈口。
(7)液氮罐要定期清洗,以免污染冻精。
1.精液保存的意义。
2.精液保存的方法及保存温度。
3.精液冷冻保存的原理。
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