基因工程复习.doc
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基因工程复习.doc
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1、用酚—氯仿抽提DNA时,通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇,这是因为异戊醇可以防止气泡;分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是抑制了DNase。
2、按照质粒拷贝数的多少,质粒可以分为严谨型质粒。
和松弛型质粒。
3、λ噬菌体在感染大肠杆菌以后,可以进入Lyticgrowth也可以进入Lysogenicstate。
如果其基因组DNA通过专一性重组整合到宿主染色体中,则其进入融源状态。
;它也可以选择进入融菌状态,大量复制并组装子代噬菌体颗粒。
4、ddNTP与普通的dNTP的不同之处在于ddNTP2’和3’双脱氧,它们可以在DNA聚合酶的作用下,通过其5’掺入到正在增长的DNA链中,导致链延伸反应终止。
5、KlenowDNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅰ经蛋白酶裂解而从全酶中除去5’—3’外切酶活性的多肽大片断,而其他活性保持不变。
1、酚是蛋白变性剂,用酚抽提细胞DNA时,具有两方面的作用,分别为变性剂和抑制了DNase。
2、Plasmid能进行自我复制,大多数为双链闭合环状DNA分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的,一种叫内切酶,另一种叫修饰酶。
4、反转录酶来自AMV或Mu-MLV,即依赖于RNA的DNA聚合酶,它有聚合酶活性,但无外切酶活性。
5、末端转移酶来源于小牛胸腺,是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶,在二价阳离子存在下,末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3'羟基端。
得分
三、选择题(每小题1.5分,共15分)
1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于(C)。
A、既可以作用于双链DNA,又可以作用于单链DNA;B、只能作用于单链DNA;
C、只能作用于双链DNA;D、只能作用于RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物(B)。
A、末端转移酶;B、反转录酶;C、DNA连接酶;D、限制酶。
3、DNA被某种酶切割后,电泳得到的电泳带有些扩散,下列原因中,哪一项不太可能(D)。
A、蛋白质(如BSA)同DNA结合;B、有外切核酸酶污染;
C、酶失活;D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是PCR反应所必须的是(D)。
A、模板和引物;B、dNTP;C、Taq酶和buffer;D、甘油。
5、关于PCR技术的叙述,下列哪项是错误的?
(B)
A、以DNA复制为基础而建立起来的技术;
B、利用PCR技术可完全无误地扩增基因;
C、反应体系需模板、一对引物、4种dNTP、耐热DNA聚合酶和缓冲溶液;
D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是(C)。
A、必须具备很强的启动子;B、必须具备很强的终止子;
C、启动子需要受控制;D、所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是(D)。
A、RNA探针;B、基因组探针;C、cDNA探针;D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确(B)。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点;B、在不同的宿主中具有不同的复制机制;
C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶;D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离DNA时常用蔗糖的作用是(C)。
A、抑制核酸酶的活性;B、加速蛋白质的变性;
C、保护DNA,防止断裂;D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为(D)。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成;B、可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成;
C、可以抑制核糖体的转位;D、可以与核糖50S亚基结合并抑制蛋白质合成。
得分
三、选择题(每小题1.5分,共15分)
1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别(C)。
A、特定的三联密码;B、双链DNA的特定碱基对;
C、双链DNA的特定碱基序列;D、单链DNA的特定碱基序列。
2、在切口平移方法标记DNA探针时只能使用(B)。
A、Klenow酶;B、DNA聚合酶Ⅰ;C、DNA聚合酶Ⅱ;D、DNA聚合酶Ⅲ。
3、在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制哪一项最好(C)。
A、反应体积;B、酶反应温度;C、反应时间;D、酶量。
4、PCR扩增有时会出现弥散的条带,以下原因阐述不正确的是(B)。
A、退火温度过低;B、退火温度过高;
C、dNTP浓度过高;D、循环次数过多。
5、以下不属于PCR的应用的为(D)。
A、随机扩增多态性DNA(RAPD);B、扩增片段长度多态性(AFLP);
C、RACE;D、S1酶作图。
6、pUC18与pUC19的区别在于(B)。
A、二者的选择标记不同;B、二者的多克隆位点方向相反;
C、pUC18无lacZ基因;D、pUC19无lacZ基因。
7、有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是(D)。
A、用荧光代替了同位素标记;B、激光扫描分析代替人工读序基;
C、本原理与手工测序相同;D、不再需要引物。
8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征(D)。
A、可以独立复制;B、有选择标记;
C、有多克隆位点;D、含lacZ。
9、在分离DNA过程造成DNA分子断裂的因素很多,下列说法中哪一项是不正确的(C)。
A、核酸酶的降解;B、化学降解;C、保存液中未加一滴氯仿;D、物理剪切。
10、氨苄青霉素的工作原理为(A)。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成;B、可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成;
C、可以抑制核糖体的转位;D、可以与核糖50S亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、酚是蛋白变性剂,用酚抽提细胞DNA时,具有两方面的作用,分别为变性剂和抑制了DNase。
2、Plasmid能进行自我复制,大多数为双链闭合环状DNA分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的,一种叫内切酶,另一种叫修饰酶。
4、反转录酶来自AMV或Mu-MLV,即依赖于RNA的DNA聚合酶,它有聚合酶活性,但无外切酶活性。
5、末端转移酶来源于小牛胸腺,是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶,在二价阳离子存在下,末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3'羟基端。
得分
三、选择题(每小题1.5分,共15分)
1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于(C)。
A、既可以作用于双链DNA,又可以作用于单链DNA;B、只能作用于单链DNA;
C、只能作用于双链DNA;D、只能作用于RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物(B)。
A、末端转移酶;B、反转录酶;C、DNA连接酶;D、限制酶。
3、DNA被某种酶切割后,电泳得到的电泳带有些扩散,下列原因中,哪一项不太可能(D)。
A、蛋白质(如BSA)同DNA结合;B、有外切核酸酶污染;
C、酶失活;D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是PCR反应所必须的是(D)。
A、模板和引物;B、dNTP;C、Taq酶和buffer;D、甘油。
5、关于PCR技术的叙述,下列哪项是错误的?
(B)
A、以DNA复制为基础而建立起来的技术;
B、利用PCR技术可完全无误地扩增基因;
C、反应体系需模板、一对引物、4种dNTP、耐热DNA聚合酶和缓冲溶液;
D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是(C)。
A、必须具备很强的启动子;B、必须具备很强的终止子;
C、启动子需要受控制;D、所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是(D)。
A、RNA探针;B、基因组探针;C、cDNA探针;D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确(B)。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点;B、在不同的宿主中具有不同的复制机制;
C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶;D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离DNA时常用蔗糖的作用是(C)。
A、抑制核酸酶的活性;B、加速蛋白质的变性;
C、保护DNA,防止断裂;D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为(D)。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成;B、可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成;
C、可以抑制核糖体的转位;D、可以与核糖50S亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、星活性:
高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等,会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性,即Staractivity现象。
2、插入型载体:
只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点。
3、反转录PCR:
在逆转录酶的作用下、以mRNA为模板合成互补的cDNA,再以cDNA为模板进行PCR反应。
4、感受态:
受体细胞经过一些特殊方法(如:
CaCl2,RuCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
5、考斯质粒:
考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNAcos序列和质粒复制子的特殊类型的载体
6、Klenow片段:
用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶I可以切掉N端的5’®3’外切酶活性部分,就成为Klenowfragment。
7、置换型载体:
两个多克隆位点区以反向重复形式分别位于lDNA的非必须区两端,用酶切后,可以将中间的区段切下来,与用同样酶切成的外源DNA片断置换。
8、引物:
人工合成的单链DNA小片断,碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5‘端相同。
9、转化:
大肠杆菌捕获质粒DNA的过程。
10、噬菌粒:
噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。
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