细胞个数实验报告doc.docx

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细胞个数实验报告doc

细胞个数实验报告

篇一：

细胞计数实验报告

　　细胞计数实验报告

　　一、目的

　　培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数

　　二、原理

　　细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。

显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

因为计数板是一块特别的载玻片。

其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。

每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。

计数时，通常只用4个四周大方格内的细胞数即可。

然后求出每个大方格的平均值，即得出一个大方格中的平均细胞数，再换算成lml菌液中的总细胞数。

若设大方格中平均细胞数为N，菌液稀释倍数为M，则计算方法为：

　　lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数=10000xMxN=10000MN（个）

　　三、实验材料

　　普通显微镜、血球计数板、试管、吸管，微量移液管、细胞悬浮液

　　四、实验步骤

　　1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

　　2、将细胞悬液吸出少许，注射在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

　　3、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按下式计算：

　　细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×10000

　　注意：

镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液

　　五、实验结果

　　六、讨论与反思

　　注意多计数几次，求平均值

　　细胞要比较均匀的分布，四个大方格上的细胞数不应相差太多，否则重新混匀细胞悬浮液，再次计数

篇二：

细胞生物学实验报告

　　染色体标本的制备及观察

　　泮力菁XX00140091XX级生物基地同组者：

商倩倩

　　【实验目的】

　　1、掌握染色体标本制作的方法；

　　2、认识不同生物染色体的特征，学会制作染色体组形图；

　　【实验原理】

　　1、制作染色体标本的意义：

A、生物学方面：

根据染色体特征鉴别生物及种类（例如猫38；小鼠40；大鼠42；兔44；人46；马64；鸡和狗78）；B、临床医学方面：

主要用于遗传性疾病的诊断及研究（例如21三体综合症，卵巢退化症；睾丸退化症等）。

因此，染色体阻性实验广泛应用与胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型）。

　　2、染色体标本的制作原理：

A、制作染色体标本的先决条件：

细胞具有旺盛的分裂能力（选择活跃的组织：

胸腺，骨髓，睾丸，小肠；施加药物使细胞分裂）；设法得到大量的分裂中期细胞（秋水仙素）。

B、重要点：

PHA：

促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞；秋水仙素：

破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期；低渗作用：

水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，抑郁cs分散开；空气干燥：

使细胞和cs展开；固定：

用carnoy’ssolution（甲醇：

冰醋酸=3:

1）作用是蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增加，形成屏障作用，防止了细胞内物质的外溢和丢失。

　　3、本实验选择的实验材料是小鼠的睾丸。

睾丸是雄性动物生殖细胞发育和成熟的部位，是产生精子的器官。

睾丸内的曲细精管从外到内依次分布有精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞以及形态渐变中的精子。

取睾丸将曲细精管中的细胞冲出后固定，然后制片染色，可以观察到动物生殖细胞减数分裂染色体的不同时相。

如果提前给动物的腹腔注射秋水仙素溶液可抑制生殖细胞的正常分裂，增加了中期分裂细胞的数目，此方法可用来进行减数分裂过程中染色体的计数与观察。

　　睾丸染色体标本的制备，可以用来检测雄性个体生殖细胞是否受到周围环境污染或是否发生病变，是小型动物生殖学常规实验。

　　4、染色体标本的制作：

　　①观察：

由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。

　　②细胞：

为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:

胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。

我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。

在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。

　　③药物：

PHA（植物细胞凝集素）：

PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。

PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）；秋水仙素：

秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。

与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。

可以促进胃管组装的药物

　　有紫杉酚、重水等。

　　④空气干燥：

使细胞与染色体易于分离

　　⑤低渗作用：

水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。

　　⑥固定：

Camoy’ssolution,使组蛋白变性（变硬），维持染色体原有形态

　　5、描述染色体的四个参数

　　①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100相对长度可以用来表示每条染色体的长度

　　②臂指数=（长臂的长度）/（短臂的长度）臂指数可以用来确定臂的长度；为了更准确的区别亚中部和亚端部着丝粒染色体1964年Levan提出划分标准：

臂指数在1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体（M）；1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体（SM）；3.0-7.0之间，为亚端部着丝粒染色体（ST）；7.0以上，为端部着丝粒染色体（T）。

　　③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100；着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置；按Levan的划分标准，着丝粒指数在50.0-37.5之间，为M；37.5-25.0之间，为SM；25.0-12.5之间，为ST；12.5-0.0之间，为T。

　　④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定端着丝粒染色体（T），NF=1中部，亚中部，亚端部着丝粒染色体（M,SM,ST）,NF=2

　　【实验器材】

　　1、实验材料：

　　A、雄性小鼠（6-8周龄，20-30g）；

　　B、0.02%秋水仙素（4℃保存）；生理盐水；0.3%氯化钾溶液；甲醇·冰醋酸固定液（3：

1）；Giemsa染液；

　　2、实验仪器：

　　小烧杯；剪刀；铜网；离心管；离心机；吸管；低温预冷载玻片；滤纸；普通光学显微镜；恒温培养箱（恒温水浴锅）；镊子；注射器；玻璃片；

　　【实验步骤】

　　1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。

　　2、放入装有1ml0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。

　　3、用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。

　　4、37℃静置30分钟，进行低渗处理。

　　5、以800～1000转/分离心8分钟。

　　6、弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：

1），并用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。

　　7、再以800～1000转/分离心8分钟。

　　8、弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。

　　9、取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。

　　10、用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。

　　11、用Giemsa染色20～30分钟，细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。

镜检：

低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。

　　【注】：

倒置染色法——在玻璃板上用废旧的载玻片做支架，使标本载玻片的标本面向下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，其目的是节省染料，避免染液快速挥发，放置染色颗粒沉淀，影响观察。

在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙；地然也是应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。

　　【实验结果】

　　1、实验图片

　　图1：

小鼠精细胞（10*40）图2：

中期染色体（10*40）

　　【分析】由图中可以看出，小鼠睾丸内的精细胞较中期染色体大，而且一端较尖，并没有染色体的形态；图2中的染色体约为64条，大于小鼠一个细胞中的染色体数（40条）。

　　图3：

中期染色体（放大）图4中期染色体（放大）

　　【分析】图3中的染色体分离较好，但是背景较杂；图4中背景干净清晰，但是染色体形态分析并没有完全进入中期，因为相互之间还有些许连接；图4中染色体个数约为10，少于40个。

　　图5小鼠精细胞（方框）及中期染色体（圈）图6：

中期染色体（圈）及其他细胞（10*40）

　　【分析】这两幅图的中期染色体都较为清晰，图5为14条，图6为20条；图6颜色较紫；

　　2、实验结果分析

　　A、由图6的标注可以看出，精细胞是一端较为尖细的细胞，较尖的一端将来会长出精子尾结构；中期染色体彼此并不连接，而在视野中还有处于其他状态下的细胞；如果有完整的细胞，详细辨认可能看到的细胞种类有：

精原细胞——是精子发生的干细胞。

胞体圆形，核居中央，染色质呈疏松网状结构；初级精母细胞——进行第一次减数分裂的细胞，由精原细胞分裂产生，胞体较大，浅染，偶见染色质丝；次级精母细胞——由初级精母细胞分裂而来，胞体较初级精母细胞小，染色质呈细网状，着色较浅；精细胞——体积较次级精母细胞更小，着色深，多呈球形或精子头的雏形；精子——形态不同于精细胞，主体梭形，带一小段尾巴。

　　B、图2及图3中的染色体个数为64条，大于小鼠体细胞中的染色体个数；图4为10条，图5为14条，图6为20条；

　　C、根据染色体条数，可以基本判断，图2及图3处于有丝分裂的中期，或者是减数第一次分裂的中期；图6可能是处于减数第二次分裂的中期；

　　D、以上确定的依据是：

小鼠正常的体细胞的染色体数为40条，若超过40条，分析造成这种结果的原因为几个细胞的染色体聚集到一起；在减数第二次分裂中期，由于减数第一次分裂使得染色体的数目减半成为20条，因此若没有染色体的丢失，图6所示的染色体为减数第二次分裂中期的染色体；而由于实验操作中，低渗处理，离心以及制片时滴细胞悬液的高度问题，一组染色体或许会被摔碎，变得不完整，出现图4，图5的情况；或许几个细胞的染色体混在一起，出现图2图3的情况；

　　E、由于制片时细胞悬液吹打不均匀，细胞悬液滴下的高度不够，在桌边震荡不够等等的操作原因，都可能够造成细胞的分散不够彻底，大团的细胞集中在一起，难以观察的现象，就像图4所示，在一定程度上影响观察；

　　F、若实验过程中低渗的时间过长，细胞将会破裂严重，在离心之前，细胞就已经破裂，更难以观察中期的染色体，估计图2中背景模糊混乱，与低渗过度，细胞不正常破裂有关；

　　【实验反思与总结】

　　1、实验注意事项

　　①注射秋水仙素：

应选择腹腔注射，如果观察到小鼠被注射后皮肤隆起，则表明注射到皮下，应重新注射；如果在拔出针时观察到有血珠溢出，则是因为注射时损伤了部分器官或血管，秋水仙素会随血液传递到全身，其传递速度会加快，其死亡时间可能小于15-16h，应随时观察小鼠，以防其突然死亡。

即使注射到小鼠的腹腔中，也很有可能注射到起脂肪组织中，使小鼠的死亡时间变慢。

因此应根据具体实验，适当调整注射时间和等待时间。

秋水仙素的注射浓度过高或者处理时间过长会造成染色体的过度凝集，不利于形态的观察；

　　②处死小鼠：

最好选择在小鼠将要死亡时处死小鼠，因为此时，秋水仙素的作用发挥到最大，分裂期中期的细胞最多；如果等小鼠死亡后处死小鼠，小鼠尸体可能已僵硬，难以取到精巢。

　　③剪碎组织：

得到睾丸时，要尽量剥干净被膜和结缔组织，可以取少于1mL0.3%KCl溶液，没过杯底即可，如果液体太多则很难剪到组织，比较浪费时间。

　　④铜网过滤：

应把组织尽量剪碎后再用铜网过滤；如果烧杯中仍有较大颗粒，则小心不要把那些颗粒倒出，在烧杯中再加入少量0.3%KCl溶液，继续剪；如果铜网上还有很多比较大的颗粒，先用少量0.3%KCl溶液将其冲入烧杯，再进行剪碎。

　　⑤实验步骤中的（4）所提到的30mins包括包括（5）中的离心配平时间，因此，真正的静置时间应少于30mins，细胞与0.3%KCl接触的总时间应为45mins左右。

另外，如果在最后的镜检时，观察到细胞呈圆形，比较膨胀，即证明低渗这一步骤的成功。

反之，如果低渗不成功，则细胞会比较瘪，且这样的细胞很难摔碎。

低渗处理的目的是使细胞的体积膨大，染色体松散。

处理时间过长则会使细胞破裂，染色体丢失，时间过短则染色体不能够良好分散；

　　⑥离心：

离心的转速是800-1000r/min，这样低的转速是为了防止细胞破裂。

⑦再次离心和固定：

这样做是因为第一次离心之前细胞经过了低渗处理，虽然抽去了上清液，但是不可能抽干净，因此，再次离心保证细胞离开低渗环境。

⑧吹散细胞：

应该轻轻地吹细胞，如果太用力会导致细胞破裂。

　　⑨摔碎细胞：

摔碎细胞时应注意滴管与载玻片的距离，如果距离太小，则细胞很难摔碎，不会观察到染色体；但如果距离太大，会使细胞完全的碎开，染色体布满视野，虽然观察到染色体，但不能明确分出哪些是同一个细胞的，会给计数造成一定的难度。

　　⑩实际操作发现，细胞很难摔碎，这可以归结为多方面原因。

首先，如果在剪碎组织时没有剪好，则会导致细胞匀浆中含有大量细胞团，由于这些细胞聚集在一起，

就有一定的组织强度，十几厘米的高度很难摔碎，因此，这一步骤十分关键。

然后，如果低渗不完全，细胞可能膨胀程度不够，很难摔碎。

再次，如果混匀细胞时没有完全混匀，则会导致细胞聚集在一起，敲细胞时很难敲碎，同样观察不到理想的效果；如果吹得太用力，则会导致细胞被吹碎，视野中有大量细胞碎片，影响观察。

当然，如果摔细胞时高度不够，细胞不可能被摔碎。

　　?

染色：

染色之后应冲去染液并晾干，注意使用小水流并从背面冲洗，这样可以避免冲去细胞。

篇三：

细胞识别实验报告

　　数字图像处理课程设计报告

　　细胞识别

　　姓名：

陈福多

　　学号：

099064178

　　班级：

电子091

　　指导教师：

杜培明，王立

　　实验课题：

细胞识别

　　实验目的：

对血液细胞切片图片进行各种处理，最终得出细胞的数目、面积

　　等信息

　　一、实验内容

　　基于VC++6.0软件下的细胞识别，通过细胞的标记、二值化、填洞、收缩、找中心点、计数等过程完成实验目的。

　　1、图像信息获取

（1）在onDraw函数中添加代码实现打开一幅图像的功能。

（2）通过：

查看——建立类向导——添加OnInitialUpdate（）函数，实现对自动打开固定图片。

　　获取RGB、HSI信息

（1）通过：

查看——建立类向导——添加OnMouseMove（）函数，添加代码实现获取所要信息。

（2）通过函数RgbtoHsi实现RGB向HSI的转化。

　　2、标记Mark点

　　实现是Mark点,，边界（edge）的标记，MayBeMarkToMark，将细胞、可能是细胞的区域、不可能是细胞的区域、细胞边界分别用红色、蓝色、深红色和黄色标记出来。

　　3、二值化

　　将原有彩色图像变换为二值图像，背景灰度值为128，细胞灰度值为240，边缘为255。

　　4、填洞

　　将细胞中灰度值为128的部分的灰度值设置为240。

　　5、收缩

　　扫描图像，对图像进行预先的3次腐蚀，判断所生成边界点，然后根据原理判定是否标注该点，存放所标志的中心点，便于统计细胞个数及计算细胞半径。

　　6、获取中心点

　　根据前面所作工作统计获得的中心点个数，去掉一系列不符合要求的点得

　　出最终的细胞个数、细胞的平均半径和平均面积，用对话框输出统计结果。

　　二、学习心得

　　本次设计对VC6.0的认识又进了一步。

我学到了：

第一，把学过的软件语言进行比较；本项目是基于面向对象的C++语言，与以往我们学习的面向过程C有很大的不同，而比之同样是面向对象的Java而言，比如：

指针，java中没有指针；多重继承，C++支持多重继承；数据类型和类，java是完全面向对象的，所有函数和变量都必须是类的一部分；自动内存管理，C++中资源内存释放必须由程序员手动完成；操作符重载，Java不支持操作符重载；预处理功能，这个是我这次做项目发现的，C++中我们熟悉的#include而JAVA就是使用import导入相关包；总之，善于比较各个语言的不同点，我们的收获会很大；第二，在写代码的一些习惯上，之前开发过几个小应用，看过几个老师的视频，把自己的不良习惯改了；第三：

编程之前对项目的总体框架要清楚，否则会事倍功半。

第四，很惭愧，没有好好的去做这个项目，很多代码都是拷的，后面的几天时间花了好大代价去弥补；第五：

这毕竟不是用于生产的实用项目，枯燥是肯定的，需要按捺住心态；

　　注：

本项目代码均在notepad++下处理；

　　三、算法分析

　　1.打开图像

　　建立当文档工程；

　　添加Cdib类；

　　添加公共成员函数m_Cdib；

　　添加Serialize（）方法；

　　添加显示代码；

　　2．RgbtoHsi（&rgb,&Hsi）

　　RGB向HSI模型的转换是由一个基于笛卡尔直角坐标系的单位立方体向基于圆柱极坐标的双锥体的转换。

基本要求是将RGB中的亮度因素分离，将色度分解为色调和饱和度，并用角向量表示色调。

　　如果直接对R、G、B处理，其处理过程中很可能会引起三个量不同程度的变化，这样就会产生色差问题，甚至带来颜色上的失真。

HSI模型的出现，使得在保持色彩无失真的情况下实现图像处理成为可能。

　　HSI可以更好地区分细胞与非细胞。

　　3.OnMouseMove（UINTnFlags,CPointpoint）

　　当鼠标移动时调用此函数。

　　nFlags指示各种虚拟按键是否按下。

　　point：

鼠标的X,Y坐标：

该坐标为鼠标距离截获该消息的窗口左上角的位置是一个相对位置而不是在屏幕像素上的绝对位置。

　　在OnMouseMove函数里调用RgbtoHsi（&rgb,&Hsi）函数，可以在屏幕上显示鼠标所指点的坐标以及RGB、HSI和灰度值，通过HSI的可以选取合适的阈值来找到细胞以及边界。