各种培养基的制作方法Word文档下载推荐.doc
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分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2.营养琼脂培养基
在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
3.肉汁蛋白胨液体培养基
牛肉500克
蛋白胨10克
NaCl5克
pH7.1~7.2
取新鲜牛肉500克,去净脂肪、筋腱后,绞碎或剁碎,加水1000毫升浸泡,15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤,补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热,放入苏打(碳酸钠)至红色,调整pH值。
分装,高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质,制成液体培养基,如需制成固体培养基,可在每100毫升液体中加入2克琼脂,加热溶化后,分装,再次进行高压蒸汽灭菌。
4.高氏一号培养基(淀粉琼脂培养基)
可溶性淀粉2克
K2HPO40.05克
MgSO4·
7H2O0.05克
KNO30.1克
NaCl0.05克
FeSO40.001克
琼脂2克
pH7.2~7.4
在烧杯中加水95毫升,加热至沸腾,取可溶性溶粉2克,用5毫升水调成糊状,倒入沸水中和匀。
再称取其它药品,陆续加入烧杯内(待一种药品溶解后,再加入第二种药品)。
待全部药品溶解后,停止加热,补足失水,调pH值至7.2~7.4。
分装后,高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5.马铃薯蔗糖培养基
马铃薯200克
蔗糖10克
琼脂20克
水1000毫升
自然pH
称取200克马铃薯片,加水1000毫升,煮沸半小时,用纱布过滤,补足失水。
在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂,加热使琼脂熔化。
常用于培养酵母菌。
6.麦芽汁培养基
将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁,装入锥形瓶中,加塞高压蒸汽灭菌。
7.察氏培养基
NaNO32克
K2HPO41克
KCl0.5克
MgSO40.5克
FeSO40.01克
蔗糖30克
琼脂15~20克
分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌。
常用于培养霉菌。
8.豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)培养基
黄豆芽100克
葡萄糖50克
琼脂15克
称取新鲜黄豆芽100克,放入烧杯中,加1000毫升水,煮沸30分钟,用纱布过滤,补足失水。
再加葡萄糖(或蔗糖)50克,琼脂15克,加热至融化,补足失水。
分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌。
9.伊红美蓝培养基(E、M、B培养基)
乳糖10克
蛋白胨5克
K2HPO42克
2%伊红水溶液20毫升
0.35%美蓝水溶液20毫升
pH7.2
1.配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。
对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。
并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
2.调节pH值
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
3.过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。
用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4.分装
已过滤的培养基应进行分装。
如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。
如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。
分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。
一般制作斜面培养基时,每只15×
150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×
220毫米的试管约装12~15毫升。
每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
5.加棉塞
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。
堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。
棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。
棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。
棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。
塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
6.制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。
在实验台上放1支长0.5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。
将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。
将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物。
改良的Fries氏液体培养液:
蔗糖30g、酒石酸铵5g、NH4NO30.5g、KH2PO41g、
MgSO4·
7H2O0.5g、CaCl20.1g、酵母浸汁0.5g、蒸馏水1000mL
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