色谱实验讲义二Word下载.docx
- 文档编号:7443164
- 上传时间:2023-05-08
- 格式:DOCX
- 页数:19
- 大小:32.21KB
色谱实验讲义二Word下载.docx
《色谱实验讲义二Word下载.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《色谱实验讲义二Word下载.docx(19页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
三、目的
1、计算相对校正因子:
设苯的响应值为1,通过其峰高和其它组分的比较,计算其它各组分的相对应苯的相对校正因子;
2、学习用保留值定性分析。
三、实验仪器和步骤
仪器:
122型毛细管色谱仪
步骤:
1、注入1μl苯,甲苯,邻、间、对二甲苯混合液;
2、用标准苯,甲苯,邻、间、对二甲苯溶液定性混合液中各峰。
3、根据以苯峰为为标准计算其它组分的相对校正因子。
四、实验后问题:
1、改变载气流速和柱温对相对校正因子的值有何影响
2、你所测的苯系混合物,能否用归一化法定量,为什么?
实验三气相色谱实验
白酒中甲醇的百分含量及其它成分的定性检测
一、目的
1、掌握归一化法计算组分百分含量的方法;
2、了解白酒成分定性检测方法;
用FID检测器对白酒中各组分定性,在一定操作条件下物质均有各自确定的保留值,根据混合样色谱图和标准样色谱图的各相应组分保留值之比较,确定不同组分。
三、实验部分
1、市售白酒直接进样,观察产生多少个峰?
2、利用提供的标准样确定白酒的相应色谱峰;
3、计算甲醇大致的百分含量?
(甲醇等的相对校正因子按“1”计)
四、实验后问题
请同学自己查资料了解白酒分析需使用什么固定液,为什么?
实验四气相色谱实验-γ666的校正曲线绘制
1、了解电子捕获检测器的使用方法及注意事项;
2、掌握外标法测试样的方法及注意问题。
3、区分ECD与FID在原理上的差别。
1、电负性强元素吸收ECD的产生电子产生电流;
1、查资料了解ECD检测γ-666时的灵敏度;
2、配制0.0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ppm(用2ppmγ-666稀释)范围内γ-666样品的标准溶液,然后用外标法做出曲线,并计算线性回归方程及线性相关系数。
1、ECD适用于哪些类型的有机化合物?
2、用ECD检测器测定时需要哪几种气体,对气体有要求吗?
实验五气相色谱实验-内标法测毒死蜱含量
1、学习内标法测组分含量方法
2、学习将内标物作为标准物,用相对校正因子法求毒死蜱农药含量。
同样质量的不同物质在检测器上响应不一样,故需要校正因子,因为气谱条件变动产生结果不一致,用内标法测样比较准确,将内标物同时作为校正系数的标准样是准确便利地测定方法。
三、实验
1、毒死蜱样和对苯二甲酸二丁酯样分别进行气谱分析观察保留时间;
2、请同学们参考书本自行设计以对苯二甲酸二丁酯作标准物计算毒死蜱相对校正因子;
3、自行设计以对苯二甲酸二丁酯作为内标测定毒死蜱含量的方法。
实验六水果中维生素C含量的测定
(一)线性扫描极谱法
维生素C是人体必需的营养物质,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。
维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶,熔点190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂。
在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定。
维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸,如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用。
维生素C含量的测定方法很多,本实验介绍三种测定方法:
线性扫描极谱法、分光光度法和HPLC法。
一.实验目的
1、了解线性扫描极谱法的原理和应用
2、用标准曲线法测定水果中维生素C的含量。
二.实验原理
还原型维生素C中的烯二醇基具有还原性,在一定电位下,它在汞滴表面氧化,产生与含量成正比的峰电流,即
。
三.仪器和试剂
1.仪器JP-303示波极谱仪
2.试剂0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液(pH=4.6),
维生素C(A.R)
四.实验步骤
1、配制Vc标准溶液(100μg/mL):
准确称取10.0mg的Vc,用0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液溶解、定容至100mL。
2、绘制标准曲线:
(1)分别移取Vc标准溶液(100μg/mL)0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL于6个25mL的容量瓶中,用0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液定容;
(2)分别测定各溶液的极谱峰电流,测定条件如下:
线性扫描极谱法,二阶导数,扫描电位-0.2V
0.2V,扫描速度100mv/s,静止时间6s;
(3)以电流强度对浓度绘制标准曲线,并求出相关系数。
3、样品测定:
根据水果中Vc含量,称取一定量的水果样品(保证样品信号在工作曲线范围内),加少量水(约10mL),打碎匀浆,然后加5ml冰HAc防止Vc被氧化,并用水定容至50mL,超声15分钟,过滤。
测定滤液的极谱峰电流,根据标准曲线求出水果中的Vc含量。
实验七水果中维生素C含量的测定
(二)分光光度法
一.实验目的
用分光光度法测定水果中维生素C的含量
Vc在酸性介质中可定量还原Fe(III)为Fe(II),Fe(II)与邻二氮菲生成红色的络合物,此物在波长510nm处有最大吸收。
1、仪器岛津1700分光光度计
2、试剂
(1)Vc标准溶液(100μg/mL):
10.0mg的Vc+5mL冰醋酸,用水定容至100mL,
(2)HAc-NaAc缓冲液:
pH=4.74,0.2mol/L
(3)Fe(III)溶液:
0.1mol/L,称取硫酸铁胺(A.R)2.4g,用1mol/L的H2SO4溶解并定容至50mL
(4)邻二氮菲:
0.3%水溶液
(5)HCl溶液:
10%水溶液
1.绘制标准曲线:
分别移取Vc标准溶液(100μg/mL)0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL置于6支25mL比色管中,依次加HAc-NaAc缓冲液3.0mL,Fe(III)溶液3.0mL,邻二氮菲溶液1.5mL,摇匀后置于30℃的水浴中加热40分钟,然后用水稀释、定容至刻度,摇匀后,以不含Vc的试剂溶液作空白,在510nm处测量吸光度。
以吸光度对浓度绘制标准曲线,并求出相关系数。
2.样品测定:
(1)根据水果中Vc含量,称取一定量的水果样品(保证样品信号在工作曲线范围内),加少量水(约10mL),打碎匀浆,用10%HCl溶液定容至100mL,超声15分钟,过滤。
(2)取此样品溶液2.0mL于25mL比色管中,依次加HAc-NaAc缓冲液3.0mL,Fe(III)溶液3.0mL,邻二氮菲溶液1.5mL,摇匀后置于30℃的水浴中加热40分钟,然后用水稀释、定容至刻度,摇匀后,以不含Vc的试剂溶液作空白,在510nm处测量吸光度。
根据标准曲线求出水果中的Vc含量。
实验八水果中维生素C含量的测定
(三)HPLC法
1.查阅资料,了解常见水果如苹果、橙、橘、猕猴桃等中维生素C的含量范围;
2.根据维生素C的含量,确定取样量,使样品溶液的浓度在实验方法的定量范围内
二、目的要求
1、理解反相色谱的原理和应用;
2、掌握外标法定量测定方法、
3、根据样品中维C含量制定维C标准溶液的配制方法,然后实测维C含量。
三、实验原理
高效液相色谱是一种物理化学分离方法,具有高效分离功能,它和气相色谱在基本原理方面没有显著的不同,但其应用范围更广,可对80%的有机化合物进行分离和分析。
以液体为流动相,采用高压输送,使用高效固定相,使该法具有分离效能高、分析速度快及应用范围广等特点,并且只要样品能制成溶液,不需要气化,因此不受样品挥发性的约束,克服了GC要求样品能够气化的弱点。
在高效液相色谱中,反相色谱应用较广,它采用非极性键合相,极性流动相。
HPLC主要用于复杂成分混合物的分离、定性与定量,在药物分析中已广泛用于微量有机药物及中草药有效成分的分离、鉴定与含量测定。
本实验采用C18反相柱和高灵敏度的紫外检测器,对水果中VC进行分离,利用外标法进行定量,方法简便,分析速度快,结果准确。
四、仪器与试剂
1、Waters515高效液相色谱泵,2487双通道紫外检测器;
2、微量注射器;
3、C18反相柱,
4、VC标样:
配制成100μg/mL的水溶液,加5ml冰乙酸;
五、实验步骤
1、结合实物了解仪器各部分作用及使用方法;
2、流动相配制:
0.05mol/LNaAc和乙腈比例为95:
5
3、在UV1700紫外分光光度计扫描Vc标准溶液,确定它的最大吸收波长。
4、用VC标样配制成2.5,5.0,7.5,10.015.020.0μg/mL绘制工作曲线.
5、样品溶液:
将水果打碎匀浆,根据水果中VC含量并且考虑以后步骤对浓度的影响后决定称取匀浆样品的数量,以便保证样品信号在工作曲线范围内.匀浆样品加10ml水混合,加5ml乙酸,超声15分钟,离心10分钟。
上层清液过滤按适当步骤处理后检测。
实验后问题:
1、你所处理样品含量如果不在定量范围内,你将如何处理?
2、加乙酸的目的是什么?
3、实验中所处理的样品,如果含量不在标准曲线的范围内,应该如何处理?
4、比较三种测定方法的优缺点。
它们对样品有无特殊要求?
实验九HPLC实验-可口可乐中咖啡因的测定
1、根据咖啡因的溶解度你还能提出除氯仿外其它的萃取剂吗?
咖啡因在咖啡中含1.2%~1.8%,茶叶中2.0%~4.7%,可乐饮料等中均含咖啡因,LC将咖啡因分离并且用UV方法测定。
掌握LC操作方法和液液萃取技术,掌握通过保留时间,标准物质定性鉴别组分方法
四、实验步骤
1、自行设定方法用UV1700确定咖啡因的波长,
2、色谱条件流动相甲醇/水=60/401.0ml/min
3、咖啡因标准溶液2,4,6,8,10mg/L
{注:
取1000ppm的咖啡因1ml定容到25ml容量瓶中,此时咖啡咽浓度为40ppm,用此溶液配制上述标准曲线。
}
4、样品处理100ml可口可乐→250ml烧杯中,超声脱气赶走CO25min以上,后过滤,取20.00ml可口可乐过滤于125ml分液漏斗中,加1.0ml饱和NaCl,1mol/LNaOH1ml,用20ml氯仿分三次萃取(10ml、5ml、5ml)
氯仿提取液分离后经过装无水Na2SO4的小漏斗(颈部放脱脂棉,上面铺一层Na2SO4)过滤到25ml容量瓶中,如滤液不足,用少量氯仿多次洗涤小漏斗后定容到25.00ml;
再取此溶液1.00ml,稀释到50.00ml,待测。
5、绘制工作曲线
6、根据保留时间确定咖啡因峰位置
7、计算可口可乐中的咖啡因含量(单位,mg/L)
实验十原子吸收光谱实验-汞的测定
1、测汞时所用测汞仪时需要参比溶液吗?
2、查国家标准,自来水中含汞量是多少?
并依照此标准制定相应的定量范围。
掌握冷原子吸收光度法测汞
汞原子蒸气波长为253.7nm的紫外光具有强烈的吸收作用,汞蒸气浓度与吸光度成正比。
通过氧化分解试样中以各种形式存在的汞,使之转化可溶态汞离子进入溶液,用氯化亚锡将汞离子还原成汞原子,用净化空气做载气将汞原子载入冷原子吸收测汞仪的吸收池进行测定。
汞及其化合物属于剧毒物质,可在体内蓄积,进入水体的无机离子可转变为毒性更大的有机汞,由食物链进入人体,引起全身中毒作用。
天然水中含汞极少,一般不超过0.1μg/L。
1、仪器:
冷原子吸收测汞仪
2、试剂
(1)硫酸(GR),
(2)硝酸(GR),(3)盐酸(GR),
(4)重铬酸钾(AR),(5)硝酸溶液(1:
1水溶液)
(6)20%(g/ml)氯化亚锡:
将20g氯化亚锡加20ml盐酸中,微热溶解,冷却后用水稀释至100ml,并加几颗锡粒密塞保存。
(7)汞标准固定液:
将
0.1g重铬酸钾溶于190ml水,再加10ml硝酸。
(8)汞标准贮备液:
称取0.1354g氯化汞,用固定液溶解,转移至1000ml容量瓶中,再用固定液稀释至标线,摇匀。
此溶液每毫升含100μg汞。
(9)汞标准中间液:
吸取汞标准贮备液1.00ml,注入100ml容量瓶中,加固定液稀释至标线,摇匀。
此溶液每毫升含1.00μg汞。
(10)汞标准使用溶液:
吸取汞标准中间溶液10.00ml,注入100mL容量瓶,用固定液稀释至标线,摇匀。
于室温下阴凉处保存,可稳定100天左右。
此溶液每毫升含0.1000μg汞。
(11)稀释液:
将0.2g重铬酸钾溶于900ml水,加入28ml硫酸,再用水稀释至1L。
五、实验准备
1、测汞仪的线性范围0~10ppb之间,请按三(10)中的标准使用溶液配制一系列溶液作出工作曲线,然后测试样中汞。
如试样中汞含量不在自己所作的工作线性范围内,请设法处理,直到测出结果(取7个点)[1];
[1]注:
分别取0.1000μg/mL汞标液,0、0.5、1.00、1.50、2.00、3.00、4.00ml定容至100ml容量瓶中——吸取0.1000μg/L汞标液的体积不足4.00ml的,用固定液补足4.00ml后再加入稀释液定容。
2、列出所有需用的试剂及玻璃仪器,配制出步骤三中溶液;
3、简单叙述测汞仪操作方法;
4、“自来水”样的配制:
称0.02g重铬酸钾+90.00ml自来水,加入2.8ml浓硫酸,再用蒸馏水定容至100ml。
实验十一红外光谱法实验
1、红外光谱主要用于检测什么?
检测前要做些什么准备工作,对待测样品有何要求?
1、了解傅立叶红外光谱的性能和使用方法;
2、了解有机分子官能团振动频率所在红外波数的大致范围。
有机分子不同官能团在红外光谱中有不同吸收范围,可以根据这现象鉴别有关官能团。
四、实验
1、根据提供的有机物分子式,计算不饱和度;
2、制样并在在仪器上扫描有机物红外光谱图;
3、根据图找出相应的官能团;
4、结合气质联用的检测结果推测有机物结构式。
实验十二伏安法测杀虫单含量
1、掌握JP——303极谱仪使用方法;
2、用极谱法测杀虫单含量。
有机物上往往有还原基团,当达到一定电位时有机物将在汞滴表面还原,产生与含量成正比的峰电流,它们之间关系是
ip=KC
三、仪器与实验方法
(一)仪器试剂
1、仪器JP——303示波极谱仪
2、杀虫单标样和市售杀虫单商品。
(二)方法
1、分别用0.2mol/L的NaAc和HAc配制pH=4.65的缓冲液,并以此作为杀虫单的溶解液;
2、用10-4mol/L的杀虫单溶液作图找出杀虫单还原峰位置;
3、在杀虫单浓度为5×
10-3~5×
10-5mol/L范围内取4个以上点作标准曲线并求相关系数;
4、根据市售杀虫单标明含量,配制成适当浓度测其含量。
实验十三UV分光光度法——混合物的测定
一、实验前准备问题:
1、用分光光度测两种混合物质时,应先取得哪些数据;
2、应用何种物质作为参比物;
1、学习分光光度计的使用方法
2、学习测摩尔吸光系数方法
3、学习混合物测定的分光光度法
三、药品和试剂、仪器
0.02mol·
L-1K2Cr2O7标准溶液,4×
10-3mol·
L-1KMnO4,岛津1700分光光度计及若干玻璃仪器。
四、步骤与要求
a)取适量0.02mol·
L-1K2Cr2O7的标准液稀释100倍到100ml,加2mol·
L-1H2SO410ml,蒸馏水为参比,在1700仪器上作吸收曲线指出最大吸收波长λ1。
b)取适量4×
L-1KMnO4标准液稀释10倍到100ml,以蒸馏水为参比在UV—1700仪器上作吸收曲线指出最大吸收波长λ2。
c)根据比尔定律分别求出相应的吸光系数;
d)按1:
1(V:
V)的比例用a)、b)配制成混合液;
根据1~3步骤用解联立方程方法,根据未知液的吸收曲线测Cr2O72-和MnO4-1的浓度。
五、实验后解决问题:
1、检测纯KMnO4时,吸收峰是什么形状?
有几个峰?
波长在何处?
这些峰是否能应用于混合物的计算?
试用计算结果说明。
实验十四UV分光光度法——环已烷中微量苯的测定
1、波长大约在什么范围?
2、如何确定苯的色谱峰?
3、参比溶液是什么?
1、学习比较法进行定量分析的技术
2、学习有机化合物的紫外分析方法
苯[0.5%(AR)],环已烷(AR),岛津1700分光光度计及带盖的石英比色池。
1、标准溶液配制——取0.5%苯溶液1ml于10ml容量瓶中用环已烷稀释到刻度(注意用干容量瓶并加苯后盖紧)。
2、样品的配制——取0.5%苯溶液0.5ml于10ml容量瓶中用环已烷稀释到刻度
3、以环已烷为参比,分别测苯溶液和样品溶液用比较法测浓度。
实验十五UV分光光度法——胶束分光光度法测铝
1、什么是胶束?
胶束在分光光度法测定中起什么作用?
2、测铝时应选择何种参比溶液?
1、利用显色反应使铝发色,了解显色剂的显色条件,
2、了解胶束的形成对光谱曲线性质的影响
3、学习标准曲线的制作。
铬天青(AR)10-3mol/L,氯化十六烷基吡啶10-3mol/L,pH=4.5的10%六次甲基四胺溶液(用0.1mol/LHCl调pH值),铝标准溶液(1μg/ml)。
岛津1700分光光度计,酸度计。
1、铝标准溶液配制一系列铝工作溶液:
取铝标准溶液(1μg/ml):
0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml于25ml比色管中,并按顺序加入铬天青(AR)10-3mol/L1ml,pH=4.5的10%六次甲基四胺溶液1ml,氯化十六烷基吡啶10-3mol/L0.5ml,然后用蒸馏水稀释到25ml比色管刻度。
2、摇匀发色10分钟后,在UV1700仪器上用扫描法测其最大吸收波长和吸光度。
3、根据所取得的数据计算其线性回归方程以及线性相关系数。
五、实验后问题:
在分光光度测定中有无异常现象,如有请指出可能原因。
实验十六砷的测定
一、目的要求
1、掌握分光光度计使用方法
2、掌握测定痕量无机砷的方法
二、方法原理
硼氢化钾在酸性溶液中,产生新生态的氢,将水中无机砷还原成砷化氢气体,以硝酸,硝酸银,聚乙烯醇,乙醇溶液为吸收液。
砷化氢将吸收液中的银离子还原成单质胶态银,使溶液呈黄色,颜色强度与生成氢化物的量成正比。
黄色溶液在400nm处有最大吸收,峰形对称。
颜色在2h内无明显变化(20℃以下)。
三、试剂
(1)乙醇(AR),
(2)硼氢化钾(AR),
(3)0.2%(m/v)聚乙烯醇水溶液:
称取0.1g聚乙烯醇置100ml烧杯中,加入30ml去离子水,在不断搅拌下加热溶解,待全溶后,盖上表面皿,微沸10min,冷却后,定容至50ml容量瓶中,贮于玻璃中,此溶液可稳定一星期。
(4)硝酸—硝酸银溶液:
称取0.408g硝酸银置50ml烧杯中,摇匀,于棕色瓶中保存。
(5)硫酸—酒石酸溶液:
于0.5mol/L硫酸300ml中,加入45g酒石酸(AR),溶解后即可使用。
(6)二甲基甲酰胺溶液(DMF):
将二甲基甲酰胺与乙醇胺,按体积比9:
1进行混合,此溶液于棕色瓶可保存30d。
(7)醋酸铅棉:
将5g脱脂棉浸于10%(m/V)的醋酸铅溶液50ml中,0.5h后拧出,拧去多余水分,在室温下自然凉干,装瓶备用。
(8)吸收液:
将硝酸银,聚乙烯醇,乙醇按体积比1:
1:
2进行混合,临用时现配。
(9)砷标准溶液:
提供100mg/L的砷溶液
(10)取(9)1.0ml稀释到100ml
四:
实验步骤
a)取(10)砷标准液:
0.0ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml,3.0ml,4.0ml加入到反应管中,然后各加入蒸馏水使其总体积为100.0ml,在加入(5)5.0ml,在反应上端的两侧小管中各放入一片制作好的硼氢化钾片;
在吸收管放入(8)3.0ml,调整好整套装置后进行反应;
b)首先将一片硼氢化钾放入反应管中,当气泡几乎没有时,再放入第二片硼氢化钾,当气泡没有时将吸收管内的吸收液倒入干燥的比色皿中,在UV9100分光光度计上测其吸光度值。
c)样品的测定
取自来水100.0ml按上述1,2步骤进行反应并测其吸光度。
(注意:
不要加砷标液)
d)详细写出自来水中砷含量的计算步骤。
实验问题:
1、DMF棉起什么作用?
2、在实验步骤1中添加蒸馏水的量是否一定要准确?
自来水中砷含量的测定时所取的体积是否一定要准确?
3、分光光度法的参比溶液是什么?
实验十七铜的测定
1、掌握原子吸收分光光度计使用方法
2、掌握测定铜元素的方法
原子吸收分光光度法是通过基态原子对特征光辐射的吸收而测定该元素原子含量的方法。
本实验中,溶液中的铜离子在一定温度下形成铜原子蒸汽,吸收由铜空阴极灯辐射出波长为324.5nm的铜特征锐线光,其吸光度A与铜原子蒸气中基态原子数N0的关系符合比耳定律。
用已知不同浓度的铜标准溶液通过原子吸收分光光度计测出不同吸光度,绘制成标准曲线,再测出试样的吸光度A,即可从标准曲线上求出试样中铜的含量。
三、仪器及试剂
日立180-80原子吸收分光光度计
HCl(AR),CuSO4(AR),粗CuSO4(95%)。
1、用0.1mol/LHCl配制Cu2+浓度
为:
2ppm,4ppm,6ppm,8ppm,10ppm,并根据测定结果绘制工作曲线;
2、取一定量的粗CuSO4样品,稀释到一定浓度后,根据工作曲线求出CuSO4的百分含量。
五、实验问题:
1、此法与碘量法测定CuSO4含量相比,此法的优缺点。
2、配制样品CuSO4溶液时应注意什么问题?
实验十八气质联用仪测多组份农药
1、了解气谱、质谱联用的目的和方式;
2、了解质谱各类图谱和标准质谱图的作用。
二、方
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 色谱 实验 讲义
![提示](https://static.bingdoc.com/images/bang_tan.gif)