常用培养基配方Word格式文档下载.docx
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沙门氏菌检验中的前增菌
4.9四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液
4.10GN增菌液
志贺氏菌的前增菌
4.11亚硒酸盐胱氨酸增菌液
沙门氏菌选择性增菌培养
4.12SS琼脂
沙门氏菌、志贺氏菌的分离
4.13V-P半固体琼脂
细菌检验的V-P试验
4.147.5%氯化钠肉汤
金黄色葡萄球菌的增菌培养
4.15Baird-Parker培养基
金黄色葡萄球菌的检验
4.16酸性肉汤
酸性罐头食品商业无菌检验
4.17尿素琼脂基础
细菌检验中的尿素酶试验
4.18赖氨酸脱羧酶培养基
细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验
4.19吲哚培养基
细菌靛基质试验,亦称色氨酸肉汤
4.20硝酸盐氰化钾培养基
细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验
4.21生理盐水
检样的溶解与稀释
5具体内容
5.1革兰氏染色法
5.1.1革兰氏染色液
5.1.1.1结晶紫染色液
成份:
结晶紫1.0g
95%乙醇20.0ml
1%草酸铵水溶液80.0ml
5.1.1.2革兰氏碘液
碘1.0g
碘化钾2.0g
蒸馏水300.0ml
5.1.1.395%乙醇
5.1.1.4沙黄复染液
沙黄0.25g
95%乙醇10.0ml
蒸馏水90.0ml
5.1.2染色法
5.1.2.1将涂片在火焰上固定。
5.1.2.2初染:
滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
5.1.2.3媒染:
滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
5.1.2.4脱色:
滴加95%乙醇脱色,水洗;
或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s,水洗。
5.1.2.5复染:
滴加沙黄复染液,染1min,水洗,待干,镜检。
5.1.2.6结果判定:
革兰氏阳性菌呈紫色;
革兰氏阴性菌呈红色。
5.2一般培养基和专用培养基
5.2.1营养琼脂
5.2.1.1用途:
用于一般细菌培养及细菌总数测定。
5.2.2.2成份(g/L):
蛋白胨10.0
牛肉粉3.0
氯化钠5.0
琼脂15.0
PH7.3±
0.1
5.2.2.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装,121℃15min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项:
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.2孟加拉红培养基
5.2.2.1用途:
用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。
蛋白胨5.0
葡萄糖10.0
磷酸二氢钾1.0
硫酸镁0.5
孟加拉红0.03
氯霉菌0.1
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装,121℃20min高压灭菌备用。
保存于阴凉干燥处;
密封、避光。
5.2.3乳糖胆盐发酵管
5.2.3.1用途:
用于大肠菌群,粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。
5.2.3.2成份(g/L):
蛋白胨20.0
胆盐3.0
乳糖5.0
溴甲酚紫0.01
PH7.4±
5.2.3.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装于有倒立发酵管的试管中,115℃15min高压灭菌,双料乳糖胆盐发酵管除纯水外,其它成份加倍。
5.2.3.4注意事项:
5.2.4乳糖复发酵管
5.2.4.1用途:
供大肠菌群证实试验用。
5.2.4.2成份(g/L):
乳糖10.0
5.2.4.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装10ml于有倒立发酵管的试管中,115℃15min高压灭菌备用。
5.2.4.4注意事项:
5.2.5三糖铁琼脂
5.2.5.1用途:
主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
5.2.5.2成份(g/L):
蛋白胨20.0酚红0.025
牛肉膏3.0氯化钠5.0
乳糖10.0硫酸亚铁铵(6H2O)0.5
蔗糖10.0硫代硫酸钠0.5
琼脂12.0葡萄糖1.0
5.2.5.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至溶解,分装试管,115℃15min高压灭菌制成高层斜面备用。
5.2.5.4注意事项:
保存于阴凉干燥处,密封、避光。
5.2.6伊红美兰琼脂
5.2.6.1用途:
弱选择性培养基,用于分离肠道致病菌。
5.2.6.2成份(g/L):
磷酸氢二钾2.0
伊红0.4
美兰0.065
PH7.1±
0.2
5.2.6.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热溶解,121℃15min高压灭菌,冷至55℃倾注平板备用。
5.2.6.4注意事项:
5.2.7缓冲蛋白胨水
5.2.7.1用途:
用于沙门氏菌检验中的前增菌。
5.2.7.2成份(g/L):
Na2HPO4(12H2O)9.0
KH2PO41.5
最终PH7.2±
5.2.7.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装,每瓶225ml,121℃15min高压灭菌备用。
5.2.7.4注意事项:
5.2.8四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液
5.2.8.1用途:
用于沙门氏菌检验中前增菌。
5.2.8.2成份(g/L):
A基础培养基
多胨或胨5.0g
胆盐1.0g
碳酸钙10.0g
硫代硫酸钠30.0g
蒸馏水1000ml
B碘溶液
碘5.0g
碘化钾6.0g
蒸馏水20ml
5.2.8.3制法:
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100ml。
分装时应随时震荡,使其中的碳酸钙混匀。
121℃高压灭菌15min备用,临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml、0.1%煌绿溶液1ml。
5.2.8.4注意事项:
5.2.9GN增菌液
5.2.9.1用途:
用于志贺氏菌的前增菌液
5.2.9.2成份(g/L):
胰蛋白胨20.0g
葡萄糖1.0g
甘露醇2.0g
柠檬酸钠5.0g
去氧胆酸钠0.5g
磷酸氢二钾4.0g
磷酸二氢钾1.5g
氯化钠5.0g
5.2.9.3制法:
按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。
分装每瓶225ml,115℃高压灭菌15min。
5.2.9.4注意事项:
5.2.10亚硒酸盐胱氨酸增菌液
5.2.10.1用途:
用于沙门氏菌选择性增菌培养。
5.2.10.2成份(g/L):
乳糖4.0
磷酸氢二钠10.0
亚硒酸氢钠4.0
L-胱氨酸0.1
PH7.0±
5.2.10.3制法:
称取各成份溶于灭菌纯水中,在无菌容器中溶解,分装,每瓶100ml,备用。
5.2.10.4注意事项:
于4℃冰箱中密封保存。
5.2.11SS琼脂
5.2.11.1用途:
用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离。
5.2.11.2成份(g/L):
蛋白胨5.0牛肉粉5.0
乳糖10.0三号胆盐3.5
柠檬酸铁10.0柠檬酸钠8.5
中性红0.025硫代硫酸钠8.5
琼脂15.0煌绿0.00033
5.2.11.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸溶解,冷至55℃,倾注平板备用。
5.2.11.4注意事项:
A保存于阴凉干燥处,密封、避光。
B勿高压灭菌。
5.2.12V-P半固体琼脂
5.2.12.1用途:
用于细菌检验的V-P试验。
5.2.12.2成份(g/L):
蛋白胨12.0
酵母膏1.0
氯化钠5.0
琼脂3.0
PH7.3±
5.2.12.3制法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至溶解,分装试管,每管1~1.5ml,121℃10min高压灭菌,立即取出冷却备用。
5.2.12.4配制试剂:
甲液:
α-萘酚6.0g
无水乙醇溶液100.0ml
乙液:
氢氧化钾40.0g
肌酸0.3g
蒸馏水100.0ml
先将氢氧化钾溶于水中,再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内,可使用2个月。
5.2.12.5试验方法:
挑取琼脂培养物接种V-P培养基中,于36±
1℃培养24h±
2h,将甲液0.2ml(约6滴)加入试管中,摇混均匀,再加入乙酸0.1ml(约3滴),再摇混均匀。
阳性反应立即或15min内呈现红色,阴性反应为铜色。
阴性结果在1h后再做一次检查。
有些试管在数小时后红色会逐渐消失,此仍作阳性反应。
5.2.12.6注意事项:
5.2.137.5%氯化钠肉汤
5.2.13.1用途:
用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。
5.2.13.2成份(g/L):
蛋白胨10.0
牛肉粉3.0
氯化钠75.0
5.2.13.3制法:
称取各成份溶于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装,每瓶50ml,121℃15min高压灭菌备用。
5.2.13.4注意事项:
5.2.14Baird-Parker培养基
5.2.14.1用途:
用于食品中金黄色葡萄球菌的检验。
5.2.14.2成份(g/L):
胰蛋白胨10.0丙酮酸钠10.0
牛肉膏5.0甘氨酸12.0
酵母膏1.0氯化锂(6H2O)5.0
琼脂20.0PH7.4±
5.2.14.3用法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至溶解,分装每瓶95ml,121℃15min高压灭菌,冷至50℃时,每95ml加入5ml亚碲酸钾卵黄增菌液。
5.2.14.4注意事项:
B平板冰箱贮存不超过48小时。
5.2.15酸性肉汤
5.2.15.1用途:
用于酸性罐头食品商业无菌检验。
5.2.15.2成份(g/L):
多价蛋白胨5.0
酵母粉5.0
葡萄糖5.0
磷酸氢二钾4.0
PH5.0±
0.2
5.2.15.3制法:
5.2.15.4注意事项:
5.3生化试验培养基和试剂
5.3.1尿素琼脂基础
5.3.1.1用途:
用于细菌检验中的尿素酶试验。
5.3.1.2成份(g/L):
蛋白胨1.0
葡萄糖1.0
磷酸二氢钾2.0
酚红0.012
PH6.8±
5.3.1.3制法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至完全溶解,121℃15min高压灭菌,冷至55℃以无菌技术每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml,混匀后制成斜面备用。
5.3.1.4试验方法:
挑取琼脂培养物接种,在36±
1℃培养24h,观察结果。
尿素酶阳性者出于产碱而使培养基变为红色。
5.3.1.5注意事项:
5.3.2赖氨酸脱羧酶培养基
5.3.2.1用途:
用于细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验。
5.3.2.2成份(g/L):
酵母膏3.0
L-赖氨酸5.0
溴甲酚紫0.016
PH6.7±
5.3.2.3制法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至完全溶解,分装试管,每管1-1.5ml,121℃15min高压灭菌备用。
5.3.2.4试验方法:
从琼脂斜面上挑取琼脂培养物接种,在36±
1℃培养18-24h,观察结果。
赖氨酸脱羧酶阳性者出于产碱而使培养基变为紫色。
阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变黄色。
对照管应为黄色。
5.3.2.5注意事项:
5.3.3吲哚培养基
5.3.3.1用途:
用于细菌靛基质试验,亦称色氨酸肉汤。
5.3.3.2成份(g/L):
DL-色氨酸1.0
PH7.4±
5.3.3.3用法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至完全溶解,121℃15min高压灭菌备用。
5.3.3.4配制柯凡克试剂:
对二甲氨基苯甲醛10.0g
戊醇150.0ml
浓盐酸50.0ml
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中,缓慢搅拌加入盐酸,加热至60℃,呈深黄色,静置6-7h,变成黄色即可使用。
试剂宜少量配制,不用时保存于4℃冰箱内。
久存后试液变成褐色不可使用。
5.3.3.5试验方法:
1℃培养24h,滴加柯凡克试剂0.1ml。
阳性反应出现红色环;
阴性反应为黄色环。
5.3.3.6注意事项:
5.3.4硝酸盐氰化钾培养基
5.3.4.1用途:
用于细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验。
5.3.4.2成份(g/L):
磷酸二氢钾0.225
磷酸氢二钠5.64
硝酸钾(无亚硝酸盐)1.0
5g/L氰化钾溶液10.0
PH6.8±
5.3.4.3用法:
称取各成份于纯水中,加热煮沸至完全溶解,121℃15min高压灭菌,每100ml无菌加入0.5%氰化钾溶液1ml,分装无菌试管备用;
同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
5.3.4.4试验方法:
挑取琼脂培养物接种,先接种于吲哚培养基中,混匀,然后灼烧接种环,再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中,于36±
1℃培养24h,观察培养液有无混浊,培养液出现混浊,即有细菌生长,为阳性反应(不抑制);
经2天培养,细菌不生长为阴性反应(抑制)。
5.3.4.5注意事项:
5.3.5生理盐水
5.3.5.1用途:
用于检样的溶解与稀释。
5.3.5.2成份:
(g/L):
氯化钠8.5g
纯水1000.0ml
5.3.5.3制法:
称取氯化钠于纯水中,至完全溶解,分装,121℃高压灭菌15min。
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