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组培
绪论
1、植物组织培养的含义在无菌条件下,将植物的器官、组织、细胞及原生质体等接种在人工配制的培养基上,在适当的培养条件下生长发育成完整植株的过程,称植物组织培养。
又称离体培养或试管培养。
植物组织培养类型①植株培养②植物器官培养③植物组织培养④植物细胞培养⑥植物原生质体培养
二、植物组织培养的发展历史
1、探索阶段(20世纪初至30年代中)
1902年,德国植物学家Haberlandt提出了植物细胞全能性学说。
植物的器官和组织可以不断分割,直至分到单个细胞而不影响细胞增殖的观点。
并设想离体细胞具有再生完整植株的潜力。
植物组织培养之父
Haberlandt:
观点:
高等植物的组织和器官可以分割成单个细胞
贡献:
提出细胞全能性首次进行离体细胞培养
2、培养技术建立阶段(20世纪30年代至50年代末)
作为一门技术,必须具有一定的程序性(技术模式)。
在这一阶段植物组织培养建立了2个与培养技术有关的重要模式:
①培养基模式②激素调控模式。
1934年美国的White,利用番茄根建立了第一个活跃生长的无性繁殖系,发现B族维生素对培养的离体根生长具有重要作用。
创立了White培养基。
1943年White发表了《植物组织培养手册》的专著,使植物组织培养开始成为一门新兴的学科。
组织培养的奠基人
1948年,Skoog和崔徵通过对烟草茎切段和髓培养组织的研究,确定了腺嘌呤/生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一。
1956年Miller等发现了激动素。
控制器官分化的激素模式变为激动素/生长素的比例关系。
促进组培发展。
1958年,英国科学家Steward等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养,成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株,首次获得植株再生成功。
使细胞全能性理论得到证实,这是植物组培的第一次突破。
1960年,Cocking等用真菌纤维素酶分离植物原生质体获得成功。
这是植物组织培养的第二次突破。
1960年G.Morel采用兰花的茎尖培养,实现了去病毒和快速繁殖两个目的。
这是经过茎尖—原球茎—小植株的方式而再生的。
Morel提出的这种离体无性繁殖方法,其繁殖系数极高,很快被兰花生产者所采用,迅速建立起兰花工业。
植物离体微繁技术及脱毒技术得到了迅速发展,实现了产业化。
1962年Marshing和Skoog在烟草培养中筛选出至今仍被广泛使用的MS培养基
1964年,印度科学家Guha和Maheswari在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。
3、应用研究阶段(20世纪70年代以后)
1971年,Takebe等从烟草原生质体得到再生植株,首次获得原生质体植株再生成功。
1972年,Carlson等通过两个烟草物种之间原生质体的融合,获得了第一个体细胞杂种植株。
(1)原生质体培养取得重大突破
(2)花药培养取得显著成绩(3)微繁技术广泛应用
在植物组织培养发展史中,我国学者做出多方面的贡献,除崔徵外,还有李继侗关于玉米等植物离体根尖培养的研究工作,罗士韦关于幼胚和茎尖培养,王伏雄等幼胚的研究培养工作;胡道芬花药培养;朱至清N6培养基等。
3、植物组织培养的主要应用
(一)种苗脱毒茎尖培养可以得到无病毒苗木已成为解决病毒病危害和品种退化问题的一个重要途径。
(二)快速繁殖许多植物名贵是因为繁殖系数太低,种子结实率低或者不结种子,而营养繁殖又很慢。
利用组织培养再生植株,进行大量繁殖,可以大大提高繁殖系数。
目前组织培养快速繁殖已在许多植物上应用,最早是兰花(60年代)。
快速繁殖实现工厂化育苗(特点:
繁殖快,性状稳定,整齐一致,无病虫害,周期短,周年生产。
)
(3)植物组织培养育种
1.利用培养变异,筛选优良突变体
植物离体培养,能够明显提高突变率,并且会有各种各样的生理和形态突变,如株高、花色、植株形态、生育期、耐性等。
可以从中选择优良突变体,培育新品种。
2.利用远缘杂交幼胚培养,获得杂种植株,克服其杂交不亲和性
有些植物远缘杂交,能正常受精,但受精胚往往败育。
这种情况下,可以将幼胚在败育前进行离体培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功,获得缘远杂种植株,从而育成一些罕见的新物种。
3.利用细胞融合技术,克服远缘杂交不亲和性
野生种往往有许多优良性状,但大部分野生种与栽培种杂交不亲和,严重影响了野生种优良遗传基因的应用。
利用细胞融合,可以克服这种杂交不亲和性,获得体细胞杂种,使野生种的利用成为可能。
4.倍性育种,缩短育种年限
5.基因工程基因工程主要研究DNA的转导,而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生。
(四)离体种质保存
随着地球不断开发、生态环境破坏,种植资源日趋枯竭,大量有用基因损失。
利用组织培养法,低温保存(-196℃)或试管保存,为保存和抢救濒临灭绝的生物带来希望。
(5)细胞培养生产有用物质(生物制品)
利用细胞培养生产次生物质,如药物、色素、食品添加剂、酶、农药等。
有些极其昂贵的生物制品,如抗癌首选药物--紫杉醇等,可以用大规模培养植物细胞来直接生产。
思考题:
1、植物组织培养发展史上重要人物及其重要研究成果?
2、植物组织培养主要应用在哪些方面?
第一章植物组织培养实验室设备和一般技术
实验室设置及培养条件
一实验室设置及内部设备
实验室建设应考虑的问题:
1、实验的性质2、实验室的规模
细胞工程实验室:
①基本实验室:
准备室、无菌操作室、培养室②辅助实验室:
细胞学实验室、生化分析实验室③贮藏室④温室
基本实验室
1、准备室完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装及高压灭菌;器皿、材料的洗涤等工作。
主要设备:
纯水器工作台药品厨天平电磁炉冰箱玻璃器皿酸度计高压灭菌锅干燥箱等
2、无菌操作室(接种室)用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
接种室应用推拉门,设有缓冲间,面积2m2为宜。
进入接种室前更衣换鞋,减少带入接种室杂菌
接种室主要设备:
①超净工作台(每次实验前要用紫外灯灭菌20min,关掉紫外灯开始工作,工作过程中注意一直开着吹风机)②无菌操作用具③离心机④细胞融合仪
3、培养室用于接种材料的培养。
培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。
其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
控制:
温度、光照、湿度。
培养室主要设备:
①培养架②空调③时控器(自动开灯、关灯)④温度自动记录仪⑤摇床
辅助实验室
1、细胞学实验室:
对培养材料进细胞学鉴定和研究。
由制片室和显微观察室组成。
主要设备:
切片机、磨刀机、温箱及切片染色设备;实体显微镜、倒置显微镜、生物显微镜、照相设备
显微观察室生化分析实验室
实验室布局
南
北
二 培养条件
(一)温度1.一般控制在25土2℃。
最低15ºC,最高35ºC。
2.不同植物最适温度不同。
如百合20℃;月季25-27℃。
(2)光照
1.光强2000-3000lx①影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。
②愈伤组织的诱导需弱光或不需光,分化需光。
继代培养一般需光。
此时光对器官的作用是一种诱导反应。
光照强,幼苗生长健壮;光照弱,幼苗生长弱小,容易徒长。
2.光质①不同波长的光对细胞的分裂和器官的分化有影响②红光促进杨树愈伤组织的生长,蓝光阻碍其生长。
3.光照时间(10-16h)光照长短对试管内花的形成是个重要影响因素,在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加,而促进生长。
(三)湿度
1.瓶内的湿度:
主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。
如培养基过硬,则不利于外植体接触和插入培养基,导致生长迟缓;封口膜过于透气,也会使瓶内湿度下降。
2.环境湿度:
过低会使培养基丧失大量水分,渗透势升高,影响材料对营养物质的吸收,也会阻碍外植体的生长。
一般为70-80%。
(四)pH值培养基适宜PH值5.0-6.5,一般为5.8
(五)气体
1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。
可用棉塞或特制的封口塑料。
通气最好的是棉塞,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引起污染。
2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。
◆固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。
◆液体培养时,可考虑采取振荡培养的方式,以增加通气性。
(六)渗透压
(七)培养基成分
思考题:
1、植物组培实验室的基本组成?
2、植物离体培养的环境条件?
植物材料的接种
一灭菌1、灭菌方法
①.培养基灭菌◆高压湿热灭菌◆某些激素采用过滤灭菌
②.玻璃器皿灭菌◆干热灭菌:
150℃40min;120℃2h◆湿热灭菌:
121℃,30min◆接种前用酒精棉球擦试,并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
③.接种工具灭菌◆用前干热灭菌◆用前湿热灭菌◆接种前用酒精棉球擦试,浸入95%酒精液中,并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
◆电热石英砂灭菌器
④.实验服、口罩灭菌◆湿热灭菌
⑤.接种室灭菌◆紫外灯照射(接种室、超净台):
波长260nm距离小于1.2m,15-20min。
◆臭氧灭菌机:
1-2◆熏蒸灭菌:
(5-8ml甲醛+5g高锰酸钾)/m3◆接种台喷雾消毒:
75%酒精。
⑥.培养室灭菌◆新建培养室用前要彻底熏蒸1次◆隔1周用洗衣粉水或来苏水拖地1次,用高锰酸钾擦架1次
⑦.物体表面灭菌◆灭菌方式:
喷雾、涂抹杀菌◆范围:
超净台的台面和四壁、双手◆消毒剂:
70%酒精;1-2%来苏水;1%新洁尔灭等。
⑧.接种材料消毒
A取材营养器官:
根、茎尖、茎段、叶片等
◆外植体的来源:
田间植物;温室植物;组培苗
◆取材部位:
一般生长旺盛的部位
◆取材时间:
生长旺盛的季节取材好
生殖器官:
胚胎(胚、胚珠、胚乳等)和花药等选取适宜时期的花器官
B外植体:
从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
外植体灭菌◆用化学灭菌剂灭菌◆常用化学灭菌剂◆消毒步骤:
①流水冲洗或洗衣粉漂洗②用化学灭菌剂浸润消毒通常:
70%酒精30S,0.1%升汞4-10min。
表面有较厚蜡质层的的可加吐温-20或吐温-80等浸润剂(灭菌液的0.5%)。
③无菌水冲洗3-5次。
(注:
灭菌液要浸没材料)
二无菌操作和接种(实验课)
第二章培养基
一培养基的种类和成分
(一)培养基的种类
1、培养基根据其态相不同分为:
固体培养基与液体培养基。
2、根据培养物的培养过程分为:
初代培养基和继代培养基。
3、根据作用不同分为:
诱导培养基、增殖培养基和生根培养基
4、根据营养水平不同,培养基分为许多种,常用如下:
◆MS培养基:
富盐平衡培养基(还有LS、BL、ER)1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。
特点:
①无机盐浓度较高,元素比例合适,是较稳定的平衡溶液;②微量元素种类齐全;③营养丰富。
中盐培养基:
包括H、Nitsch和Miller培养基等。
多数是在MS基础上进行改良的培养基。
特点:
大量元素约为MS的一半;微量元素种类减少而含量增高;维生素种类增多。
◆B5培养基:
高硝态氮培养基(还有N6和SH培养基)1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。
特点:
①硝酸钾含量高;②氨态氮含量低;③VB1含量较高。
适合要求高氮素营养,氨态氮对其生长又有抑制作用的植物培养。
◆N6培养基:
高硝态氮培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。
特点:
硝态氮含量高,氨态氮含量较低。
◆White培养基:
低盐培养基(还有WS、HE、改良Nitsch等)1943年由White为培养番茄根尖而设计的。
特点:
无机盐含量低,有机成分也很低,适于生根培养。
◆KM-8P培养基:
它是1974年为原生质体培养而设计的。
特点:
有机成分较复杂,它包括了所有的单糖和维生素,广泛用于原生质融合的培养。
(2)培养基成分
◆水
◆无机盐:
大量元素(≥0.5mmol/L)NPKCaMgS微量元素(≤0.5mmol/L)FeMnCuZnMoClB
◆有机成分
1.碳水化合物
选用种类:
蔗糖(或葡萄糖、果糖)等规模生产可用绵白糖、白砂糖
蔗糖浓度:
2-3%,胚培养为4-15%
糖在培养基的作用1)为细胞提供合成新物质的碳骨架2)为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3)维持渗透压
2.维生素
种类:
VB1、VB6、Vpp等
浓度:
0.1-1.0mg/L
作用:
直接参与酶的形成,还参与蛋白质、脂肪的代谢等重要生命活动。
离体培养下,一般也能合成所有必需的维生素,但数量不足,需要加入一种或几种维生素。
3.肌醇
浓度:
100mg/L
作用:
促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成;对组织细胞繁殖、分化的促进作用
4.天然复合物
椰乳:
促进愈伤组织和细胞培养,用量10~20%;
香蕉泥:
对PH值缓冲大,用量150~200ml/L,应用在兰花组培
马铃薯:
对PH值缓冲大,用量150~200g/L,使苗壮
水解酪蛋白:
浓度100~200mg/L,应用在微茎尖培养
◆植物激素
1.生长素类(注:
IAA受光和高温破坏,勿见光,过滤灭菌)
(1)常用种类 2,4-DNAAIBAIAA
(2)作用:
促进细胞脱分化诱导愈伤组织的产生;促进生根;与CK共同作用促进器官分化;诱导胚状体形成。
(3)溶解方法95%酒精或0.1MNaOH
(4)浓度 0.1-15mg/L常用范围:
2-5mg/L
2.赤霉素 (注:
不耐热,高温分解,过滤灭菌)
(1)常用种类:
GA3
(2)作用:
促茎伸长,促胚发育成植株;打破休眠;在器官形成后加入。
(3)溶解方法:
95%酒精
3.细胞分裂素(CTK)
(1)常用种类:
ZT6-BA KT TDZ(噻二唑苯基脲)
(2)作用:
诱导不定芽分化和茎、苗增殖。
(3)浓度:
0.1-10mg/L常用范围:
0.5-2mg/L
(4)溶解方法:
0.1MHCL
植物激素的应用规律P62
①先Aux后CKs处理,有利于细胞分裂但不利于细胞分化。
容易产生多倍体细胞(核分裂和胞壁形成不同步所至),cks有利于胞壁形成。
②先CKs后Aux处理,细胞分裂也分化(可能是内源生长素起作用)
③Aux和CKs同时处理,分化率提高。
Aux与CKs的比值改变形态建成的方向。
高:
有利根分化,抑制芽形成;
Aux/CKs适中:
促进愈伤组织生长;
低:
有利芽分化,抑制根形成;
在组织培养中生长调节物质的使用浓度,因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异.
◆培养物支持材料
1.琼脂用量6-10g/L,新买应试凝固力凝固力与灭菌温度、时间和PH有关
2.其它 滤纸桥 海绵等
◆辅助性物质
1.抗生素
①常用种类:
青霉素 链霉素 庆大霉素等
②用量:
5-20%
③注意:
抗生素对组织生长有抑制作用,使用要慎重
2.抗氧化物常用抗氧化剂及使用:
半胱氨酸 VC(50-200mg/L液洗涤外植体伤口表面)。
3.活性炭
①作用:
吸附有毒物质;茎尖初代培养可防褐化;促进新梢增殖(浓度0.1-0.2%);促进生根;防止组培苗玻璃化(浓度0.3%);利于胚胎培养。
②常用浓度:
0.5-1.0g/L
③注意:
活性炭具副作用。
二培养基制备
(1)母液配制(以MS为例)
1.母液浓缩倍数:
10-100
2.用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂
3.注意防止沉淀
4.激素母液浓度:
0.5~1mg/ml,1次配成50或100ml
5.激素溶解:
IAA、IBA、GA、NAA先溶95%酒精再定容;2,4-D先溶于少量1MNaOH再加水;
KT、BA先溶于少量1MHCl再加水。
(2)培养基配制称琼脂
确定配方移母液定容调PH值培养基熬制分装扎口灭菌接种
称蔗糖
培养基熬制:
将定容好的培养液倒入锅中,加入琼脂,边煮边搅拌,防止糊底。
调PH值:
用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8。
分装:
趁热分装,100ml的三角瓶约装入30-40ml,30瓶/L。
扎口与灭菌:
要求封口松紧适宜,系活扣,便于接种操作;培养基应及时灭菌,防止变质。
三 培养基的筛选新实验体系的建立首要任务是适合的培养基的选择。
1、无机成分:
目前可利用的不同配方的基本培养基有许多。
如:
MS是广谱性培养基;N6用于单子叶植物的离体培养;B5用于豆科植物起始培养。
2、有机成分:
其添加主要根据培养类型考虑
3、生长调节剂:
细胞分裂素和生长素配比原则很重要,其使用种类和浓度是一个新培养体系建立时必须进行试验筛选的内容。
筛选方法有单因子试验、多因子试验和广谱实验法等。
思考题:
1、培养基的成分包括哪几类?
2、培养基的种类及特点?
3、在培养基成分中什么决定着外植体发育方向?
4、如何筛选适合的培养基?
第三章植物细胞全能性与器官发生
一、植物细胞全能性
概念:
植物体每个正常细胞都含有该植物的全部遗传信息,在适宜的条件下如同受精卵一样,具有发育成完整植株的潜在能力。
植物细胞按分裂能力分为3类(参照动物细胞分类类型):
①周期细胞:
始终保持分裂能力,从一个周期进入另一个周期,包括茎尖、根尖及形成层细胞。
②终端分化细胞:
永久失去分裂能力的细胞,包括筛管导管、气孔保卫细胞等特化细胞。
③Go细胞:
一般不分裂,但当受到外界刺激时可重新启动分裂,包括表皮细胞及薄壁细胞。
★一个植物细胞向分生状态回复过程所能进行的程度,取决于它的分化程度。
2、植物细胞全能性的表达
(一)植物细胞全能性表达基本条件:
1、植物细胞脱离母体;2、植物激素的调控
(二)植物细胞全能性的表达过程:
离体培养条件下,植物细胞全能性的表达的是通过植物细胞的脱分化与再分化实现的。
(1)植物生长素的作用:
启动细胞分裂
(2)植物细胞分裂素的作用:
使已脱分化的细胞持续有丝分裂
1、植物细胞的脱分化
(1)细胞分化:
指由于细胞分工而导致细胞形成不同结构,引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
(2)细胞脱分化:
培养条件下使一个已分化的细胞失去已分化细胞的典型特征,或消除了细胞分工,使之回复到分生细胞状态或胚性细胞状态的过程。
或具有特异结构和功能的细胞转化成没有特异结构和功能的细胞的过程。
★静止细胞(G0细胞)启动分裂是分化细胞成功脱分化的重要标志。
愈伤组织形成过程:
从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三个时期:
诱导期、分裂期和分化期。
三个时期愈伤组织的代谢状况、结构以及细胞的平均大小都有明显的差别。
Stage1.Induction(诱导期):
诱导期是细胞准备分裂的时期,是愈伤组织形成起点。
外植体细胞在完整植株中随着细胞的分化过程而逐渐停止分裂,开始执行它们各自不同的功能。
外植体细胞一般处于静止状态,称为静止细胞。
※特点:
在诱导期,代谢活化了,细胞内的合成代谢迅速进行,但细胞的大小仍然和外植体时一样,没有多大改变。
※诱导期的长短:
由一系列内部(植物的种类、生理状况)和外部(光照、外源激素)因素决定。
例如菊芋的诱导期有时还不需要1天,胡萝卜则要好几天。
Stage2.Celldivision(分裂期):
细胞从开始分裂到持续分裂的时期
外植体(explant)中已分化的活细胞在外源激素的作用下,外植体外层细胞出现了分裂,由于外层细胞的迅速分裂使得这些细胞的体积缩小,逐渐回复到分生组织状态。
在回复过程时,细胞通过脱分化的诱导期而进入分裂,并开始形成愈伤组织。
特征:
生理生化上分裂期的一个明显特征是外层细胞进行分裂,而中间的细胞不分裂。
另外还有细胞数目增加,体积变小;细胞核和核仁增到最大等
愈伤组织〔callus〕植物离体培养过程中脱分化后的细胞,经过细胞分裂,产生的无组织结构、无明显极性、松散的细胞团称为愈伤组织。
多在外植体切面上产生
愈伤组织的特征:
细胞分裂快,结构疏散,缺少有组织的结构,颜色浅而透明。
成功地脱分化将导致细胞分裂,形成愈伤组织或胚性细胞团。
Stage3.Differentiation(分化期):
从愈伤组织形成到器官发生
※特点:
分化结构的形成过程加速。
外层细胞的分裂逐渐减慢,甚至停止。
在这时期中细胞的伸展和分裂处于平衡,因此细胞的平均大小往往没有变化。
根据形态变化列出三个时期,实际上它们并不是严格的,特别是分裂期和分化期。
愈伤组织的特点:
生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色,有光泽;也有浅绿色或绿色;而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。
(3)愈伤组织的生长:
脱分化导致结果
细胞―→具备了分裂能力―→细胞不断增殖―→愈伤组织生长
愈伤组织并非无限制生长,到一定时期便会停止分裂。
但如果把处在旺盛生长且未分化的愈伤组织切成小块进行继代培养,可维持其活跃生长状态。
利用此特点,进行继代培养,可大量增殖。
(4)脱分化影响因素:
外因营养条件:
无机盐混合物类有机物类植物激素类天然复合物类
影响因子环境条件:
渗透压酸碱度湿度温度光照
内因:
遗传性生理状态
A.植物种类、组织和细胞状态有关:
单子叶植物和裸子植物比双子叶植物难;木本植物比草本植物难;成年植物组织和细胞比幼年组织和细胞难;
B.植物激素
C.光照
2、植物细胞的再分化〔redifferentiation〕
(1)细胞再分化:
脱分化后无序生长的分生细胞在离体培养下,重新恢复细胞分化能力,经过细胞分化、组织分化和器官分化递进地进行,最后再生完整植株。
(2)极性与细胞分化
极性:
植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。
极性一旦建立,在一般情况下不可逆转。
通常细胞的不均等分裂是细胞极性建立的标志(即细胞分化的标志)。
(3)TE细胞分化
管状分子(trachearyelements,TEs)在维管系统的形成中具有中心作用。
在离体培养条件下,TEs则由愈伤组织薄壁细胞分化形成,这是愈伤组织细胞分化器官的前提。
离体培养中常把TE细胞的出现作为组织分化的标志。
(4)组织分化
在细胞分化的基础上,可以分化出各种各样的组织。
其中,拟分生组织和维管组织是两种重要的组织。
是形成不定芽和不定根的基础。
拟分生组织:
是脱分化后的培养物发生一系列细胞分裂而产生的一团小型、薄壁、液泡小的类似分生组织的细胞群。
也叫做生长中心或分生组织结节。
维管组织:
一个区域的愈伤组织转化为韧皮分子和木质分子的混合结构(类似形成层)
这种形成层状的细胞向外延伸与拟分生组织连接,形成芽原基或根原基。
(5)植物细胞经再分化形成植株有2条途径:
器官发生
植物离体材料 体细胞胚胎发生 再生植株
3、器官发生
植物的离体器官发生:
培养条件下的组织或细胞团(愈伤组织)分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
细胞分裂再分化
植物组织――→愈伤组织――→芽――→ 根――→植株
(一)、离体培养中器官发生的方式
通过器官发生形成再生植株大体上有3种方式:
①先芽后根:
是应该选择的方式.②先根后芽③根芽同长
(二)、器官发生过程:
根据培养材料起始材料的不同可分成两类:
1、经过愈伤组织的器官发生2、不经过愈伤组织的器官发生
1、经过愈
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