常用动物基本操作.docx
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常用动物基本操作.docx
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常用动物基本操作
实验一常用动物基本操作
【目的】学习大、小白鼠捉拿、给药和取血方法。
【器材】1ml和5ml注射器,灌胃针头,胃管,注射针头(4号、5号和6号),天平,电子秤,磅秤,小鼠固定筒,大鼠固定筒,家兔固定箱,兔开口器,75%酒精棉球,试管数根,剪刀,小镊子,止血钳,帆布手套,动脉夹,结扎线,硅胶管。
【药品】生理盐水,20%碳素墨水或伊文氏兰,2%戊巴比妥钠。
【动物】小白鼠4只,体重18~22g,雌雄各半;大白鼠1只,体重180~220g,雌雄各半;家兔1只,2~3kg,雌雄各半。
【方法】
1.捉拿方法
2.标记方法
3.性别鉴定
4.不同途径给药方法
经口灌胃
腹腔注射
皮下注射
肌肉注射
尾静脉注射
5.取血方法
小白鼠眶动脉或眶静脉取血
小白鼠断头取血
大白鼠尾尖取血
大白鼠颈静脉或颈动脉取血
家兔心脏取血
家兔耳缘静脉取血
6.小白鼠处死方法
实验二不同给药途径对药物作用的影响
【目的】观察不同给药途径对药物作用的影响。
【器材】1ml注射器,灌胃针头,天平。
【药品】15%硫酸镁,0.5%戊巴比妥钠。
【动物】小白鼠。
【方法】
1.硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响
取体重接近的小白鼠2只,称重并标记,1号鼠腹腔注射10%硫酸镁溶液0.2ml/10g(3.0g/kg),2号鼠口服(灌胃)同样剂量的硫酸镁溶液。
置于笼中,观察两鼠的表现,并记录结果。
【结果】将所观察的实验结果填入下表:
表5-1硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响
鼠号
体重(g)
药量(ml)
给药途径
给药前表现
给药后表现
1
2
2.戊巴比妥钠不同给药途径对药物作用的影响
取体重接近的小白鼠3只,称重并标记,观察正常活动情况及翻正反射,然后用0.5%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g,分别从不同的途径(灌胃、皮下注射和腹腔注射)给药,观察三只小白鼠入睡时间及觉醒时间。
【结果】将所观察的实验结果填入下表:
表5-2戊巴比妥钠不同给药途径对小鼠睡眠的影响
鼠号
体重(g)
药量(ml)
给药途径
给药时间
入睡时间
觉醒时间
1
2
3
【思考题】以硫酸镁和戊巴比妥钠为例,同一药物以不同给药途径给予对药物作用会产生哪些不同影响?
实验三有机磷农药中毒及其解救
【目的】学习家兔灌胃技术,观察并分析有机磷农药的中毒症状和机理。
观察阿托品和碘解磷定对有机磷农药的解救作用。
【器材】2ml、5ml注射器,测瞳尺,50ml烧杯,滤纸,磅秤。
【药品】5%敌百虫酒精溶液,0.2%硫酸阿托品溶液,2.5%碘解磷定溶液,1%肝素溶液。
【动物】家兔2-2.5kg。
【方法】
1、取禁食12h的家兔一只,称重,观察并记录其正常活动,包括一般活动、呼吸(频率、幅度、节律是否均匀)、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等。
2、i.p.5%敌百虫酒精溶液5ml/kg,随时观察并记录给药后上述指标的变化情况。
待中毒症状明显后,经耳缘静脉注射0.2%硫酸阿托品1ml/kg,观察中毒症状解除情况。
5min后再从耳缘静脉注射2.5%碘解磷定2ml/kg,再观察残存中毒症状的解除情况。
【结果】将实验结果填入下表。
家兔敌百虫中毒表现及药物的解毒作用
观察项目
用药前
5%敌百虫
0.2%阿托品
2.5%解磷定
一般情况
瞳孔大小
唾液分泌情况
呼吸频率、幅度、节律
大小便情况
肌肉震颤
【注意事项】
1.有机磷农药为剧毒药,本实验过程中如皮肤等接触到农药,应立即用自来水冲洗,不能用肥皂水冲洗。
2.本实验为分析阿托品和碘解磷定的解救机制而设计,临床上需将两药合用才能获得最好的效果,为此,实验结束时,应分别补充注射碘解磷定和阿托品,以防家兔死亡。
【思考题】
1、根据本次实验的结果,分析有机磷农药的中毒机制是什么?
2、有机磷农药中毒可出现哪些症状?
哪些症状可用阿托品对抗,而哪些不能?
3、阿托品和碘解磷定合用解救有机磷农药中毒的作用原理是什么?
实验四药物的镇痛作用
(一)化学刺激,扭体法
【目的】学习镇痛实验化学刺激法,观察阿司匹林、吗啡(或哌替啶)的镇痛作用。
【原理】小鼠腹腔注射化学刺激剂(如酒石酸锑钾、醋酸溶液等)可诱导疼痛,动物表现出特征性的躯体伸缩行为称之为扭体反应(表现为腹部收缩内陷、躯干扭曲与后腿伸展及蠕行等)。
镇痛药物可以抑制这种反应。
将给药组与对照组相比,若使扭体反应发生率减少50%以上的,可认为有镇痛作用。
【器材】鼠笼,小动物电子秤(或天平),注射器,秒表。
【药品】0.1%盐酸吗啡或0.4%盐酸哌替啶,1%阿司匹林,0.6%冰醋酸(或1%酒石酸锑钾),生理盐水。
【动物】小鼠,体重18~22g。
【方法】取小鼠6只,称重,均分为3组,分别为吗啡组、阿司匹林组和生理盐水组。
观察每组动物的正常活动情况,1组小鼠腹腔注射0.1%吗啡0.1ml/10g,2组腹腔注射1%阿司匹林0.1ml/10g,3组注射等容量的生理盐水。
30min后,三组小鼠分别腹腔注射0.6%醋酸(或1%酒石酸锑钾)0.1ml/10g,观察20min内各组出现扭体反应动物数及其平均扭体次数。
汇总各组实验结果,记于下表内,并依照下列公式计算药物镇痛百分率或抑制百分率。
【结果】
药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
分组
动物数(n)
发生反应动物数(%)
扭体次数(次)
吗啡组
阿司匹林组
生理盐水组
【注意事项】
1.酒石酸锑钾溶液或冰醋酸溶液应临时配制,放置过久,其作用明显减弱。
2.致痛剂腹腔注射的部位和操作技术应力求一致。
3.将给药组与对照组相比,若药物使小鼠扭体反应发生率减少50%以上的,才能认为其有镇痛作用。
(二)热板法(选作)
【目的】学习镇痛实验热板法,观察阿司匹林、吗啡(或哌替啶)的镇痛作用。
【原理】把小鼠放在事先加热至55℃±0.5℃的热板测痛仪的金属板上,以舔后足作为“疼痛”反应指标。
观察给药前、后痛阈值的变化。
【器材】鼠笼,小动物电子秤(或天平),小鼠热板测痛仪,注射器,秒表。
【药品】0.1%盐酸吗啡或0.4%盐酸哌替啶,1%阿司匹林,0.6%冰醋酸(或1%酒石酸锑钾),生理盐水。
【动物】小鼠,雌性,体重18~22g。
【方法】把小鼠放在事先加热至55℃±0.5℃的热板测痛仪的金属板上,热板作为热刺激,用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(S)作为该鼠的痛阈值。
给药前先测定每只小鼠的痛阈值(共测定两次,以平均值不超过30s者为合格)。
取合格小鼠6只,称重,均分为3组,分别为吗啡组、阿司匹林组和生理盐水组。
1组小鼠腹腔注射0.1%吗啡0.1ml/10g,2组腹腔注射1%阿司匹林0.1ml/10g,3组注射等容量的生理盐水。
30min后,三组小鼠分别腹腔注射0.6%醋酸(或1%酒石酸锑钾)0.1ml/10g,给药后,每隔1/2~1h测定一次痛阈值,连续数次,如痛阈值超过60s,即停止测试而按60s计。
汇总各组实验结果,记于下表内,按所测之痛阈平均值并依照下列公式计算药物对小鼠的痛阈提高百分率。
=×100%
以时间为横坐标,痛阈提高百分率为纵坐标,绘出镇痛作用时程曲线,以分析药物的作用强度,开始作用时间和持续时间。
【结果】
药物对小鼠痛阈值的影响
分组
动物数(n)
平均痛阈值(s)
痛阈提高
百分率(%)
用药前用药后
吗啡组
阿司匹林组
生理盐水组
【注意事项】
1.动物体重对结果有影响,小鼠体重以18~22g为宜。
2.小鼠个体差异大,应挑选痛阈值在5~30s以内者为合格,不到5s或超过30s或喜跳跃者均剔除。
3.小鼠以雌性为好,雄性因为阴囊受热后易松弛,与热板接触而致反应过敏。
4.室温对实验有影响,过低小鼠反应迟钝,过高则敏感,易引起跳跃。
13~18℃范围内,小鼠反应波动较小。
【思考题】
1.阐述吗啡镇痛作用的机制及其用途。
2.比较阿司匹林与吗啡在镇痛作用上的异同点?
实验五药物的体内抗凝血作用
【目的】观察肝素和双香豆素对小鼠内凝血时间的影响。
【原理】肝素可通过广泛地干扰体内凝血过程,发挥强大的体内、体外抗凝血作用。
双香豆素能竞争性地拮抗维生素K的作用,抑制凝血因子II、VII、IX、X的合成,具有缓慢而持久的体内抗凝血作用。
【器材】鼠笼,小动物电子秤(或天平),注射器,小鼠灌胃器,秒表,毛细玻管,玻片,针头,棉球。
【药品】50U/ml肝素溶液,2mg/ml双香豆素溶液,生理盐水。
【动物】小鼠,体重18~22g。
【方法】
取小鼠6只,称重,均分为3组,分别为双香豆素组、肝素组和生理盐水组。
1组小鼠于实验前2天以2mg/ml双香豆素溶液0.2ml/10g灌胃,早晚各一次,共5次。
2组于实验前以50U/ml肝素溶液0.2ml/10g腹腔注射。
3组以等容积的生理盐水灌胃。
20min后,测定凝血时间。
1、毛细玻管法:
左手固定小鼠,右手持毛细玻管,刺入小鼠眼内眦部,使血液注满玻管后迅速拔出,并启动秒表。
以且每隔20s折断玻管0.5-1.0cm,并轻轻向左右拉开,观察到有血丝出现时,即为小鼠的毛细玻管法凝血时间。
2、玻片法:
左手固定小鼠,右手持眼科弯头镊子摘除一侧眼球,迅速将血滴于清洁干燥的玻片上,同时启动秒表。
以后每隔10s用干燥的针头挑动血滴一次,直至针头能挑出纤维蛋白丝为止,即为玻片法凝血时间。
【结果】
汇总各组实验结果,记于下表内,并进行t检验。
药物对小鼠凝血时间的影响
组别
药物
凝血时间(t)
毛细玻管法
玻片法
1
双香豆素
2
肝素
3
生理盐水
【注意事项】
1.凝血时间可受室温影响,温度过低时凝血时间延长。
本实验最好在15℃左右。
2.每次针挑血滴时不应从各个方向多次挑动,以免影响纤维蛋白形成。
3.毛细玻管采血后不宜长时间拿在手中,以免体温影响凝血时间。
实验六 糖皮质激素的抗炎作用
【目的】观察地塞米松的抗炎性水肿作用。
【原理】二甲苯为致炎物质,将其涂于耳部,能引起局部细胞损伤,促进组胺、缓激肽等致炎物质释放,造成耳部急性炎性水肿,由于毛细血管通透性增加,致使小鼠耳部增厚,根据两耳厚度的不同,可以判断药物的抗炎作用。
【器材】鼠笼,小动物电子秤(或天平),注射器,滴管,螺旋测微尺。
【药品】5mg/ml醋酸地塞米松溶液,二甲苯,生理盐水。
【动物】小鼠,体重18~22g。
【方法】
1、每组取小鼠2只,称重并做标记。
甲鼠腹腔注射5mg/ml醋酸地塞米松溶液0.1ml/10g,乙鼠腹腔注射等容量的生理盐水。
2、30min后,两只小鼠均于左耳廓上滴加2滴二甲苯,涂匀。
3、2h后用螺旋测微尺测两耳的厚度,将其厚度差作为炎症反应的强度。
【结果】
汇总各组实验结果,记于下表内,并进行t检验。
地塞米松对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
组别
药物
耳廓厚度
左耳
右耳
差值
地塞米松
生理盐水
【注意事项】
1.二甲苯滴加量应尽量一致。
2.螺旋测微尺测两耳的厚度时部位要一致。
实验七传出神经系统药物对麻醉家兔血压的影响
【目的】学习急性麻醉动物血压实验的装置和方法,观察传出神经系统药物对其血压的影响,加深对这类药物相互作用关系的理解。
【原理】传出神经系统中的植物神经系统有以乙酰胆碱为递质的副交感神经系统和以去甲肾上腺素为递质的交感神经系统,它们相互作用,相互对抗,维持机体的生理机能平衡。
药物影响副交感神经系统和交感神经系统的作用部位主要是递质和受体。
通过相应受体的激动剂和拮抗剂对动物血压的影响,间接地定性分析不同组织、不同部位受体的类型和功能。
【要求】掌握血压的记录方法和传出神经系统药物对血压的作用
【实验材料】手术台,手术器械,多道生理记录仪,电脑系统,三通管压力换能器,输液滴定管,1ml、5ml注射器,测瞳尺,50ml烧杯,滤纸,磅秤。
【药品】生理盐水,3%戊巴比妥溶液,肝素注射液,实验所需药物见方法部分。
【动物】家兔2~3kg,雌雄不限。
【方法和步骤】
(一)取家兔一只,称重,前肢皮下静脉注射3%戊巴比妥30mg/kg(即1ml)使之麻醉,背位固定于手术台上。
(二)手术
1.颈部剪去颈部的毛,正中切开颈部皮肤,分离气管,在气管上做一T型切口,插入气管插管,结扎固定。
分离一侧颈总动脉,插入与压力换能器相连的动脉插管(内充满肝素溶液),打开动脉夹,将电脑系统调试好以后,记录正常血压。
2、腹股沟在任一侧的腹股沟部位,用手触得股动脉搏动处,剪去毛,纵切皮肤3~4cm,分离出股静脉,结扎远心端,向近心端插入与输液相连的静脉插管,检查静脉插管是否畅通。
(三)实验软件设置
打开电脑,点击菜单“实验/药理学实验”,选择“药物对兔血压的作用”。
(三)观察项目
1.描记正常血压曲线,观察收缩压和舒张压的变化及血压的呼吸波。
2.依次注射下述药物,每次给药后立即由输液管滴入生理盐水2ml,将药物冲入静脉,观察平均动脉压变化情况及脉压差的变化。
待上述情况恢复正常或平稳后,再给下一药物。
(1)观察拟肾上腺素药对血压的影响
①盐酸肾上腺素10µg/kg(10-4溶液0.1ml)。
②重酒石酸去甲肾上腺素10µg/kg(10-4溶液0.1ml)。
③盐酸异丙肾上腺素50µg/kg(5×10-4溶液0.1ml)。
(2)观察α受体阻断药对拟肾上腺素药作用的影响
①盐酸妥拉苏林5mg/kg(2.5×10-2溶液0.2ml)。
②重复
(1)—①。
③重复
(1)—②。
④重复
(1)—③。
(3)观察β受体阻断药对拟肾上腺素药作用的影响
①普乃洛尔0.1mg/kg(2.5×10-3溶液0.1ml)。
②重复
(1)—①。
③重复
(1)—②。
④重复
(1)—③。
(4)观察拟胆碱药对血压的影响及M—受体阻断药对拟胆碱药作用的影响
①硝酸匹鲁卡品0.1mg/kg(10-3溶液0.1ml)。
②氯化乙酰胆碱1.0µg/kg(10-5溶液0.1ml)。
③水杨酸毒扁豆碱0.2mg/kg(2×10-3溶液0.1ml)。
④重复(4)—②。
⑤硫酸阿托品0.5mg/kg(5×10-3溶液0.1ml)。
⑥重复(4)—②。
⑦氯化乙酰胆碱10µg/kg(10-4溶液0.1ml)。
复制血压曲线,标明血压值,所给药物的名称和剂量,分析各药的相互作用,解释给药前后出现的各种生理现象的变化,记录实验结果。
五、注意事项
颈部手术部位不宜靠近甲状腺部位,否则易出血,切勿损伤颈部迷走神经和交感神经。
【结果】将实验结果填入下表。
传出神经系统药物对麻醉家兔血压的影响
药物(浓度)
剂量
血压(mmHg)
用药前
用药前
肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
去甲肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
异丙肾上腺素5×10-420µg/kg(0.1ml)
妥拉苏林2.5×10-4
25mg/kg(0.2ml)
肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
去甲肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
异丙肾上腺素5×10-4
20µg/kg(0.1ml)
普萘洛尔10-3
0.1mg/kg(0.1ml)
肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
去甲肾上腺素10-4
10µg/kg(0.1ml)
异丙肾上腺素5×10-4
20µg/kg(0.1ml)
毛果芸香碱10-3
0.1mg/kg(0.1ml)
乙酰胆碱10-5
1.0µg/kg(0.1ml)
毒扁豆碱2×10-3
0.2mg/kg(0.1ml)
乙酰胆碱10-5
1.0µg/kg(0.1ml)
阿托品5×10-3
0.5mg/kg(0.1ml)
乙酰胆碱10-5
1.0µg/kg(0.1ml)
乙酰胆碱10-4
10µg/kg(0.1ml)
【思考题】
1、试讨论肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素对心血管作用的异同点。
2、本实验中怎样验证乙酰胆碱的M样作用和N样作用?
3、本实验的结果能否充分说明毒扁豆碱对胆碱酯酶的抑制作用?
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