酮体的生成实验报告.docx
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酮体的生成实验报告.docx
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酮体的生成实验报告
酮体的生成实验报告
篇一:
11实验十一酮体的生成和利用
实验十一酮体的生成和利用
【实验目的】
了解酮体的生成部位及掌握测定酮体生成与利用的方法。
【实验原理】
在肝脏线粒体中,脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。
酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。
肝脏不能利用酮体,只有在肝外组织,尤其是心脏和骨骼肌中,酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。
本实验以丁酸为基质,与肝匀浆一起保温,然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。
另外,在肝脏和肌肉组织共存的情况下,再测定酮体的生成量。
在这两种不同条件下,由酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。
本实验主要测定的是丙酮的含量。
酮体测定的原理:
在碱性溶液中碘可将丙酮氧化成为碘仿。
以硫代硫酸钠滴定剩余的碘,可以计算所消耗的碘,由此也就可以计算出酮体(以丙酮为代表)的含量。
反应式如下:
CH3COCH3十3I2十4NaOHCHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O
I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI
【实验材料】
1.实验器材
试管;移液管;锥形瓶;滴定管及架。
2.实验试剂
(1)0.1%淀粉液。
(2)0.9%NaCl溶液。
(3)15%三氯乙酸。
(4)10%NaOH溶液。
(5)10%HCl溶液。
(6)0.5mol/L丁酸溶液:
取5ml丁酸溶于100ml0.5mol/LNaOH中。
(7)0.1mol/L碘液:
I212.5g和KI25g加水溶解,稀释至刻度1L,用0.1mol/LNa2S2O3
标定。
(8)0.02mol/LNa2S2O3:
24.82gNa2S2O3·5H2O和400mg无水Na2CO3溶于1L刚煮沸的
水中,配成0.1mol/L溶液,用0.1mol/LKIO3标定。
临用时将标定Na2S2O3溶液稀释成0.02mol/L。
【实验操作】
1.标本的制备:
将兔致死,取出肝脏,用0.9%NaCl洗去污血,放滤纸上,吸去表面的水分,称取肝组织5g置研钵中,加少许0.9%NaCl至总体积为10ml,制成肝组织匀浆。
另外再取后腿肌肉5g,按上述方法和比例,制成肌组织匀浆。
2.保温和沉淀蛋白质:
取试管3只,编号,按下表操作:
摇匀后,用滤纸过滤,将滤液分别收集在3支试管中,为无蛋白滤液。
3.酮体的测定
摇匀,静置10分钟,向各管中加入10%HCl3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色,分别用0.02mol/LNa2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。
【实验结果与计算】
肝脏生成的酮体量(mmol/g)=(C-A)×Na2S2O3的摩尔数×1/6肌肉利用的酮体量(mmol/g)=(C-B)×Na2S2O3的摩尔数×1/6
A:
滴定样品1消耗的Na2S2O3ml数。
B:
滴定样品2消耗的Na2S2O3ml数。
C:
滴定样品3消耗的Na2S2O3ml数。
【思考题】
为什么只有在肝外组织,酮体才可以被氧化利用?
Experiment11ProductionandDegradationofKetoneBodies
【Purpose】
Understandtheproductionorgansandmasterthemethodusedforproductionanddegradationofketonebodiesmeasurement.
【Principle】
Withinthemitochondriaofliver,theexcessacetyl-CoAproducedduringfattyacidβ-oxidationisconvertedtoacetoacetate,β-hydroxybutyrate,andacetone,thisgroupofmoleculesiscalledtheketonebodies.Livercannotuseketonebodiesasanenergysource.Onlyinseveraltissuesoutofliver,mostnotablycardiacandskeletalmuscle,ketonebodiesareconvertedtoacetyl-CoA,theacetyl-CoAisthenoxidatedtogenerateenergy.
Weusebutyricacidasinitialstuffinthisexperiment,thebutyricacidisheatedwiththeliverplasm,andthenmeasurethecontentofketonebodiesinliverplasm.Moreover,measurethecontentofketonebodiesundertheconditionofcoexistenceofliverplasmandskeletalmuscleinreactionsystem.Wecancomprehendtheabovetheoriesfromthedifferenceoftheketonebodiescontentunderthetwodifferentconditions.Wedeterminethecontentofacetoneinthisexperiment.
Theketonebodiesmeasurementprincipleisshownbelow:
Inalkalineaquatheiodinecanoxidizeacetonetobecomeiodoform,titratetheremainderiodineinthereactionsystemwithhyposulphite,wecancalculatetheconsumptionofiodineaccordingtotheresultofhyposulphitetitration,wecanalsocalculatethecontentofketonebodies(takeacetoneastorepresent)accordingtothetitrationresult.TheequationofReactionisasfollows:
CH3COCH3十3I2十CHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O
I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI
【Materials】
1.Apparatus:
Tubes,Pipets,FlasksBurettesandburettesupport.2.Reagents:
(1)0.1%aquaofstarch.
(2)0.9%aquaofNaCl.
(3)15%trichlorineaceticacid.(4)10%aquaofNaOH.(5)10%aquaofHCl.
(6)0.5mol/Lbutyricacid:
Dissolve5mlbutyricacidin100ml0.5mol/LNaOH.
⑺0.1mol/Laquaofiodine:
DissolveI212.5gandKI25gindistilledwater,dilutethesolutionto1L,demarcatethesolutionwith0.1mol/LNa2S2O3.
⑻0.02mol/LNa2S2O3:
Dissolve24.82gNa2S2O3·5H2Oand400mganhydrousNa2CO3in1Lfreshboiledwatertoget0.1mol/Lsolution,demarcatethesolutionwith0.1mol/LKIO3.Dilutethesolutionto0.02mol/Ljustbeforeusing.
【Procedures】
1.Preparationofthespecimen:
Executetherabbit,takeouttheliver,scouroffthebloodwith0.9%NaCl,puttheliveron
filterpapertosuckawaythesurfacehumidity,weigh5goftheliverorganize,placeitintothemortar,addafew0.9%NaCltototalvolume10ml.Thentake5gmuscleofrearleg,makeitintotheliverorganizationplasmaccordingtoabove-mentionedmethodandcomparisons.
2.Heatpreservationandprecipitationoftheprotein:
Takethreetubes,numberthetubesandoperateasthetablefollowed:
Filterwiththefilterpaper
aftershakingevenly,collectthefiltraterespectivelyin3tubes,thenwegetthefiltratewithoutprotein.
3.Dete
rminationoftheketonebodies
PlaceStaticallyfor10minutesaftershakingevenly,add10%HCl3mltoeachtube,andaddonedropof1%starchliquidtoeachtube,thenwecanseethesolutionpresentsthecoloroforchid,titratewith0.02mol/LNa2S2O3untilthesolutionpresentsthecolorofbrightgreenrespectively.【Resultandcalculation】
Ketonebodiesproducedinliver(mmol/g)=(C-A)×MoorecontentoftheNa2S2O3×1/6Ketonebodiesconsumedinmuscle(mmol/g)=(C-B)×MoorecontentoftheNa2S2O3×1/6
A:
volumeoftheNa2S2O3(ml)consumedduringtitrationofsample1B:
volumeoftheNa2S2O3(ml)consumedduringtitrationofsample2C:
volumeoftheNa2S2O3(ml)consumedduringtitrationofsample3
【Advisementafterexperiment】
Ketonebodiesareoxidatedtogenerateenergyonlyinseveraltissuesoutofliver.Why?
篇二:
生物化学实验报告
生物化学实验报告
供检验护理
专业使用
班级
姓名
郑州大学护理学
院
实验一血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
[目的][原理]
[仪器组成]
[操作与结果]
[结果粘贴]
实验二酶的特异性
[目的][原理]
[操作与结果]
将以上1、2、3号试管置于37℃水浴箱保温10分钟。
然后向各管中加班氏试剂20滴,沸水中煮沸10分钟,取出勿振摇试管,观察结果并记录。
[分析]三管结果及原因。
实验三温度、pH、激活剂、抑制剂
对酶反应的影响
[目的][原理]
[操作与结果]
(一)温度对酶反应的影响
[分析各管的颜色变化原因]
(二)pH对酶反应的影响
[分析各管的颜色变化原因]
篇三:
酮体生成和利用的生理意义
1酮体生成和利用的生理意义。
(1)酮体是脂酸在肝内正常的中间代谢产物,是甘输出能源的一种形式;
(2)酮体是肌肉尤其是脑的重要能源。
酮体分子小,易溶于水,容易透过血脑屏障。
体内糖供应不足(血糖降低)时,大脑不能氧化脂肪酸,这时酮体是脑的主要能源物质。
2试述乙酰CoA在脂质代谢中的作用.
在机体脂质代谢中,乙酰CoA主要来自脂肪酸的β氧化,也可来自甘油的氧化分解;乙酰CoA在肝中可被转化为酮体向肝外运送,也可作为脂肪酸生物合成及细胞胆固醇合成的基本原料。
3试述人体胆固醇的来源与去路?
来源:
⑴从食物中摄取⑵机体细胞自身合成去路:
⑴在肝脏可转换成胆汁酸⑵在性腺,肾上腺皮质可以转化为类固醇激素⑶在欺负可以转化为维生素D3⑷用于构成细胞膜⑸酯化成胆固醇酯,储存在细胞液中⑹经胆汁直接排除肠腔,随粪便排除体外。
4什么是血浆脂蛋白?
试述血浆脂蛋白的分类,来源及生理功能?
血浆脂蛋白是脂质与载脂蛋白结合形成球形复合体,是血浆脂蛋白的运输和代谢形式。
.血浆脂蛋白的分类方法有两种:
1电泳法:
可敬脂蛋白分为乳糜微粒(CM)β-脂蛋白,前-β脂蛋白和α脂蛋白四类2超速离心法:
可将脂蛋白分为乳糜微粒(CM),极低密度脂蛋白(VLDL),低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)四类,分别相当于电泳分离的CM、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和α-脂蛋白四类。
各种血浆脂蛋白的来源主要生理功能如下:
①CM由小肠黏膜细胞合成,功能是转运外源性甘油三酯和胆固醇;②VLDL由肝细胞合成、分泌,功能是转运内源性甘油三酯和胆固醇;③LDL由VLDL在血浆中转化而来,功能是转运内源性胆固醇,即将胆固醇由肝转运至肝外组织;④HDL主要由肝细胞合成、分泌,功能是逆向转运胆固醇,即将胆固醇由肝外组织转运到肝。
1、酶的催化作用有何特点?
①具有极高的催化效率,如酶的催化效率可比一般的催化剂高108~1020倍;②具有高度特异性:
即酶对其所催化的底物具有严格的选择性,包括:
绝对特异性、相对特异性、立体异构特异性;③酶促反应的可调节性:
酶促反应受多种因素的调控,以适应机体不断变化的内外环境和生命活动的需要。
2、距离说明酶的三种特异性(定义、分类、举例)。
一种酶仅作用于一种或一种化合物,或一定化学键,催化一定的化学反应,产生一定的产物,这种现象称为酶作用的特异性或专一性。
根据其选择底物严格程度不同,分为三类:
①绝对特异性:
一种酶只能作用于一种专一的化学反应,生成一种特定结构的产物,称为绝对特异性.如:
脲酶仅能催化尿素水解产生CO2和NH3,对其它底物不起作用;②相对特异性:
一种酶作用于一类化合物或一种化学键,催化一类化学反应,对底物不太严格的选择性,称为相对特异性。
如各种水解酶类属于相对特异性;举例:
磷酸酶对一般的磷酸酯键都有水解作用,既可水解甘油与磷酸形成的酯键,也可水解酚与磷酸形成的酯键;③立体异构特异性:
对底物的立体
构型有要求,是一种严格的特异性。
作用于不对称碳原子产生的立体异构体;或只作用于某种旋光异构体(D-型或L-型其中一种),如乳酸脱氢酶仅催化L-型乳酸脱氢,不作用于D-乳酸等。
4、简述Km与Vm的意义。
⑴Km等于当V=Vm/2时的[S]。
⑵Km的意义:
①Km值是酶的特征性常数——代表酶对底物的催化效率。
当[S]相同时,Km小——V大;②Km值可近似表示酶与底物的亲和力:
1/Km大,亲和力大;1/Km小,亲和力小;③可用以判断酶的天然底物:
Km最小者为该酶的天然底物。
⑶Vm的意义:
Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率,与酶浓度成正比。
5、温度对酶促反应有何影响。
(1)温度升高对V的双重影响:
①与一般化学反应一样,温度升高可增加反应分子的碰撞机会,使V增大;②温度升高可加速酶变性失活,使酶促反应V变小
(2)温度对V影响的表现:
①温度较低时,V随温度升高而增大(低温时由于活化分子数目减少,反应速度降低,但温度升高时,酶活性又可恢复)②达到某一温度时,V最大。
使酶促反应V达到最大时的反应温度称为酶的最适反应温度(酶的最适温度不是酶的特征性常数)③反应温度达到或超过最适温度后,随着反应温度的升高,酶蛋白变性,V下降。
6、竞争性抑制作用的特点是什么?
(1)竞争性抑制剂与酶的底物结构相似
(2)抑制剂与底物相互竞争与酶的活性中心结合(3)抑制剂浓度越大,则抑制作用越大,但增加底物浓度可使抑制程度减小甚至消除(4)动力学参数:
Km值增大,Vm值不变。
7、说明酶原与酶原激活的意义。
(1)有些酶(绝大多数蛋白酶)在细胞内合成或初分泌时没有活性,这些无活性的酶的前身物称为酶原。
酶原激活是指酶原在一定条件下转化为有活性的酶的过程。
酶原激活的机制:
酶原分子内肽链一处或多处断裂,弃去多余的肽段,构象变化,活性中心形成,从而使酶原激活。
(2)酶原激活的意义:
①消化道内蛋白酶以酶原形式分泌,保护消化器官自身不受酶的水解(如胰蛋白酶),保证酶在特定部位或环境发挥催化作用;②酶原可以视为酶的贮存形式(如凝血酶和纤维蛋白溶解酶),一旦需要转化为有活性的酶,发挥其对机体的保护作用。
什么叫同工酶?
有何临床意义?
(1)同工酶是指催化的化学反应相同,而酶蛋白的分子结构、理化性质及免疫学性质不同的一组酶下称为同工酶。
(2)其临床意义:
①属同工酶的几种酶由于催化活性有差异及体内分布不同,有利于体内代谢的协调。
②同工酶的检测有助于对某些疾病的诊断及鉴别诊断.当某组织病变时,可能有特殊的同工酶释放出来,使该同工酶活性升高。
如:
冠心病等引起的心肌受损患者血清中LDH1和LDH2增高,LDH1大于LDH2;肝细胞受损患者血清中LDH5含量增高。
1、简述糖酵解的生理意义
(1)在无氧和缺氧条件下,作为糖分解功能的补充途径
(2)在有氧条件下,作为某些组织细胞主要的供能途径:
①成熟红细胞(没有线粒体,不能进行有氧氧化②神经、白细胞、骨髓、视网膜、皮肤等在氧供应充足时仍主要靠糖酵解供能。
2、简述糖异生的生理意义
(1)在饥饿情况下维持血糖浓度的相对恒定。
(2)补充和恢复肝糖原。
(3)维持酸碱平衡:
肾的糖异生有利于酸性物质的排泄。
(4)回收乳酸分子中的能量(乳酸循环)。
3、简述血糖的来源和去路血糖的来源:
(1)食物糖类物质的消化吸收;
(2)肝糖原的分解;(3)非糖物质异生而成。
血糖的去路:
(1)氧化分解功能;
(2)合成糖原;(3)合成其它糖类物质;(4)合成脂肪或氨基酸等。
4、糖酵解与有氧氧化的比较糖酵解:
反应条件:
供氧不足或不需氧;进行部位:
胞液;关键酶:
己糖激酶(或葡萄糖激酶)、磷酸果糖-1、丙酮酸激酶;产物:
乳酸、ATP;能量:
1mol葡萄糖净得2molATP;生理意义:
迅速供能,某些组织依赖糖酵解供能。
有氧氧化:
反应条件:
有氧情况;进行部位:
胞液和线粒体;关键酶:
己糖激酶等三个酶及丙酮酸脱氢酶系、异柠檬酸脱氢酶、柠檬酸合酶、α-酮戊二酸脱氢酶系;产物:
H2O、CO2、ATP;能量:
1mol葡萄糖净得36mol或38molATP;生理意义:
是机体获取能量主要方式
5、在糖代谢过程中生成的丙酮酸可进入哪些代谢途径
(1)在供氧不足时,丙酮酸在LDH催化下,接受NADH+H的氢还原生成乳酸。
(2)在供氧充足时,丙酮酸进入线粒体,在丙酮酸脱氢酶系的催化下,氧化脱羧生成乙酰CoA,再经三羧酸循环和氧化磷酸化,彻底氧化生成CO2、H2O和ATP。
(3)丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸,后者经磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸,再异生成糖。
(4)丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸,后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸,可促进乙酰CoA进入三羧酸循环彻底氧化。
(5)丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸,后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸,柠檬酸出线粒体在细胞液中经柠檬酸裂解催化生成乙酰CoA,后者可作为脂肪酸、胆固醇等的合成原料。
(6)丙酮酸可经还原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。
决定丙酮酸代谢的方向是各条代谢途径中关键酶的活性,这些酶受到别构效应剂与激素的调节。
简述三羧酸循环的要点及生理意义
要点:
(1)TAC中有4次脱氢,2次脱羧,1次底物水平磷酸化
(2)TAC中有3个不可逆反应,3个关键酶;(3)TAC的中间产物包括草酰乙酸在内起着催化剂作用,草酰乙酸的回补反应释丙酮酸的直接羧化或者经苹果酸生成;(4)三羧酸循环一周共产生12ATP。
生理意义:
(1)TAC是三大营养素彻底氧化的最终代谢通路;
(2)是三大营养素代谢联系的枢纽;(3)可为其他合成代谢提供小分子前体(4)可为氧化磷酸化提供还原能量。
蛋白质
21、重组DNA技术常包括以下几个步骤:
分离制备目的基因-“分”,切割目的基因和载体-“切”,目的基因与载体的连接-“接”,将重组DNA导入宿主细胞-“转”,筛选并鉴定含重组DNA分子的受体细胞克隆-“筛”,克隆基因在受体细胞内进行复制或表达-“表”。
1、蛋白质的元素组成特点是什么?
怎样计算生物样品中蛋白质的含量?
蛋白质的元素组成特点是含N,平均含量为16%,可用于推算未知样品中蛋白质的含量:
100克样品中的蛋白质含量=每克样品含氮克数×6.25×100.2、何谓蛋白质的二级结构?
二级结构主要有哪些形式?
各有何特征?
蛋白质的二级结构是指蛋白质分子中某一段肽键的局部结构,也就是该段肽链主链骨架原子的相对空间位置,并不涉及氨基酸残基侧链的构象。
二级结构的主要形式有:
α-螺旋,β-折叠、β-转角、无规则卷曲。
特征:
(1)α-螺旋:
①主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋;②螺旋每上升一圈是3.6个氨基酸残基,螺距为0.54nm;③相邻螺旋圈之间形成许多氢键;④侧链基团位于螺旋的外侧。
(2)β-折叠:
①若干条肽链或肽段平行或反平行排列成片;②所有肽键的C=O和N-H形成链间氢键;③侧链基团分别交替位于片层的上、下方。
(3)β-转角:
多肽链180o回折部分,通常由四个氨基酸残基构成,借1、4残基之间形成氢键维系。
(4)无规则卷曲:
主链骨架无规律盘绕的部分。
3、何谓蛋白质的变性作用?
引起蛋白质变性的因素有哪些?
蛋白质变性的本质是什么?
变性
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- 酮体 生成 实验 报告